杂交种“金虎石斑鱼”与棕点石斑鱼卵巢发育及性类固醇激素水平比较

为了探究杂交种“金虎石斑鱼”(Epinephelus fuscoguttatus ♀×Epinephelus tukula ♂)和母本棕点石斑鱼(Epinephelus fuscoguttatus)的卵巢发育和血清中性类固醇激素水平的变化,对10、18、24、36月龄的金虎石斑鱼和棕点石斑鱼进行了卵巢组织切片,并采用酶联免疫吸附法测定其血清中的雌二醇(E2)、11-酮基睾酮(11-KT)、睾酮(T)、孕酮(P)含量。结果显示,杂交种金虎石斑鱼卵巢正常发育,没有出现卵母细胞萎缩、退化的现象,且36月龄时金虎石斑鱼卵巢发育至Ⅲ期早期,卵母细胞进入大生长期体积明显增大,核仁多位于核膜外侧。棕点石斑鱼卵巢发育较快,36月龄时卵巢已发育至Ⅲ期末期,卵母细胞与核体积进一步增大。卵膜外又形成了一层滤泡膜,形成双层滤泡膜结构。金虎石斑鱼与棕点石斑鱼血清中E2、11-KT、P的水平变化趋势相似,呈现先升后降的趋势,且在24月龄时达到最大,但棕点石斑鱼高于金虎石斑鱼。金虎石斑鱼血清中T的水平与其他性类固醇激素变化一致:在24月龄时达到最大,在36月龄时显著下降,而棕点石斑鱼血清中T在36月龄时依然维持和2...     

棕点石斑鱼(♀)与蓝身大斑石斑鱼(♂)及其杂交子代遗传多样性分析

本研究利用20对石斑鱼微卫星引物对金虎斑[棕点石斑鱼(Epinephelus fuscoguttatus) (♀)´蓝身大斑石斑鱼(E. tukula) (♂)]及其父母本进行微卫星分析,从分子水平对金虎斑及其双亲的遗传多样性进行研究。结果显示,20个微卫星位点共检测到215个等位基因,平均多态信息含量(PIC)为0.638 6;棕点石斑鱼平均有效等位基因数(Ne)最多(4.367 9),金虎斑次之(3.370 6),蓝身大斑石斑鱼最少(2.412 8);蓝身大斑石斑鱼、棕点石斑鱼和金虎斑3个群体平均观测杂合度(Ho)分别为0.385 5、0.474 9和0.473 6,PIC分别为0.491 9、0.645 3和0.555 1;3种石斑鱼群体群内近交系数(Fis)、总群体近交系数(Fit)、遗传分化系数(Fst)和基因流(Nm)平均值分别为0.228 0、0.344 1、0.150 4和1.411 9,群体间分化较大;采用UPGMA法构建的聚类分析图显示,金虎斑与棕点石斑鱼先聚为一类,二者亲缘关系更近。研究表明,金虎斑存在较丰富的遗传多样性表现,在遗传学方面可进行杂交石斑鱼进一步选育及杂种优势研究。     

棕点石斑鱼中草药免疫增强剂的快速筛选

采用离体外周血白细胞与中草药水提液共同孵育法,快速筛选棕点石斑鱼中草药免疫增强剂。39种生药量浓度为100 mg/ml 的中草药水提液及添加5.0 mg/ml 酵母聚糖的中草药水提液分别与棕点石斑鱼外周血白细胞孵育后,采用氮蓝四唑(NBT)还原法检测各种中草药水提液对棕点石斑鱼外周血白细胞氧呼吸爆发活性的影响,再以吞噬乳胶微球法检测具有显著增强白细胞氧呼吸爆发活性效果的中草药对棕点石斑鱼白细胞吞噬活性的影响,筛选中草药免疫增强剂,并将其拌料饲喂棕点石斑鱼,考察其对棕点石斑鱼外周血和头肾白细胞氧呼吸爆发活性的影响。结果显示,39种中草药中有10种对棕点石斑鱼离体白细胞氧呼吸爆发活性显著提高15%以上,3种酵母聚糖添加组对白细胞氧呼吸爆发活性提高70%以上;筛选出可同时提高棕点石斑鱼离体白细胞的氧呼吸爆发活性和吞噬活性的 3种中草药,它们分别为鸡血藤、黄柏和墨旱莲。拌料饲喂实验结果显示,饲喂1%的鸡血藤、黄柏和墨旱莲可显著提高棕点石斑鱼体内外周血和头肾白细胞氧呼吸爆发活性。     

