安徽歙县油茶林昆虫病原真菌物种多样性及其季节变化

为研究安徽歙县油茶林的昆虫病原真菌群落多样性,于2016-2017年对油茶林内自然罹病的昆虫标本进行分离和鉴定。结果表明,分离的昆虫病原真菌共计132株,鉴定为6属10种。球孢白僵菌Beauveria bassiana、环链棒束孢Isaria cateniannulata和细脚棒束孢I.tenuipes为歙县油茶林昆虫病原真菌的优势类群,3种昆虫病原真菌的数量占所有菌株的75.76%。同时对昆虫病原真菌物种的多样性研究表明,其物种数、多度、多样性指数、均匀度等指标在一年中变化不大。不同季节昆虫病原真菌数量变化较大,夏季菌株最为丰富,随着气温下降及降雨量的减少,菌株数量逐渐下降。本研究结果可为进一步开发生物农药奠定基础。     

茶园昆虫病原真菌群落组成及生态位

本文系统调查了安徽省石台县仙寓山粗放经营茶园昆虫病原真菌物种多样性和生态位特征。结果表明,在植被单一、干扰较多的茶园,昆虫病原真菌种群结构较为单一。共采集到116株标本,其中优势种群为环链棒束孢、球孢白僵菌和粉棒束孢,分别占总数的32.8%、27.6%和19.8%。分析了3种优势种昆虫病原真菌的时间和营养生态位。结果表明,环链棒束孢的时间生态位最大,粉棒束孢最小;球孢白僵菌营养生态位宽度最大,粉棒束孢营养生态位宽度最小。昆虫病原真菌之间以环链棒束孢和球孢白僵菌的时间生态位重叠度最大,为0.776,环链棒束孢和粉棒束孢的营养生态位重叠度最大,为0.785。可见,粗放经营茶园中环链棒束孢发生时间长,分布范围广,生存能力强。     

西双版纳自然保护区玫烟色棒束孢分布的时空动态及寄主多样性

为明确西双版纳自然保护区虫生玫烟色棒束孢的时空动态及寄主多样性，以期为玫烟色棒束孢的开发利用提供理论依据和材料。本研究于2017年7月—2018年9月，对西双版纳自然保护区石灰岩山季雨林、热带季雨林、季风常绿阔叶林、热带丛生竹林、暖热性针叶林5种生境中玫烟色棒束孢的发生季节、生境分布和寄主进行了调查研究，采用形态学和ITS序列对菌株进行种类鉴定。结果表明，在西双版纳自然保护区共采集玫烟色棒束孢674株。从时间动态来看，玫烟色棒束孢于当年10月至次年4月为发生流行期，12月或次年1月为发生高峰期。从空间分布来看，玫烟色棒束孢主要分布于热带丛生竹林和石灰岩山地雨林的低、高和中海拔地带，分别采集到150和133、118、104株，相对丰度分别为22.3%、19.7%、17.5%和15.4%；热带季雨林和季风性常绿阔叶林中相对较少，分别采集到77和73株，相对丰度分别为11.4%和10.8%；暖热性针叶林生境仅采集到19株，相对丰度为2.8%。从海拔分布来看，石灰岩山季雨林生境中，玫烟色棒束孢在高、中、低海拔生境中分布的差异不明显，低海拔生境中菌株数量略高于中海拔和高海拔生境。玫烟色棒束孢的寄主节肢动物有2纲12目，包括昆虫纲11目，蛛形纲1目，其中优势寄主为鳞翅目和膜翅目，其相对丰度分别为40.4%和36.4%。该研究为玫烟色棒束孢生物多样性研究提供了重要内容，也为害虫生防高毒力玫烟色棒束孢菌株筛选提供材料。     

基于环介导等温扩增技术的玫烟色棒束孢可视化检测

玫烟色棒束孢Isaria fumosorosea是一种重要的虫生真菌，已成为微生物源农药的一个要资源。由于缺乏有效手段，无法对罹病害虫中玫烟色棒束孢进行大量、快速、准确的检测，严重制约了该生防菌株防治效果的科学评价。本研究通过环介导等温扩增（LAMP）技术的引物设计和体系优化，建立了玫烟色棒束孢菌株可视化的LAMP检测方法。该检测方法特异性强，准确率高，与其他常见生防菌株和病原菌无交叉反应；检测时间短，60 min可得到阳性结果；灵敏度高，是常规PCR方法的100倍。该方法的建立为田间条件下玫烟色棒束孢菌株的毒力测定与安全性评价提供了新技术。     

