草鱼出血病细胞培养灭活疫苗的研究——疫苗株的免疫原性及其有效免疫剂量的比较

本文比较了疫苗株FR—854和FR—836—w的免疫原性,及其对三寸左右草鱼种的有效免疫剂量。疫苗株FR—854和FR—836—w均有较强的免疫原性,其保护力可达70％以上。但试验结果初步证明,FR—854疫苗比FR—836—w疫苗免疫原性更强。经统计分析,FR—854疫苗的免疫保护力可达88.9±12.0(6)％,血清中和抗体效价为160.5±58.9(6);而FR-838-W疫苗分别只有71.3±14.2(6)％、88.3±26.2(6);二者有显著的差异(0.05>P>0.01)。注射免疫三寸左右的草鱼种,FR—854的免疫剂量在3—5×10~(4.5)TCID_(50)/尾左右,FR—836—w在3—5×10~(7.5)TCID_(50)/尾左右,其免疫保护力可达80％左右,同时我们测得ER—854的半数免疫量为10~(5.1)TCID_(50)/ml。     

鱼用哈维氏弧菌亚单位缓释微球口服疫苗的免疫效果初探

通过复乳化-溶剂挥发技术,采用生物可降解性高分子材料聚-DL-乳酸-聚乙二醇共聚物(PELA)包裹哈维氏弧菌(Vibrio harveyi,Vh)重组外膜蛋白OmpK,制成缓释微球颗粒疫苗,口服免疫鲫鱼,测定其血清的凝集效价和相对免疫保护率.结果表明,制备的缓释微球疫苗直径＜10μm,且以粒径＜5μm的微球居多;微球中重组外膜蛋白OmpK包裹率达78.3%.鲫鱼口服微球疫苗2周后,血清抗体水平持续上升,第5周血清凝集抗体效价可达到与佐剂注射组相当的水平(28),抗体高峰期比注射组长1～2周,且降低较慢;免疫4周后用活菌攻击,口服组具有69.4%的相对免疫保护率,而对照组死亡率高达98%.结论为采用可生物降解的缓释微球作为鱼类亚单位口服疫苗的载体系统是可行的.     

尼罗罗非鱼无乳链球菌Sip蛋白乳酸菌活载体口服疫苗的研制及其免疫效果

链球菌病是威胁我国罗非鱼养殖产业健康发展的重要病害之一。为研制出免疫效果好、操作简便的罗非鱼链球菌病疫苗,本研究构建重组表达无乳链球菌Sip蛋白的穿梭质粒pNZ8124-Sip,通过酶切和测序验证后电转化乳酸乳球菌NZ9000,获得能够诱导重组表达无乳链球菌Sip蛋白的乳酸菌活菌载体疫苗。采用SPS-PAGE电泳摸索最佳诱导浓度和诱导时间以获得最大表达量,通过镍柱纯化目的蛋白并进行Western blot检测;利用不同浓度的重组乳酸菌活载体疫苗灌胃口服免疫尼罗罗非鱼,采用间接ELISA法测定免疫后血清抗体水平变化,通过人工腹腔注射感染无乳链球菌获得相对免疫保护率。研究结果显示,构建的重组乳酸乳球菌可通过nisin诱导表达大小为48 ku特异性蛋白,与目的蛋白大小一致;PAGE电泳显示,重组蛋白主要以可溶蛋白和包涵体2种形式存在,其中胞内可溶性蛋白浓度达7.65 mg/mL;诱导表达的最佳条件为100 ng/mL nisin诱导6 h;Western blot检测结果显示,诱导蛋白可与鼠抗His标签抗体特异性结合。口服免疫结果显示,中浓度组(2.24×10~(10) CFU/mL)和低浓度组(2.24×10~9 CFU/mL)免疫2次能够显著提高尼罗罗非鱼的血清抗体水平和抗无乳链球菌感染能力,中浓度免疫组的相对免疫保护率最高为41.0%。本研究可为罗非鱼链球菌病口服疫苗的研究奠定基础,具有广阔的应用前景。     

