温度和盐度急性胁迫对岩牡蛎存活及免疫指标的影响

为探究岩牡蛎(Crassostreanippona)对不同温度和盐度急性变化的适应性,本研究通过将岩牡蛎从暂养环境(27℃,盐度32)直接转移至5个温度梯度(15℃、19℃、23℃、31℃、35℃)和6个盐度梯度(16、20、24、28、36、40),研究了急性胁迫对岩牡蛎超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、碱性磷酸酶(AKP)、溶菌酶(LSZ)活性、丙二醛(MDA)含量及存活的影响。温度实验结果显示,15～31℃组岩牡蛎存活率均高于71.11%,35℃组存活率最低(34.44%),而15℃组免疫指标活性均受到明显抑制, MDA含量在144 h时达到最大值(46.93 nmol/mg prot);温度19℃、23℃、31℃组SOD、CAT、AKP和LSZ活性及MDA含量受应激显著上升后均逐渐恢复至对照水平。盐度实验结果表明, 40组盐度变化对岩牡蛎存活抑制明显,显著低于其他处理组(P0.05),适宜岩牡蛎存活的盐度变化为20～36组;盐度16组SOD、CAT、AKP和LSZ活性144 h时均显著低于对照组(P0.05), MDA含量与胁迫时间成正相关最终达到最大值(45.76 nmol/mg prot)。研究表明,温度和盐度突变均会对岩牡蛎5项免疫指标和存活率产生显著影响,岩牡蛎对温度19～31℃组和盐度20～36组突变具有较强的适应能力。     

溶藻弧菌对三疣梭子蟹溶菌酶和磷酸酶活性的影响

将健康的三疣梭子蟹（平均体重176±21.3g）分别注射生理盐水和溶藻弧菌,在感染后0、24、48和72h分别采集不同处理组梭子蟹的血淋巴、肌肉和肝胰腺组织,测定其中的溶菌酶（LSZ）、酸性磷酸酶（ACP）及碱性磷酸酶（ALP）活性,研究溶藻弧菌对三疣梭子蟹体内免疫相关酶活的影响。结果表明,感染组梭子蟹血淋巴LSZ活性在感染后24h显著高于对照组（P〈0.05）,随后活性显著降低（P〈0.05）;肌肉和肝胰腺组织中LSZ活性在感染24h有稍微上升的趋势,但是随着感染时间的延长其活性又逐渐下降,且在感染48h后分别显著低于对照组（P〈0.05）。感染组梭子蟹不同组织中ACP和ALP酶活随着感染时间的延长均呈下降的趋势,且感染48h后显著低于对照组（P〈0.05）。试验表明,三疣梭子蟹感染溶藻弧菌后对机体免疫相关酶活指标的影响较大,导致机体免疫防御能力的减弱。     

弧菌和大肠杆菌感染对杂色鲍无细胞血淋巴中几种酶活力的影响

将杂色鲍(Haliotis diversicolor)注射感染大肠杆菌(E.coli)和副溶血弧菌(Vibrio parahemolyticus),在感染后第4、8、12、24、48、96、192小时分别采集无细胞血淋巴,测定碱性磷酸酶(ALP)、酸性磷酸酶(ACP)和超氧化物岐化酶(SOD)的活力.结果表明,弧菌组ACP的活力在第24小时比对照组显著增高;弧菌组的ALP与对照组相比,在第8小时显著增高,第48小时极显著升高,第96小时显著下降.弧菌组的SOD活力在24小时与对照组相比显著降低.而大肠杆菌组ALP、ACP和SOD的活力跟对照组相比,各个时相均无显著差异.由此可见,杂色鲍对致病菌和非致病菌可能有着不同的免疫机制.     