西双版纳自然保护区白僵菌属虫生真菌多样性

为掌握西双版纳自然保护区内白僵菌属虫生真菌资源,为害虫生防真菌资源及生防制剂开发提供依据,本研究于2016年11月-2018年1月,对云南西双版纳自然保护区白僵菌属虫生真菌资源进行了系统调查,采用形态和分子测序技术进行白僵菌种类鉴定,并用物种多度、Shannon-Wiener指数H和Pielou均匀度指数对白僵菌属虫生真菌物种多样性和生境及海拔分布特征进行了研究。结果表明,在西双版纳自然保护区设置的60个样方中共采集白僵菌属虫生真菌侵染罹病虫体207头,经过分离培养和鉴定获得白僵菌属虫生真菌5种,分别为球孢白僵菌、布氏白僵菌、多形白僵菌、B.loeiensis和猫棒白僵菌,其中球孢白僵菌为优势种,相对多度为91.3%,其次为布氏白僵菌,其相对多度为6.3%,B.loeiensis相对多度为1.44%,多形白僵菌和猫棒白僵菌相对多度相同均为0.48%。从白僵菌属虫生真菌种类的生境分布特征来看,热带石灰岩山季雨林和热带季风常绿阔叶林白僵菌的种类、数量及寄主昆虫的多样性均高于热带丛生竹林和热带季雨林保护区。从白僵菌属虫生真菌种类的海拔分布特征来看,低海拔区白僵菌物种数和菌株数均明显高于高海拔和中海拔区,且低海拔区Shannon-Wiener指数均较高于中海拔和高海拔区,而均匀度从高到低依次是低海拔、高海拔和中海拔。     

玫烟色棒束孢菌株间的rDNA多态性

本文基于ITS-5.8S rDNA序列对来自国内外的玫烟色棒束孢不同菌株进行了系统发育及DNA多态性研究。系统发育分析表明,玫烟色棒束孢全部被试序列都分离为两个完全独立的支系,分别为聚在分支CladeⅠ-1中且支持率为94%的菌株和聚在分支CladeⅡ-1内且支持率为90%的菌株;为了确定上述2支系的真正分类地位,对所试玫烟色棒束孢与爪哇棒束孢菌株进行了多态性研究,获得8个单倍型,单倍型多样性Hd=0.65,核苷酸多样性Pi=0.04,以及2个不同的DNA序列保守区等。通过系统发育及多态性研究结果表明所试玫烟色棒束孢无论在种的水平上或假定的种群水平上,其遗传多样性都较大、分化明显,它们的差异已超出了种的边界,分支CladeⅠ-1中的菌株是典型的玫烟色棒束孢,而CladeⅡ-1中的玫烟色棒束孢菌株可能是爪哇棒束孢。     

13种常用农药和玫烟色棒束孢SCAU-IFCF01的相容性研究

为了研究常用农药和生防真菌玫烟色棒束孢Isaria fumosorosea之间的相容性,本文测定了13种常用农药对玫烟色棒束孢孢子萌发、菌丝生长及产孢量的影响。试验结果表明,杀虫剂与玫烟色棒束孢的相容性优于杀菌剂。其中,高效氯氰菊酯与玫烟色棒束孢相容性最好,在常规浓度下,对玫烟色棒束孢孢子萌发和菌丝生长的抑制率分别只有2.42%和1.62%,对产孢基本无抑制作用,苏云金芽胞杆菌和氯氰菊酯与玫烟色棒束孢也有较好的相容性,二者在常规使用浓度下对孢子萌发、菌丝生长、产孢量的抑制率分别为6.05%、2.83%、22.41%和16.3%、7.81%、16.67%。高效氯氟氰菊酯、氟啶脲、丙溴磷与玫烟色棒束孢有一定的相容性。丙环唑、百菌清、戊唑醇、木霉菌、阿维菌素、甲维盐与玫烟色棒束孢的相容性则相对较差。     

应用虫生真菌防治烟粉虱的现状

发虱Bemisia tabaci属世界性分布的大害虫。在一定条件下虫生真菌是控制烟粉虱种群的最有效天。本文就几种常见虫生真菌：蜡蚧轮枝菌Vericillium lecanii、座壳孢Aschersonia spp.、玫烟色拟青霉Paecilomyces fumosoroseus、球孢白僵菌Beauveria bassiana等防治烟粉虱的应用现状以及它们与其它敌的关系进行了综述，以期对烟粉虱虫生真菌的合理利用提供参考。     