棕点石斑鱼、杂交“金虎斑”及珍珠龙胆的肌肉营养成分分析及品质评价

为确定母本棕点石斑鱼、杂交“金虎斑”和杂交珍珠龙胆的肌肉营养成分并比较其差异，实验采用常规方法，依据国家标准对棕点石斑鱼、杂交“金虎斑”及珍珠龙胆肌肉中的水分、蛋白、粗脂肪和灰分含量以及氨基酸、脂肪酸和10种矿物元素的组成与含量进行测定和评价。结果显示，3种石斑鱼肌肉中粗蛋白含量分别为19.0%、20.2%和16.8%；3种石斑鱼氨基酸总量、必需氨基酸总量、必需氨基酸指数、鲜味氨基酸总量分别为(18.10%、18.53%、16.01%)，(7.52%、7.70%、6.32%)，(88.20、84.80、88.30)和(6.92%、7.13%、6.10%)；3种石斑鱼肌肉中粗脂肪含量分别为3.0%、4.2%和2.4%，其中珍珠龙胆DHA+EPA的含量为24.02%，杂交“金虎斑”DHA+EPA的含量为23.56%，棕点石斑鱼DHA+EPA的含量为22.76%；5种常量元素Na、K、Ca、Mg、P和5种微量元素Fe、Mn、Cu、Zn、Se均有检出。研究表明，棕点石斑鱼、杂交“金虎斑”及珍珠龙胆可以为人类提供丰富的蛋白质、脂肪、无机盐和矿物元素，是具有较高食用价值的优良海水养殖品种。其中杂交“金虎斑”在一些营养指标中明显高于母本棕点石斑鱼。     

4种常用消毒药物对棕点石斑鱼(♀)×鞍带石斑鱼(♂)受精卵孵化的影响

人工育苗中对受精卵进行消毒,可以很大程度上预防各种病原对受精卵的危害,防止病原体的垂直传播。但是,用化学药物消毒,总会对鱼的受精卵产生一定程度的毒害作用。因此,人工育苗中进行受精卵消毒处理时必须控制药物种类、药物浓度及消毒时间。本研究在(27.0±0.5)℃条件下,使用药物浸泡的方法,研究了4种常用水产消毒药物对珍珠龙胆石斑鱼受精卵[棕点石斑鱼(♀)×鞍带石斑鱼(♂)]孵化效果的影响。聚维酮碘、甲醛和二氧化氯的处理时间均为10 min,臭氧处理分1 min、2 min和3 min共3个梯度。使用SPSS 17.0软件对试验数据进行方差分析,结果表明,其受精卵的孵化率和畸形率与药物的浓度、处理时间呈负相关。甲醛和二氧化氯处理组与对照组的孵化率、畸形率差异显著;聚维酮碘处理组中25 mg/L、50 mg/L与75 mg/L各处理与对照组无差异,100 mg/L处理出现显著差异;臭氧处理组,0.3 mg/L处理中的各时间梯度间的孵化率和畸形率与对照组差异性不显著,0.5 mg/L、0.7 mg/L及1.0 mg/L处理中各时间梯度间差异极显著,0.5 mg/L处理2 min时,孵化率已极低,仅为4.14%,畸形率为50.00%。试验结果证明,在珍珠龙胆石斑鱼苗种生产中,其受精卵的适宜消毒药物、浓度范围及处理时间分别为:聚维酮碘20–70 mg/L处理10 min,臭氧0.3–0.5 mg/L处理1 min;二氧化氯、甲醛对受精卵刺激显著,而且对环境及人体有毒副作用,建议在生产中尽量不要使用。     