重金属对凡纳滨对虾血细胞吞噬活力的影响

为研究不同重金属离子对虾类血细胞的免疫抑制作用,凡纳滨对虾(Ltiopenaeus vannamei)血细胞在离体状态下暴露于重金属离子(Cd~(~(2+))、Hg~(2+)、Cu~(2+)和Zn~(2+)),浓度分别设置为10~(-3)～10~(-9) M,在胁迫6h后应用流式细胞术测定血细胞的吞噬活力。结果显示,与对照组相比,浓度为10~(-3)～10~(-5) M的Cd~(2+)和Hg~(2+)、10~(-3)～10~(-4) M的Cu~(2+)、10~(-3) M的Zn~(2+)均显著抑制了对虾血细胞的吞噬活力;当浓度为10~(-3) M时,Cd~(2+)、Hg~(2+)、Cu~(2+)和Zn~(2+)组的吞噬活力抑制率分别为79.6%,82.6%、68.1%和58.7%。这些结果表明,一定浓度的重金属离子对虾类血细胞吞噬活力具有免疫抑制作用,免疫抑制毒性强度依次为:Hg~(2+)>Cd~(2+)>Cu~(2+)>Zn~(2+),免疫毒性临界浓度分别为:Cd~(2+)和Hg~(2+)10~(-5) M、Cu~(2+)10~(-4) M、Zn~(2+)10~(-3) M。     

三联疫苗预防斑点叉尾(鱼回)细菌性疾病研究

对斑点叉尾鮰致病的3株细菌,经液体培养后灭活制备三联免疫疫苗,斑点叉尾鮰鱼苗通过浸泡接种,抗感染能力大为增强.经人工感染试验,对CR79-1-1和ST78-3-3菌免疫保护率达到91％～100％，对93-Ⅲ菌免疫保护率可达64％。     

重金属对罗氏沼虾血细胞活性和酯酶活力的影响

为探讨不同重金属对罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)血细胞的细胞毒性,取罗氏沼虾血淋巴,离体状态下分别暴露于不同浓度(10~(-9)~10~(-3) mol/L)的Cd~(2+)、Hg~(2+)、Cu~(2+)和Zn~(2+)环境中6 h,设置不添加重金属的对照组,应用流式细胞术测定细胞活性和胞内非特异性酯酶活力。结果显示,10~(-9)~10~(-6) mol/L的Cd~(2+)对细胞活性和酯酶活力均没有显著影响,Cd~(2+)浓度达到10~(-5) mol/L时,酯酶活力受到了显著的抑制,Cd~(2+)浓度达到10~(-4)和10~(-3) mol/L时,细胞活性和酯酶活力均显著下降;10~(-9)~10~(-6) mol/L的Hg~(2+)对细胞活性和酯酶活力均没有显著影响,Hg~(2+)浓度为10~(-5)~10~(-3) mol/L时,细胞活性和酯酶活力均显著下降;10~(-9)~10~(-5) mol/L的Cu~(2+)对细胞活性和酯酶活力均没有显著影响,Cu~(2+)浓度为10~(-4)~10~(-3) mol/L时,细胞活性和酯酶活力均显著下降;10~(-9)~10~(-5) mol/L的Zn~(2+)对细胞活性和酯酶活力均没有显著影响,Zn~(2+)浓度为10~(-4) mol/L时,酯酶活力显著下降,Zn~(2+)浓度为10~(-3) mol/L时,细胞活性和酯酶活力均显著下降。Cd~(2+)、Hg~(2+)、Cu~(2+)和Zn~(2+)对细胞活性的毒性临界浓度分别为10~(-4) mol/L、10~(-5) mol/L、10~(-4) mol/L和10~(-3) mol/L,毒性强度由高到低依次为Hg~(2+)、Cd~(2+)、Cu~(2+)、Zn~(2+)。Cd、Hg、Cu和Zn这4种重金属对罗氏沼虾血细胞活性和酯酶活力均具有明显的剂量效应;酯酶活力对重金属胁迫较细胞活性更为敏感,可作为虾类细胞毒理学研究的重要指标。     