一些拟青霉菌株对小菜蛾致病性的初步研究

研究了29株拟青霉和1株白僵菌对小菜蛾的致病性。结果表明不同菌株对小菜蛾的致病性有明显差异,其中玫烟色拟青霉,环链拟青霉和球孢白僵菌对小菜蛾感染致死效果最好。另外,分离自虫体的拟青霉菌株对小菜蛾具有较好的致病性,而来自土壤的菌株对小菜蛾无致病性或仅具微弱致病性。环链拟青霉对小菜蛾的致病性与产孢量存在一定的相关性,与地理来源无明显相关性。     

土壤虫生真菌对荔枝蝽象的生物活性

荔枝蝽Tessaratom apapillosa Drury是荔枝和龙眼的主要害虫之一,发展荔枝蝽的生物防治技术是无公害化生产荔枝、龙眼的基本保障.虫生真菌在害虫自然种群密度控制中发挥着重要作用,但是有关利用虫生真菌防治荔枝蝽的研究不多.本研究分离了荔园土壤中的虫生真菌,测定了球孢白僵菌Beauveria bassiana、金龟子绿僵菌Metarhizium anisopliae、玫烟色棒孢菌Isaria fumosorosea和爪哇棒孢菌Isaria javanicus 4个菌种的40株菌株对荔枝蝽的致病能力,筛选出2个防效较好的菌株Bb07和Ma03,其LC50值(14d)分别为2.20×106分生孢子·mL-1和2.34×106分生孢子·mL-1,LT50值(1×107分生孢子·mL-1)分别为6.1d和6.6d.田间试验中,当使用浓度为1×108分生孢子·mL-时,菌株Bb07和Ma03对荔枝蝽均表现出较好的防效,施菌后14d的虫口减退率分别为90.78%和90.34%.     

湿度对球孢白僵菌和玫烟色虫草田间防治棉蚜效果的影响

本文以超低量喷雾的方式探究了在环境湿度调控下,球孢白僵菌Beauveria bassiana Bb202和玫烟色虫草Cordyceps(=Isaria)fumosorosea Ifu13a在不同应用剂量下对棉蚜Aphis gossypii的田间防效.结果表明,提高环境湿度可明显提高两种昆虫病原真菌对棉蚜的防效.在田间防...     

木耳菌糠培养球孢白僵菌的条件筛选及优化

白僵菌是一种虫生真菌,目前在农林害虫防治中取得了明显的效果。为了进一步促进白僵菌农药的发展,开发低成本的白僵菌发酵方法或优化其发酵条件是不可缺少的一环。本文尝试以木耳菌糠作为主要培养基液体发酵球孢白僵菌,通过单因素试验和正交试验确定菌糠培养基配方并优化发酵条件。结果表明,废弃菌糠适宜作为球孢白僵菌的主要培养基,当料液比为1:4,补充0.3%硫酸锰、0.5%硝酸铵,接菌量10%,培养温度为25 ℃,培养时间为4 d时,球孢白僵菌的产孢量达到了2.0×10⁹个孢子/mL。研究证实了木耳菌糠培养球孢白僵菌的可行性,希望为低成本发酵其他生防菌提供新思路。     

球孢白僵菌剂量对西花蓟马偏好温度的影响

球孢白僵菌是一种对西花蓟马具高致病力的重要生防真菌。球孢白僵菌感染改变了西花蓟马的偏好温度。探讨这一现象对于提高球孢白僵菌对西花蓟马的防治效果具有重要意义。本研究分析了西花蓟马偏好温度随球孢白僵菌剂量和感染时间的变化趋势。结果表明，在各观察时间点（24～120 h，48 h除外），感染高剂量球孢白僵菌的西花蓟马偏好温度显著低于被低剂量真菌侵染的个体。与健康西花蓟马的偏好温度（24℃±0.5℃）相比，无论是高剂量还是低剂量真菌，染菌蓟马偏好温度均随时间推移呈先下降后上升的趋势。染菌0～48 h时，蓟马的偏好温度逐渐下降。染菌后48～120 h，偏好温度回升。感染高剂量球孢白僵菌的蓟马体内真菌基因拷贝数大于被低剂量真菌感染的个体，随染菌时间的推移，差异进一步加大。本研究将为建立西花蓟马的高效防控体系提供理论支持。     