蓝身大斑石斑鱼冷冻精子(♂)与棕点石斑鱼(♀)杂交后代发育及生长特征分析

蓝身大斑石斑鱼(Epinephelus tukula)和棕点石斑鱼(Epinephelus fuscoguttatus)在自然环境中存在地理分布、繁殖时间和温度等方面的生殖隔离。本研究利用蓝身大斑石斑鱼冷冻精子与棕点石斑鱼卵人工授精，在水温为30℃、盐度为20的条件下培育，对其胚胎发育、胚后变态发育进行了详细的观察，利用显微镜和解剖镜拍摄、记录胚胎发育和变态发育的形态特征和发育时序，统计了杂交受精率、孵化率和畸形率，并对鱼苗生长进行了测量。结果显示，杂交受精卵经过1037 min完成胚胎发育。原肠早期，在胚层一侧就形成了胚盾，神经管在胚孔封闭时也开始出现，在视泡和耳囊发育的同时，克氏囊(末球)也开始形成。在心脏跳动之前，胚体先开始抽动，当977 min肌节发育到23对时，心脏开始间歇性的跳动，间歇时间24~40 s，心率98次/min；发育到1018 min时，间歇时间变短，心率约为93次/min；之后间歇性现象消失，心跳频率达到93次/min，这些现象在以往鱼类胚胎发育资料中均无记载。变态发育的典型特征是三叉棘的生长和退化，杂交幼鱼3 mm (10 d)时，形成背鳍棘和腹鳍棘；全长21.5 mm (35 d)时，三叉棘退化，完成变态发育；55.3 mm (45 d)时，表型特征与成体相似。冷冻精子的受精率、孵化率和畸形率分别为(76.67±5.77)%、(85.67±5.13)%和(6.33±1.54)%，与新鲜精子无显著差异(P<0.05)。鱼苗65 d时，体长达到8.89 cm，杂交后代体色趋于一致，且生长速度快；1龄时，平均全长和体重分别达(32.58±1.60) cm和(559.76±80.85) g。对比养殖实验显示，1龄棕点石斑鱼(♀)´蓝身大斑石斑鱼(♂)杂交后代体重是棕点石斑鱼(♀)´鞍带石斑鱼(♂)杂交后代的1.63倍，全长为1.24倍；这一时期的生长方程为W=0.0311L2.8079，R²=0.9886。研究结果表明，蓝身大斑石斑鱼和棕点石斑鱼杂交胚胎和胚后发育不存在遗传障碍，后代受精率和孵化率高、畸形率低，具有生长快杂交优势，为2种石斑鱼杂交育种和苗种大量培育提供了一定的遗传基础。     

棕点石斑鱼人工繁殖与苗种培育技术研究

对棕点石斑鱼的繁殖习性,胚胎发育和人工育苗关键技术进行了研究,结果表明棕点石斑鱼亲鱼经海水网箱强化培养可促进性成熟;仔、稚鱼期对培育水环境条件的适应范围狭窄,对生物饵料的选择和营养要求较高;幼鱼期对温度、盐度的适应较广,但自相残杀严重,在人为控制条件下育苗存活率为2.75%——18.81%。     

棕点石斑鱼的肌肉营养成分分析

试验结果表明,棕点石斑鱼的含肉率为77.3%,肌肉中粗蛋白、粗脂肪、粗灰分和水分的含量分别为18.8%、2.2%、1.16%和77.1%;18种氨基酸总量为18.22%(占鲜样),其中人体必需的8种氨基酸含量为6.88%,占氨基酸总量的37.36%,4种鲜味氨基酸含量为7.11%.其氨基酸构成比例符合FAO/WHO标准.必需氨基酸指数(EAAI)为514.DHA和EPA含量丰富,占脂肪酸总量的28.2%.     