网箱养殖鮸状黄姑鱼常见病害的防治

本文报道(鱼免)状黄姑鱼网箱养殖中常见病害及其防治方法。细菌性烂鳃病:流行季节为5—8月,危害各生长阶段鱼,川浓度10×10~(-6)漂白粉和10—20×10~(-6)呋喃西林分别浸洗3—5min,连续2、3次可治愈;细菌性竖鳞病:发病季节为4—12月,危害各生长阶段鱼,治疗用40×10~(-6)高锰酸钾浸洗5—10min及呋喃西林粉末涂抹患处,或注射链霉素15—20mg/kg鱼;肠炎病:发病水温18—30.5C,流行高峰25—30C,危害各生长阶段鱼,防治方法为,每100kg鱼用呋喃唑酮3—5g或氟哌酸5—10g拌饵投喂,连用4—6d;湖蛭病:流行于12—5月水温22C以下吋,寄生于各龄鱼,影响亲鱼的性腺发育,可用捕捉去除、淡水浸泡5—10min或5—6％盐水浸泡3—5min使虫体脱落;气泡病:发病季节5—9月,水温25—30.5C,危害体长150mm以下幼龟,将发病早期的个体移入水温较低、水质较清洁新鲜的水中,可使恢复正常。     

江蓠琼胶生产工艺中稀碱处理新方法的研究

本文提出了以酒精-水稀碱溶液处理原料江蓠以制造琼胶的新方法。溶液由酒精、水和氢氧化钠组成，其中酒精(工业用)与水的体积比约为4：1，氢氧化钠的浓度为2—6％(W／V)，以3—4％为最好。不论干湿原料，经此种溶液在78—80℃加热处理3小时或在较低的温度下处理较长时间，所制琼胶的产率和凝胶强度都比一般用碱的水溶液处理的工艺高。     

斑点叉尾 源嗜麦芽寡养单胞菌的脂质体疫苗研究

采用反相蒸发法制备嗜麦芽寡养单胞菌的脂质体疫苗,通过灌胃分别给予各组斑点叉尾(鮰)(Ictalurus punctatus)脂质体疫苗(Ⅰ-Ⅲ组)、嗜麦芽寡养单胞菌灭活苗(Ⅳ组)和生理盐水(Ⅴ组),每2周给药1次,共3次.于接种疫苗后第1天、14天、28天和第49天采集静脉血,测定白细胞的杀菌活性和血清抗体IgM含量的变化,并用细菌攻毒实验检测免疫保护效应.结果显示,本实验制备的脂质体疫苗粒径约为(0.9±0.3)μm,包封率为53.23%,与嗜麦芽寡养单胞菌灭活苗相比能显著增强斑点叉尾(鮰)吞噬细胞的杀菌活性和血清抗体:IgM水平.腹腔注射活菌攻毒后,脂质体疫苗免疫的Ⅰ-Ⅲ组的相对免疫保护率分别为34.8%、48.2%和55.4%;而嗜麦芽寡养单胞菌灭活苗免疫的Ⅳ组的相对免疫保护率仅有6.7%,生理盐水对照Ⅴ组保护率则为零.研究表明,口服脂质体疫苗对斑点又尾(鮰)具有显著的免疫保护效应,可作为预防嗜麦芽寡养单胞菌感染的疫苗.     

鳗弧菌灭活疫苗对牙鲆免疫效果的研究

制备鳗弧菌福尔马林灭活的全细胞疫苗，腹腔注射接种牙鲆，50d后进行第2次免疫。利用自制的兔抗鱼血清的抗血清通过ELISA实验检测了受免鱼特异性免疫应答水平，并通过攻毒实验，测定了疫苗对牙鲆的免疫保护率。结果表明，各免疫组血清抗体效价的最高值分别达1：512、1：2048、1：1024；各组受免鱼对人工攻毒均具有保护作用。用鳗弧菌攻毒后，免疫保护率分别达81．25％、87、50％、93．75％，而且发现受免鱼对副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)也表现了一定的交叉保护性，免疫保护率分别为46．15％、53．85％、53．85％。     