不同浓度诺氟沙星对中国对虾非特异性免疫酶活的影响

向对虾配合饲料中添加不同剂量的诺氟沙星投喂中国对虾7d,分析不同时间诺氟沙星对中国对虾肌肉及鳃溶菌酶(LSZ)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、碱性磷酸酶(AKP)及酸性磷酸酶(ACP)活性的影响.结果表明,15mg/kg诺氟沙星可以显著抑制中国对虾肌肉SOD活力(P＜0.05),而对鳃SOD活力则整体呈现促进作用,该浓度组肌肉和鳃CAT及LSZ活力整体高于对照组,而AKP和ACP活力则显著低于对照组(P＜0.05);30 mg/kg诺氟沙星对中国对虾肌肉SOD活力呈现先抑制后促进的作用,而对鳃SOD活力则整体呈现抑制作用,该组肌肉和鳃CAT活力显著高于对照组(P＜0.05),肌肉LSZ活力呈现先下降后上升的趋势,而鳃LSZ活力则与对照组没有显著差异;向饲料中添加60 mg/kg诺氟沙星对中国对虾肌肉、鳃SOD、CAT、LSZ活力整体呈现促进作用,而对AKP和ACP活性则呈现显著抑制作用(P＜0.05).     

病毒感染后杂色鲍部分血清免疫因子的变化

对杂色鲍(HaliotisdiversicolorReeve)进行病毒悬液和PBS(对照)注射感染,研究其血清免疫因子SOD、ACP、AKP、MPO活性的变化,并对实验结果进行统计学分析。结果表明,(1)注射病毒悬液组SOD活性变化为逐渐上升,至8h后达到最高点,然后逐渐下降;对照组SOD活力呈下降趋势,8h后上升,12h后恢复至初始水平,二者结果差异均为显著或极显著(P<0 05或P<0 01)。(2)注射病毒悬液组ACP与AKP活性的变化为:36h前变化不大,48h后明显上升;对照组ACP和AKP活性变化不大,二者结果除了第48小时外,差异均不显著(P>0 05)。(3)注射病毒悬液组MPO活性在第1小时内上升,然后逐渐下降,第8小时下降到最低点,随后逐渐上升;对照组在第1小时内下降,然后逐渐上升,第12小时升至最高点,然后逐渐下降,48h后与正常鲍活性基本一致。t检验显示,这两组结果在第1、4、8、24、36、48h差异显著或极显著(P<0 05或P<0 01),在第2、12小时差异不显著。结果显示,在人工感染病毒48h内,杂色鲍体内的免疫因子发生了明显的变化,血清中SOD活性降低,ACP及AKP活性显著升高,MPO活性显著升高。     

木聚糖酶对尼罗罗非鱼部分非特异性免疫指标及生长的影响

尼罗罗非鱼(Tilapia nilotica)初始体质量为(106.16±16.77)g,以小麦基础饲料为对照,基础饲料中分别添加不同水平的木聚糖酶(0.05%、0.10%、0.15%)作为实验饲料.每个处理设5个重复,每个重复放养40尾雄性罗非鱼.采用饱食方式饲喂75 d后测定罗非鱼白细胞吞噬率(PP)、吞噬指数(PI),血清、肝胰脏和鳃的溶菌酶(LSZ)活力超氧化物歧化酶(SOD)活力和尼罗罗非鱼体质量.结果表明,木聚糖酶0.05%组、0.10%组、0.15%组的PP值极显著高于对照组(P＜0.01),PI值与对照组无显著差异(P＞0.05);0.05%组、0.10%组、0.15%组的血清LSZ活力较对照组分别提高13.85%、23.62%和17.23%(P＜0.01).0.10%组肝胰脏的LSZ活力为0.379 U/mL,极显著高于对照组(P＜0.01),0.15%组肝胰脏LSZ活力显著高于对照组(P＜0.05).0.05%组、0.10%组、0.15%组鳃LSZ活力均极显著高于对照组(P＜0.01);添加木聚糖酶对血清和肝胰脏的SOD活力无显著影响(P＞0.05),但0.10%组鳃SOD活力显著高于对照组(P＜0.05);0.05%组和0.10%组的增重率较对照组分别提高8.29%和17.45%(P＜0.01),0.15%组的增重率与对照组相比无统计学差异(P＞0.05).结论认为,在尼罗罗非鱼小麦基础饲料中适量添加木聚糖酶可以提高其非特异性免疫功能,促进其生长.     