棕点石斑鱼池塘网箱养殖模式研究

为研究棕点石斑鱼有效的经济养殖模式,在海水池塘中构建网箱进行了养殖试验。放养全长12.42±0.37 cm的棕点石斑鱼鱼种5 000尾,经过11个月的养殖,养成的商品鱼平均体质量达493.35 g,平均全长达31.80±2.03 cm,养殖成活率为91.24 %。同时在网箱外部放养南美白对虾虾苗5万尾,收获成虾2 000对。试验结果表明,采用池塘网箱养殖模式,棕点石斑鱼的养殖周期可相对缩短,比港湾网箱养殖和工厂化半流水养殖分别缩短7个月和1个月。而在网箱外部放养南美白对虾,可以充分利用养殖水体,净化水质,提高养殖成活率和单位水体的产出能力。     

棕点石斑鱼Piscidin样肽基因的克隆及其成熟肽的原核表达

以简并引物通过RT-PCR从重要经济海水鱼类棕点石斑鱼Epinephelus fuscoguttatus白细胞中扩增出一条388bp具有完整编码框的cDNA序列。Blast分析初步显示,该序列属于鱼类抗菌肽Piscidin家族的一员,将其命名为棕点石斑鱼Piscidin样肽(GU592793),推导氨基酸序列具有界定鱼类Piscidin的以下共同特征:(1)预测的信号肽序列与其他Piscidin的同源性较高,在60%~95%之间;(2)推测的成熟肽N端6个氨基酸残基富含Phe、Ile及His;(3)成熟肽第8个和第13个氨基酸位点均为Gly。NJ进化树分析表明,该cDNA推导的氨基酸序列与赤点石斑鱼Epinephelusakaarapiscidin-like peptide(ACE78290)、斜带石斑鱼Epinephelus coioidesPiscidin-like peptide(ACE78291)以高达81%的支持率聚为一支。也表明本研究成功克隆到棕点石斑鱼首条PiscidincDNA序列。推测的成熟肽为两亲性阳离子肽,等电点12.48,Schiffer-Edmunson预测其二级结构呈α螺旋构型。将...     

棕点石斑鱼池塘人工育苗试验

利用对虾养殖高位池进行棕点石斑鱼(Epinephelus fuscoguttatus)仔、稚鱼和鱼苗中间培育试验。共进行5批育苗试验,其中每批购受精卵量均为1 kg,平均孵化率为91.5%,5批共孵出仔鱼593.5万尾。共培育出体长2～3 cm的鱼苗82.3万尾,仔鱼平均育苗成活率为13.9%。5批鱼苗进行池塘网箱培育试验,共培育出体长8～10 cm的大规格鱼种70.9万尾,中间培育平均成活率为85.4%。     

患点带石斑鱼综合症病鱼血液生理生化指标的研究

比较了正常和患石斑鱼综合症的点带石斑鱼血液生理生化指标。试验用石斑鱼在循环海水养殖系统中养殖,鱼体质量(232.39±42.15)g,水温23～25℃,盐度30,溶解氧6mg/L,NH4+-N1.10mg/L,NO2--N0.22mg/L。试验结果表明,患石斑鱼综合症的点带石斑鱼血清丙氨酸氨基转移酶、天冬氨基转移酶、溶菌酶、一氧化氮、乳酸脱氢酶活性、丙二醛含量极显著高于正常石斑鱼;总抗氧化活力、总谷胱甘肽、还原型谷胱甘肽、总蛋白、白蛋白含量、白蛋白/球蛋白极显著低于正常石斑鱼;红细胞数、白细胞数显著高于正常石斑鱼;血红蛋白浓度、血栓细胞数、氯化硝基四氮唑蓝阳性细胞数差异不显著;血清替代补体溶血活力仅在患病鱼血清中测出。以上指标可供石斑鱼综合症诊断参考。     