鳗弧菌O1/O2二价灭活疫苗免疫大菱鲆的抗体持续期和免疫保护期

本研究分析了鳗弧菌(Vibrio anguillarum)O1/O2血清型二价灭活疫苗免疫大菱鲆后的抗体持续期和免疫保护期。以鳗弧菌O1血清型VAM003株和O2血清型VAM007株为抗原制备了福尔马林灭活二价疫苗,将疫苗按照三种剂量(10~7 cells/尾、10~8 cells/尾、10~9 cells/尾)以腹腔注射途径免疫大菱鲆,在免疫后3 d、7 d、14 d、30 d、60 d、90 d、120 d、150 d,用血清凝集实验检测了免疫鱼血清的VAM003和VAM007抗体效价,用攻毒实验检测了疫苗的免疫保护率(RPS)。结果显示,在免疫后7 d三个剂量组的大菱鲆均产生了特异抗体,并获得27%～60%的RPS。三个剂量组大菱鲆的O1血清型抗体持续期分别90 d (10~7 cells/尾组)、150 d (10~8 cells/尾组)、150 d (10~9cells/尾组),而三个剂量组大菱鲆的O2血清型抗体持续期均150 d。三个剂量组的大菱鲆获得的免疫保护持续期均150 d;以RPS75%为有效免疫保护,各剂量组大菱鲆抵抗O1血清型病原感染的有效免疫保护期为:14～120d(10~7 cells组)、14～120 d (10~8 cells/尾)、14～150 d (10~9 cells/尾),抵抗O2血清型病原感染的有效免疫保护期为:14～60 d (10~7 cells组)、14～120 d (10~8 cells/尾)、14～120 d (10~9 cells/尾)。研究结果表明鳗弧菌二价灭活疫苗可为大菱鲆提供有效而稳定的免疫保护,获得的抗体持续期和免疫保护期为该疫苗的临床中试研究提供了基础。     

苏云金芽孢杆菌对黄河鲤血液免疫效果研究

研究了苏云金芽孢杆菌对黄河鲤血液免疫应答的影响.将苏云金芽孢杆菌按1.0×10~(11)、3.0×10~(11)、5.0×10~(11) cfu/kg 3个浓度添加在鱼用全价颗粒饲料中,投喂经嗜水气单胞菌疫苗免疫组(A_0～A_3)和未免疫组(B_0～B_3)黄河鲤,分别于0、15、30、40 d时检测各组黄河鲤白细胞吞噬活性、血清溶菌酶活性以及血清凝集抗体效价,并进行攻毒试验.结果表明:添加苏云金芽孢杆菌可使黄河鲤血液中白细胞吞噬活性和血清溶菌酶活性显著提高.添加组与对照组差异显著(P<0.05),添加浓度越高,血液白细胞活性和溶菌酶活性越强.免疫组与未免疫组白细胞吞噬活性差异不显著(P>0.05),而溶菌酶活性差异显著(P<0.05).在停止投喂后10 d,白细胞活性、血清溶菌酶活性逐渐下降,但差异不显著(P>0.05).添加苏云金芽孢杆菌还可提高黄河鲤的凝集抗体效价及攻毒后的存活率,其中,当菌株添加浓度为5.0×10~(11) cfu/kg时,受免疫的黄河鲤免疫保护率最高.即投喂苏云金芽孢杆菌对黄河鲤血液免疫应答有明显促进作用.     

长耳珠母贝人工育苗的研究

以解剖方法取得长耳珠母贝的成熟卵子和精子，在氨海水中诱导受精。在—定范围内，提高氨海水浓度可使受精率提高(达65％)，但正常发育率和孵化率有所下降；氨海水浓度以取0．14％为宜。用金藻或合浦珠母贝的精液(或两者混合)作为长耳珠母贝幼体前10天的饵料(10天后投喂扁藻)，能使育成率提高(达17．4％)，酵母不宜作为长耳珠母贝幼体的饵料。     