β-1,3-葡聚糖及其羧甲基衍生物对海湾扇贝免疫功能的影响

对海湾扇贝注射酵母β-1，3-葡聚糖及不同取代度的羧甲基葡聚糖（包括CMG1、CMG2、CMG3和CMG4，取代度分别为0．335，0．556，0．732和0．857），分别于注射后24、48和72h测定血清蛋白含量及血清和血细胞中酚氧化酶（PO）、超氧化物歧化酶（SOD）、溶菌酶（LSZ）活力，比较β-1，3-葡聚糖及羧甲基葡聚糖对扇贝免疫功能的影响。结果显示：1）与对照组相比，葡聚糖组血清蛋白含量无显著变化，CMG2、CMG3和CMG4组注射后48h有显著提高；2）葡聚糖和CMG4可以迅速持久地增加扇贝血清PO活力，CMG的取代度越大，提高血细胞PO活力的能力越强；3）在提高扇贝血淋巴SOD活性作用中，CMG4组效果要优于其余试验组；4）CMG4组注射后24、48h，血清LSZ活力分别有极显著和显著提高，72h后所有试验组与对照组无显著差异，CMG3组注射后24h血细胞LSZ活力极显著增加，CMG4组注射后24、48和72h有显著提高。表明羧甲基化不但提高了葡聚糖的水溶性，而且影响其对扇贝的免疫增强效果，取代度为0．857的CMG4对扇贝的免疫增强效果最为显著。     

温度胁迫对大鳞副泥鳅抗氧化与非特异性免疫指标的影响

为研究大鳞副泥鳅(Paramisgurnus dabryanus)对温度胁迫的适应能力,开展了温度胁迫与恢复实验。设置对照组(22℃)、高温组(29℃)、降温组(15℃)与低温组(8℃)4个处理,在胁迫期的第1、2、4、8、12h与恢复期第4、8、12、24h取肝脏,测定其超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、溶菌酶(LZM)、碱性磷酸酶(AKP)活力和丙二醛(MDA)、血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)含量。结果显示,胁迫期内肝脏SOD和CAT活力均在温度骤变的影响下受到抑制,显著低于对照组水平(P0.05),MDA含量则显著升高(P0.05);恢复期内各实验组SOD和CAT活力均逐渐升高,MDA含量逐渐降低,至恢复期结束时,对照组与各实验组间无显著差异(P0.05)。温度骤变条件下,各实验组肝脏LZM与AKP活力显著降低(P0.05),恢复期内高温组LZM与AKP活力无明显变化,降温组与低温组LZM与AKP活力则逐渐升高,至恢复期结束时与对照组无显著差异(P0.05)。温度胁迫显著升高血清中AST与ALT含量(P0.05),恢复期内各实验组AST与ALT含量均呈下降趋势,至恢复期结束时,除高温组ALT含量外均降至对照组水平。研究表明,温度胁迫显著降低大鳞副泥鳅SOD、CAT、LZM与AKP活力,MDA与血清转氨酶AST、ALT含量升高,其中,高温胁迫会对大鳞副泥鳅非特异性免疫机能造成不可逆破坏,其他抑制均为可恢复的。     

盐度胁迫对许氏平鲇血液免疫酶活力的影响

研究了急性、慢性盐度胁迫对许氏平鲇体重及血液免疫相关酶活力的影响。慢性盐度胁迫实验表明，在盐度5的水体中，许氏平鲇体重增长率为负值，其余各盐度组（10、20、40）的生长指标与自然海水组（盐度33）差异不显著（P〉0．05）；随海水盐度的降低，许氏平鲇的溶茵酶活力逐渐上升，但当盐度降至5时，其活力与自然海水组无显著性差异；血液中超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）的活力随海水盐度降低呈逐渐上升趋势。急性盐度胁迫实验证实，在盐度5、10的急性胁迫初期，许氏平鲇血液的各项免疫酶活力波动较大。溶菌酶活力在胁迫24h时达到峰值，之后逐渐下降；血液SoD活力在96h检测过程中呈高低起伏变化趋势；血液CAT活力在胁迫初期持续降低，12h后逐步稳定在较低水平，显著低于胁迫前血液CAT活力（P〈0．05）。     