点带石斑鱼与褐点石斑鱼4种同工酶的比较研究

采用聚丙烯酰胺凝胶垂直梯度凝胶电泳法,对点带石斑鱼与褐点石斑鱼7种组织中的4种同工酶(EST、LDH、MDH、SOD)的组织特异性进行比较研究。试验结果表明:2种石斑鱼的4种同工酶均具有明显的组织特异性。2种石斑鱼同一组织间MDH酶谱没有差别;LDH酶谱相似,只在迁移率上略有差异;EST、SOD酶谱间存在不同程度的种间差异,可作为鉴定点带石斑鱼与褐点石斑鱼的遗传标记。     

鳙和棕点石斑鱼冷藏过程中ATP关联化合物的变化

为分析鳙和棕点石斑鱼贮藏过程中ATP关联产物含量的变化,本研究以高氯酸溶液作为蛋白沉淀剂,运用高效液相色谱法(HPLC),分析(4±1)°C和(0±1)°C贮藏条件下鳙和棕点石斑鱼体内6种ATP关联化合物含量的变化。结果显示,(4±1)°C条件下,2种鱼体内的ATP都快速降解;ADP、AMP含量则始终较低;IMP含量呈先快速上升后缓慢下降的趋势;鳙体内Hx R含量相对较高,棕点石斑鱼体内Hx R含量较少;Hx在4 d后即开始大量生成。在(0±1)°C条件下,2种鱼肉中ATP同样很快降解,ADP、AMP含量少;IMP降解速率变缓;2种鱼中Hx R生成和分解速率皆变缓;Hx生成速率较为平稳。鳙以IMP、Hx R为限速步骤,棕点石斑鱼以IMP为限速步骤。研究表明,不同的贮藏温度对ATP的降解影响较小,但对其关联产物的变化速率有较大影响,且不同鱼种间ATP关联产物降解规律也有所不同。     

4种石斑鱼亲缘关系的RAPD分析

采用9个引物,对湛江沿海野生蜂巢石斑鱼、鲑点石斑鱼、点带石斑鱼及黑边石斑鱼的基因组DNA进行了RAPD分析,研究结果表明:蜂巢石斑鱼、鲑点石斑鱼、点带石斑鱼及黑边石斑鱼种间遗传距离(Dij)分别为0 4009(蜂巢石斑鱼-鲑点石斑鱼)、0 4805(蜂巢石斑鱼-点带石斑鱼)、0 5703(蜂巢石斑鱼-黑边石斑鱼)、0 4409(鲑点石斑鱼-点带石斑鱼)、0 4561(鲑点石斑鱼-黑边石斑鱼)及0 4729(点带石斑鱼-黑边石斑鱼);用UPGMA法对这4种石斑鱼进行聚类分析可知,蜂巢石斑鱼与鲑点石斑鱼首先聚在一起(0 4009),而后蜂巢石斑鱼-鲑点石斑鱼与点带石斑鱼聚在一起(0 4611),最后,蜂巢石斑鱼-鲑点石斑鱼-点带石斑鱼再与黑边石斑鱼聚在一起(0 4951)。在所研究的类群中,蜂巢石斑鱼和鲑点石斑鱼有较近的亲缘关系。     

棕点石斑鱼水泥池标粗技术

棕点石斑鱼（Epinephelus fuscoguttatus）（图见彩中插2），俗称“老虎斑”，是目前市场上公认的优质石斑鱼。我国目前主要养殖生产区域在广东、广西、福建和海南，海南是主要育苗生产区，年生产种苗数量300万～500万尾，养殖老虎斑商品鱼8000～8500吨。由于该石斑鱼种苗生产技术尚未成熟，体长15厘米以内生长情况极其不稳定，是影响其产业链健康、持续发展的重要因素。本文将介绍在水泥池中对体长3．0～12．0厘米的棕点石斑鱼苗标粗方法。     