极北海带幼苗对氮、磷和铁营养元素需求的研究

将体长3～5 cm的极北海带幼苗充气饲养在过滤灭菌海水中,以NaNO_3和KH_2PO_4为氮源和磷源,氮、磷质量浓度[ρ(N)∶ρ(P)=10∶1]:NO_3~--N为0、0.5、2、4、6、8、10 mg/L,温度9℃,光周期为12L∶12D,12、24、36、48、60 h后,测定其叶绿素荧光参数(光系统Ⅱ最大荧光产量,F_v/F_m)及培养12、24、48 h后幼苗的表观光合速率,以研究极北海带幼苗生长的适宜营养盐质量浓度范围。另一试验中,以NaNO_3和NH_4Cl为氮源,KH_2PO_4为磷源,FeCl_3为铁源。NH_4~+-N(3 mg/L)组中Fe~(3+)质量浓度为0、1 mg/L。NO_3~--N(3 mg/L)组Fe~(3+)质量浓度为0、0.2、1、5 mg/L,0、4、10、24、48 h后测定幼苗培养液中的PO_4~(3-)-P、NO_3~--N、NH_4~+-N和Fe~(3+)质量浓度以及处理3 d后的极北海带幼苗的相对生长速率以探讨极北海带幼苗生长对铁与氮、磷的需求。试验结果显示,NO_3~--N:2～8 mg/L,PO_4~(3-)-P:0.2～0.8 mg/L[ρ(N)∶ρ(P)=10∶1,下同]内,极北海带幼苗的相对生长速率较高,表明该NO_3~--N、PO_4~(3-)-P质量浓度范围对其生长有利;NO_3~--N:2～4 mg/L,PO_4~(3-)-P:0.2～0.4 mg/L时,极北海带幼苗的F_v/F_m值和表观光合速率均较大,表明该NO_3~--N、PO_4~(3-)-P质量浓度范围对其光合作用较有利;铁(Fe~(3+),下同)质量浓度为0.2～1.0 mg/L时较有利于极北海带幼苗的生长,在铁质量浓度为1 mg/L时幼苗的相对生长速率最大;添加适宜质量浓度的铁营养盐后,10 h内显著促进极北海带幼苗对NO_3~--N和PO_4~(3-)-P的吸收,24 h后促进效果不明显,同时幼苗对铁的吸收也在10 h内基本达到饱和;5 mg/L的高铁质量浓度对幼苗吸收NO_3~--N和PO_4~(3-)-P有抑制作用,添加铁与否对幼苗吸收NH_4~+-N无显著影响(P0.05)。     

多效价载体疫苗免疫大菱鲆效果评价

采用注射与浸泡2种方法,对构建的多效价载体疫苗MVAV6203A-1进行了免疫保护效果和血清效价的研究.结果显示,用多效价载体疫苗注射免疫大菱鲆(Scophthalmus maximus),可同时获得对鳗弧菌(Vibrio anguillarum)和嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)的免疫保护效果,免疫相对保护率分别为80.6％和77.0％；用ELISA方法测定血清效价的结果显示,免疫MVAV6203A-1后大菱鲆血清效价最高达到2 048,均值为891,明显高于对照组的97；用多效价载体疫苗浸泡免疫大菱鲆后,对鳗弧菌与嗜水气单胞菌的免疫相对保护率分别为62.2％和11.7％.血清效价分析显示,实验组与对照组的均值均为64.上述结果表明,所构建的疫苗MVAV6203A-1可有效提高大菱鲆对鳗弧菌和嗜水气单胞菌的免疫力,并且免疫和攻毒的途径可能是影响免疫保护效果的因子.本研究旨在为鳗弧菌与嗜水气单胞菌引起的鱼类疾病防治提供技术支撑.     