不饱和脂肪酸对黄鳝部分非特异性免疫和代谢指标的影响

在不含脂肪酸的黄鳝基础饲料中,按正交法[L9（3^4）]分别添加亚油酸（C18：2n-6）、亚麻酸（C18：3n-3）和EPA＋DHA（C20：5n-3＋C22：6n-3）,人工投喂饲养野生黄鳝（Monopterus albus）,31d后测定实验黄鳝血清溶菌酶（Lysozyme,LSZ）、总超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase,SOD）、过氧化氢酶（Catalase,CAT）及丙二醛（Malondiadehyde,MDA）含量和血细胞吞噬活性。评价实验组及对照组的非特异性免疫水平、自由基（Free radical,FR）代谢以及脂质过氧化状态。采用SPSS11.5软件,Duncan多重比较实验组间差异。实验结果显示,实验组血清LSZ活性均有不同程度的提高,最高为94.90U/mL（P〈0.05）;血细胞吞噬率为2.6%-11.47%,吞噬指数介于0.02-0.227之间,实验组比对照组血细胞吞噬率和吞噬指数显著提高（P〈0.01）;血清SOD及CAT活性分别在116.95-333.44U/mL及9.48-17.81U/mL之间,无显著差异（P〉0.05）,但MDA含量比对照组有不同程度的下降,其中第4组MDA为6.48nmol/mL,有极显著差异（P〈0.01）。结果表明：添加不饱和脂肪酸后,黄鳝血清LSZ活性和血细胞吞噬能力增加最明显的组合为C18：3n-3、C18：2n-6和EPA＋DHA,添加量分别为1.30%、1.55%和0.25%,可显著增加黄鳝非特异性免疫功能,而此时血清中FR代谢水平处于相对平衡状态。     

盐度和溶解氧对刺参非特异性免疫酶活性的影响

测定了不同盐度(20、25、30、35、40)和不同溶氧水平(充空气,DO 7~9mg/L)充纯氧,DO15~20mg/L;不充气,DO 2~5mg/L)对刺参体腔液中酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)、溶菌酶(LZM)和超氧化物歧化酶(SOD)活性变化的影响。盐度试验结果表明,盐度急性变化会引起刺参体腔液ACP、AKP、LZM活性的升高和SOD活性降低,其中第10天时盐度对酶活性的影响最大。溶氧试验显示,过饱和溶氧(DO 15~20mg/L)可使刺参体腔液ACP、AKP、LZM、SOD活性维持在较高水平,不充气组(DO 2~5mg/L)刺参体腔液中ACP、AKP、LZM活性出现短暂升高。恢复性试验中,盐度20、25组对AKP活性和盐度20、40组对SOD活性的影响未恢复到初始水平,其余实验组均能恢复至初始水平,说明低盐对刺参免疫力的影响较大。充纯氧组刺参的AKP活性显著高于充空气组,表明高溶解氧水平在一定程度上提高了刺参免疫力。     

光合细菌PS2对尖吻鲈的生长、消化酶及非特异性免疫酶的影响

研究了光合细菌对尖吻鲈（Latescal carifer）的生长、消化酶及血清免疫酶活性的影响。把浓度为8×10^8cfu·mL^-1的荚膜红假单胞菌（Rhodopseudomonas capsulate）的液体制剂分别以0．0％（对照组）、0．5％、1．0％和1．5％的比例添加到饲料中,投喂初始体质量为（10．95±0．25）g的尖吻鲈50d。鱼的增重率、特定生长率、成活率及饲料系数在组间均没有显著性差异（P〉0．05）。肝蛋白酶、肠淀粉酶及胃淀粉酶在1．0％组显著高于对照组（P〈0．05）;肠蛋白酶在1．5％组显著低于1．0％组（P〈0．05）,但试验组与对照组间没有显著性差异（P〉0．05）;幽门垂的消化酶在1．5％组显著高于其他各组（P〈0．05）。血清碱性磷酸酶（AKP）、过氧化物酶（POD）和超氧化物歧化酶（SOD）的活性在组间均没有显著性差异（P〉0．05）。结果表明,该株光合细菌对尖吻鲈的生长及非特异性免疫力没有显著影响,但在1．5％组能显著促进其幽门垂消化酶的活性,在1．0％组显著促进肝蛋白酶及肠和胃淀粉酶的活性。     