棕点石斑鱼(Epinephelus fuscoguttatus♀)×鞍带石斑鱼(Epinephelus lanceolatus♂)F1染色体制备方法及核型分析

探索了在鱼类大小规格不同情况下制备鱼类染色体的最佳策略和方法,并对棕点石斑鱼(Epinephelus fuscoguttatus♀)×鞍带石斑鱼(Epinephelus lanceolatus♂)杂交子代(俗称珍珠龙胆)的染色体核型进行研究.本研究根据预实验的结果,对所选取的珍珠龙胆幼鱼,采用小鱼游泳法进行前处理,取其鳍条并以冷、热两种不同的滴片方法制备染色体,观察染色体形态并对其染色体核型进行分析.结果显示,选用的染色体制备方法能获得图像清晰、形态良好的细胞分裂相;不同的滴片处理方法细胞分裂指数存在一定差异,即热滴片法的有丝分裂指数为2.58％,明显高于冷滴片法的有丝分裂指数(0.83％),此外,热滴片法所获得的染色体的质量也明显优于冷滴片法.珍珠龙胆石斑鱼二倍体染色体数为48,22对染色体为端部着丝粒染色体,2对染色体为亚端部着丝粒染色体,其染色体臂数(NF)为52,核型公式为2n=48,4st+44t.珍珠龙胆与父本鞍带石斑鱼的染色体数目、核型基本一致,而与母本棕点石斑鱼的核型存在很大差异.研究表明,珍珠龙胆的2n数与其亲本相同,其核型特点符合典型的高位类群鱼类核型特征.在对珍珠龙胆与其亲本的核型进行比较的同时,对已报道的25种石斑鱼进行了核型的比较和综合分析,为石斑鱼的种质鉴定、遗传资源保护利用、育种提供基础资料和理论依据.     

棕点石斑鱼人工育苗技术研究

为探索棕点石斑鱼人工育苗相关技术,我们于2008年2月9日～3月30日在海南琼海某虾苗场进行了对影响棕点石斑鱼人工育苗成活率的开口饵料种类及水环境因子等相关技术的研究,现将情况介绍如下。一、材料与方法1.试验设施与水源试验采用4口规格为3.6米×3.6米×1.4米室内水泥池作为鱼苗培育池,每2口为一个试验组,另取2口面积相同的育苗池作备用池。散气石设置0.5个/米2;培育池内设气提式流水装置及吹气式捞油架;轮虫和海水小球藻培育采用10口4米×5米     

两种杂交石斑鱼子一代杂种优势的微卫星标记分析

使用6对微卫星引物对两种杂交子一代(青龙斑和虎龙斑)及其亲本(斜带石斑鱼、棕点石斑鱼和鞍带石斑鱼)共5个群体进行微卫星分析,计算等位基因频率、有效等位基因数、基因杂合度、多态信息含量、相似指数和Nei氏遗传距离。结果显示,在5种石斑鱼中,棕点石斑鱼的平均有效等位基因数最大(6.849 3),最小的是鞍带石斑鱼(2.608 6)。6对微卫星引物在这5个群体中具有丰富的多态性,平均多态信息含量(PIC)分别为0.666 7、0.751 3、0.441 9、0.664 0、0.542 6。在平均观测杂合度(Ho)中,虎龙斑和青龙斑的最高均为0.940 0,鞍带石斑鱼的最低为0.508 3。遗传距离和遗传相似率结果显示,青龙斑和虎龙斑均与父本鞍带石斑鱼的亲缘关系较近。杂交子一代群体的等位基因基本来自父母本群体双方,可推断杂交子一代的遗传物质来自父母双方,属两性融合生殖,是真正意义上的杂交种。杂交后代的遗传变异水平明显增强,这是杂种优势得以形成的重要遗传物质基础。     

鲑点石斑鱼的核型

本文报告以肾细胞为材料,采用PHA和秋水仙素进行分步活体注射,经低渗处理,空气干燥制片法制作染色体标本。对鲑点石斑鱼(Epinephelus fario)的染色体进行了初步分析,结果表明,鲑点石斑鱼体细胞染色体数目2n=48,核型为34m·sm+14st·t,NF=62。