真鯛种苗的鳍切除标志

(1) 60mm的真鲷种苗的尾、腹鳍切除鱼的试验时间分别为105日和253日,80mm的腹鳍、胸鳍切除鱼为375日。 (2)60—80mm种苗因鳍切除导致的死亡率不超过10％。 (3)鳍切除鱼饲育中的成长超过放流于天然海域的腹鳍切除鱼。平均尾叉长65—67mm的种苗经253日饲育后达131mm,81—84mm的种苗375日后达174—184mm。 (4)尾叉长和无切除腹鳍软条长、棘条长、尾鳍上叶长和胸鳍长的关系可以用直线回归式表示。 (5)65mm种苗的腹鳍在253日后的再生率达0.74—0.78,67mm的尾鳍105日后达0.94,84mm的腹鳍375日为0.77,81mm的胸鳍375日为0.73。 (6)切除腹鳍的再生软条数在4条以下的个体占65％,84mm种苗中占76％。 (7)鳍切除鱼的识别率除67mm种苗的尾鳍切除鱼外,其他标志鱼到试验完毕时均达到100％。据推测标志的有效性也就是在65mm腹鳍切除鱼放流后1年,67mm尾鳍切除鱼2个月,85mm腹鳍切除鱼2—2.5年,81mm胸鳍切除鱼2.5—3年期间内,其识别率都在80％以上。尤其是切除腹鳍的再生软条不足,可以作为永久标志的识别要素。     

氨氮及亚硝酸根快速测定试剂盒的研制

<正> 近年我们研制成一种可用于水产养殖水体中NH_4~+及NO_2~-浓度快速测定的试剂盒,对常规的比色法作了重要改进,使其成为可用于现场测定,并适用于淡、海水,测定范围0—10mgNH_4~+/L和1—1.0mg-NO_2~-/L。两种试剂盒测定结果与标准方法(GB7479-89;GB7493-87)的结果一对,相对标准偏差≤23％;能满足现场测定的要求。本试剂盒体积小(150×110×50mm~3),重量轻(约250克),每盒可作150次测定,每次测定仅须2—3分钟,操作简便,普通养殖人员可自行测定。     

介绍一种草鱼种浸泡免疫增效的新方法

一龄草鱼种,由于抗病力弱,常发生细菌性烂鳃病、肠炎病、赤皮病与病毒性出血病,成活率很低,甚至全部死亡,故渔谚云:“草鱼不瘟,富得发昏”。常见的预防方法是人工注射疫苗。可是这种方法麻烦,特别是有的草鱼种,到了六七月,体长6—7厘米左右,就开始发病,人工注射疫苗不仅困难,而且不起作用。这里介绍一种浸泡免疫增效的方法,供大家试验推广。这个方法最好于5、6月间,结合草鱼夏花(体长3厘米左右)分池饲养时进行。做法是用运鱼苗用的尼龙袋1个,灌入无毒清水4升(4000毫升,相当4000克),草鱼人工疫苗(土法疫苗或出血病灭活疫苗)40毫升(浓度最好是1∶10),价格1.2元),盐酸山莨菪碱(盐酸654—2)注射液4支(含药40毫克,价格0.3元),也可用价格更低的山莨菪碱(654—2)片剂代替,充氧密封,浸泡3     

大菱鲆迟缓爱德华氏菌福尔马林灭活疫苗研究

以大菱鲆为免疫对象,采用0.5福尔马林灭活的方法,将迟缓爱德华氏菌制成全菌疫苗,验证了其具有可靠的安全性。以浸泡和注射两种免疫接种方法对养殖大菱鲆14d内进行2次免疫,第二次免疫后第10天,对免疫鱼和各自的对照鱼进行爱德华氏菌的人工感染试验,获得注射接种疫苗的大菱鲆对腹水病的免疫保护率为70,浸泡接种疫苗的大菱鲆对腹水病的免疫保护率为35。表明注射和浸泡接种迟缓爱德华氏菌全菌疫苗都能使大菱鲆对腹水病产生免疫效果,并且注射免役效果优于浸泡免疫。     

钝顶螺旋藻对五种微量元素营养需要的研究

本文通过正交试验,研究确定了铜、锌、锰、钼、钴为钝顶螺旋藻培养液的必需元素,并确定了最佳浓度依次为:2×10~(-7)、2.2×10~(-5)、4×10~(-5)、8.3×10~(-8)、5.5×10~(-5)mol/L。本文以Zarrouk培养基为基础,并对五种微量元素作了修订。本文研究表明:铜、锰的浓度与Zarrouk培养基基本相同,锌高2个数量级,钼低1个数量级。