WSSV＋斑节对虾的血清免疫相关酶对人工感染WSSV粗提液的反应

用含3×103拷贝·g^-1、6×1062拷贝·g^-1和2×10^2拷贝·g^-1的对虾白斑综合征病毒（white spot syndrome virus,WSSV）粗提液和PBS液（对照）注射感染病毒携带量约1×10^5拷贝·g^-1的斑节对虾（Penaeusmonodon）,分别于第15分钟、第30分钟、第1小时、第3小时、第6小时、第12小时、第24小时、第48小时、第72小时取样,研究了WSSV感染对斑节对虾血清内酸性磷酸酶（acidphosphatase,ACP）、碱性磷酸酶（alkalinephospha—tase,AKP）、酚氧化酶（phenoloxidase,PO）、过氧化物酶（peroxidase,POD）和超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活性的影响。结果表明,在3种感染浓度下ACP、AKP、SOD活性总体呈现先上升后下降随后上升的趋势,其中SOD活性后期水平显著高于初期;PO、POD活性总体呈现先下降后上升随后下降最后上升的趋势,但PO后期活性水平与初期相当,而POD后期活性水平显著高于初期。各免疫相关酶的反应强度与WSSV的感染浓度存在一定关系,除ACP外其余4种酶的活性变化均以6×10^2拷贝·mL^-1浓度组最为敏感。PBS组5种免疫酶活性变化幅度均显著小于3种WSSV浓度感染组。     

密度胁迫对凡纳滨对虾稚虾免疫指标及生长的影响

将体长为（3.59±0.26）cm的凡纳滨对虾（Litopenaeus vannamei）按1 800尾.m-3、1 500尾.m-3和1 200尾.m-3的密度分别饲养在注水0.3 m3的圆形玻璃纤维桶（容量为0.5 m3）中30 d,检测了基本水质因子、对虾肝胰腺和肌肉组织中的酚氧化酶（PO）活力、超氧化物歧化酶（SOD）活力、抗菌活力（Ua）、碱性磷酸酶（AKP）活力、体质量增长和成活率,研究了不同放养密度对凡纳滨对虾稚虾免疫指标及生长的影响。统计分析发现,试验过程中水体理化因子均在适宜范围,各处理间水质因子的差异不显著;对虾的PO活力、Ua和AKP活力均随着密度的增加而降低,SOD活力则反之;对虾的体质量增长、体质量特定增长率和成活率随着密度的增加而降低,成活率差异显著（P〈0.05）。结果表明,凡纳滨对虾（体长〈4.8 cm或体质量〈1.2 g）在密度为1 200～1 800尾.m-3时,密度胁迫可明显影响其免疫指标和生长。     

金丝桃素、绿原酸和硬葡聚糖对草鱼幼鱼生长及免疫功能的影响

在水温（25±2）℃下，分别在基础饲料中添加不同剂量的硬葡聚糖（0．2％，G1组；0．4％，G2组）绿原酸（0．04％，G3组；0．08％，G4组）和金丝桃素（0．066％，G5组；0．132％，G6组），连续投喂放在1．0m×0．5m×1．0m网箱内、体质量110±5g的草鱼（Ctenopharyngodon idellus）幼鱼35d，以未添加者为对照组，探讨三种添加剂对草鱼幼鱼生长和免疫功能的影响。结果表明，三种添加济对草鱼幼鱼增重率和特定生长率均影响不显著，当饲料中添加0．08％的绿原酸时，草鱼幼鱼末体质量和肝体比显著增加（P〈0．05）；三种添加剂都可显著提高碱性磷酸酶活性，其中以添加0．08％的绿原酸效果最好，添加剂各组间碱性磷酸酶活性差异不显著（P〉0．05）；0．132％金丝桃素组的草鱼血清超氧化物歧化酶活性显著高于对照组，其它试验组与对照组差异不显著；饲料中添加0．2％硬葡聚糖可显著提高草鱼幼鱼血清溶菌酶含量（P〈0．05）；三种添加剂对草鱼幼鱼血清中丙二醛的含量影响不显著（P〉0．05）。     