水稻二化螟病原真菌鉴定及其致病力

通过对吉林本地自然越冬代罹病的水稻二化螟幼虫进行分离纯化，筛选出两个病原真菌JL003和JL005，采用形态特征比较和rDNA-ITS序列构建系统树进行分析，并采用浸渍法研究了2个菌株对二化螟3龄和6龄幼虫的毒力作用。鉴定结果表明，菌株JL003和JL005分别为渐狭蜡蚧菌和球孢白僵菌，其中，渐狭蜡蚧菌侵染水稻二化螟为国内新近报道。致病力研究结果表明，渐狭蜡蚧菌JL003对二化螟3龄和6龄幼虫的致死率为53.0%和46.0%，球孢白僵菌JL005对3龄和6龄幼虫的致死率为94.0%和93.0%。对低龄和高龄二化螟幼虫，菌株JL005对二化螟的致死率均明显好于菌株JL003，表现出更大的生物防治潜能。     

西双版纳自然保护区不同生境虫生细脚棒束孢生态分布及发生规律

为弄清西双版纳热带雨林自然保护区不同生境中虫生细脚棒束孢的分布规律和季节变化规律，为害虫生防真菌资源利用及生防制剂开发提供依据。本试验对西双版纳自然保护区石灰岩山季雨林不同海拔地带、热带季雨林、季风常绿阔叶林、热带丛生竹林、暖热性针叶林5种不同生境中细脚棒束孢进行了系统调查和研究，并对标本进行形态学和分子鉴定。结果显示，在5种不同生境中，共采集到细脚棒束孢标本1061株，其主要分布于石灰岩山地雨林低海拔和中海拔地带，分别有272和267株，相对丰度分别为25.64%和25.16%；其次是季风常绿阔叶林和石灰岩山季雨林高海拔地带，分别有179和150株，相对丰度分别为16.87%和14.14%；分布相对较少的为热带丛生竹林和热带季雨林，分别有96和94株，相对丰度分别为9.05%和8.86%。暖热性针叶林分布最少仅3株，相对丰度为0.28%。从同一生境的石灰岩山地雨林不同海拔分布来看，细脚棒束孢主要分布于低海拔和中海拔，而高海拔相对较少。从季节性分布和发生规律来看，西双版纳自然保护区细脚棒束孢的流行期为降水量较少的凉雾季10月至次年1月和干热季节3月至5月。该研究将为热带雨林生态系统细脚棒束孢分布多样性及资源利用提供一定理论依据。     

生长调节剂对球孢白僵菌产孢和分生孢子性能的影响

球孢白僵菌在农林害虫生物防治中发挥着重要的作用,发酵周期和产孢量是其发酵工艺中的主要评价指标。本试验研究了生长调节剂对球孢白僵菌JG-17菌株产孢的促进作用。结果表明,通过外源法在菌落表层施用微量乙烯利,可以明显提高菌株JG-17的产孢量,以对8日菌龄表层施用100 ng/cm²乙烯利处理最佳,产孢量为未处理对照的6.28倍。经乙烯利处理后形成的分生孢子,其耐热性、抗紫外线能力和对靶标害虫的杀虫活性与未处理对照没有显著性差异。在白僵菌培养过程中科学施用乙烯利,可有效提高白僵菌的产孢效率,研究为真菌生物农药工业化生产的效率提升提供了新的思路。     

球孢白僵菌对小菜蛾的侵染相关基因分析

本文研究球孢白僵菌对小菜蛾的侵染相关基因,为提高球孢白僵菌的致病力提供基因靶点,从而提高球孢白僵菌对小菜蛾的防治效果。通过室内生物测定,筛选出球孢白僵菌对小菜蛾的高毒力菌株;采用新一代Solexa高通量测序技术对纯培养的球孢白僵菌和球孢白僵菌侵染小菜蛾48 h的虫菌混合样品分别进行转录组测序,筛选差异表达基因;结合生物信息学方法分析差异表达基因涉及的基因功能及细胞通路等;应用荧光定量PCR技术验证20个基因的差异表达。转录组测序结果显示,纯培养的球孢白僵菌与侵染小菜蛾幼虫48 h的球孢白僵菌转录组对比分析共得到8383个差异表达基因,其中显著差异表达基因716个,上调基因350个,下调基因366个。本研究筛选获得的差异表达基因,特别是上调表达的基因可能与球孢白僵菌对小菜蛾的侵染有关。GO二级分类表明,DEGs被注释到26个GO term中,包括11个生物学过程,8个细胞组分和7个分子功能;Pathway分析表明共有12个Pathway,93个上调基因和61个下调基因参与了这些途径。深入分析发现,胞外丝氨酸富集蛋白、细胞壁蛋白、胞外双加氧酶、铁转运蛋白、细胞壁半乳糖抗原蛋白等在侵染过程中与毒力相关的基因均具有显著性差异表达。研究结果为阐明球孢白僵菌对小菜蛾的侵染机制提供了基础。