壳聚糖硫酸酯提高异育银鲫抗嗜水气单胞菌感染的研究

对异育银鲫连续7 d分别投喂添加壳聚糖硫酸酯0.1%、0.2%和0.4%的配合饲料,然后用嗜水气单胞菌进行攻毒,以检测壳聚糖硫酸酯对病原菌的抗感染能力。实验结果显示,与对照组相比,试验组呈现出不同程度的免疫保护作用,其中以壳聚糖硫酸酯添加量为0.2%试验组的免疫保护效果最明显,异育银鲫的成活率达到46.67%;添加量为0.1%和0.4%试验组的成活率分别为23.33%和30.0%,而攻毒对照组100%死亡。然后将添加0.2%壳聚糖硫酸酯的饲料用同样的方式投喂异育银鲫,检测其血清和肝组织中的酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)、溶菌酶(LSZ)和超氧化物歧化酶(SOD)活性,并分析肝组织中各酶的基因表达量。结果显示,异育银鲫血清和肝组织中的ACP、AKP、LSZ和SOD活性均得到显著提高,且四种酶的活性均呈现随时间延长而先升高后降低的趋势,并于第三天达到峰值,血清和肝组织中ACP活性比对照组分别提高了54.62%和26.58%、AKP提高了37.61%和25.88%、LSZ提高了13.42%和35.43%、SOD提高了18.59%和54.62%;试验组异育银鲫肝组织中ACP、AKP和LSZ的mRNA表达量均得到显著提高,并随时间推移呈现出先升高后降低的趋势,于72 h到达峰值,而SOD的mRNA表达量与对照组相比没有显著变化。综合以上结果,壳聚糖硫酸酯能够显著提高异育银鲫非特异性免疫水平,增强抗嗜水气单胞菌的能力,表明壳聚糖硫酸酯可作为免疫增强剂用于鱼类疾病的预防与治疗。     

浒苔多糖对华贵栉孔扇贝血淋巴中SOD酶和溶菌酶活性的影响

于华贵栉孔扇贝体内注射了0.1%,0.25%,0.5%3个不同浓度的浒苔多糖后,在24,48,72 h分别测定了华贵栉孔扇贝血淋巴中SOD酶和溶菌酶活力。结果表明:0.1%和0.25%实验组扇贝血淋巴中SOD酶活仅在注射24h后显著地高于对照组(P<0.05),而0.5%实验组在注射24 h后极显著高于对照组(P<0.01),而且在注射48h和72 h后仍显著高于对照组(P<0.05);0.1%实验组对扇贝血淋巴中溶菌酶的作用无显著影响,而0.25%和0.5%实验组对扇贝血淋巴中溶菌酶活力在不同测定时间都表现出明显的促进作用,其中0.5%实验组对血细胞中溶菌酶作用效果极显著(P<0.01);说明浒苔多糖具有增强华贵栉孔扇贝免疫活性的作用。     

盐度对澳洲宝石鲈幼鱼3个免疫因子活力的影响

实验室条件下测定了在盐度0、5、8、11、13、16下胁迫20d,澳洲宝石鲈（Scortum barcoo）幼鱼内脏组织中超氧化物歧化酶（SOD）、碱性磷酸酶（AKP）及酸性磷酸酶（ACP）共3个免疫相关因子的活力变化。结果表明,盐度胁迫对澳洲宝石鲈3个免疫因子均有一定的影响,在不同盐度的胁迫下,随着盐度的升高,其SOD活性先下降、再升高;碱性磷酸酶（AKP）活性在低盐度胁迫下有短暂升高的过程,然后随着盐度的升高,其活性又明显下降;而酸性磷酸酶（ACP）则是随盐度的升高逐渐增大。试验结果说明低盐度胁迫能引起宝石鲈的应激反应,适当提高其免疫力,而大幅度升高盐度可显著影响其免疫力。