两种杂交石斑鱼子一代杂种优势的微卫星标记分析

使用6对微卫星引物对两种杂交子一代(青龙斑和虎龙斑)及其亲本(斜带石斑鱼、棕点石斑鱼和鞍带石斑鱼)共5个群体进行微卫星分析,计算等位基因频率、有效等位基因数、基因杂合度、多态信息含量、相似指数和Nei氏遗传距离。结果显示,在5种石斑鱼中,棕点石斑鱼的平均有效等位基因数最大(6.849 3),最小的是鞍带石斑鱼(2.608 6)。6对微卫星引物在这5个群体中具有丰富的多态性,平均多态信息含量(PIC)分别为0.666 7、0.751 3、0.441 9、0.664 0、0.542 6。在平均观测杂合度(Ho)中,虎龙斑和青龙斑的最高均为0.940 0,鞍带石斑鱼的最低为0.508 3。遗传距离和遗传相似率结果显示,青龙斑和虎龙斑均与父本鞍带石斑鱼的亲缘关系较近。杂交子一代群体的等位基因基本来自父母本群体双方,可推断杂交子一代的遗传物质来自父母双方,属两性融合生殖,是真正意义上的杂交种。杂交后代的遗传变异水平明显增强,这是杂种优势得以形成的重要遗传物质基础。     

中国大鲵脑cDNA文库构建及促甲状腺激素β亚基基因cDNA的克隆和序列分析

以大鲵脑组织为材料,提取总RNA,应用CloneminerTM文库构建技术构建了cDNA文库.经检测,文库初始滴度为5.0×105 cfu·mL-1,重组率为91.70%,插入片断大小在0.35～3.9 kb,平均插入片段大小为0.791 kb,文库扩增后滴度为4.0×109 cfu·mL-1.随机挑选200个阳性克隆测序,经生物信息学分析,发现20个片段与已报道的基因有较高同源性,包括促甲状腺激素基因、生长激素基因及催乳素基因等,其中三个克隆为促甲状腺激素β亚基(TSHβ)基因.序列分析表明,TSHβ cDNA全长序列为705 bp,包含417 bp开放读码框,编码138个氨基酸序列,其中前19个氨基酸为大鲵TSHβ亚基信号肽部分,后接119个氨基酸组成的TSHβ亚基成熟肽.同源性分析显示,大鲵TSHβ亚基与两栖类牛蛙、蟾蜍及爪蟾同一蛋白的同源性分别为53.6%、52.2%和60.3%.采用邻接法和最大简约法对部分脊椎动物TSHβ氨基酸序列构建分子系统树,结果显示有尾目大鲵为两栖动物中较早分化的一支,表明其进化地位较原始.RT-PCR组织分布分析发现,TSHβ基因除垂体有表达外,性腺也有少量表达.     

尼罗罗非鱼仔鱼个体发育及性腺分化的发育

通过形态学、组织学的描述和显微结构的观察，研究了尼罗罗非鱼（Oreochromis niloticus）仔鱼在自然水温条件下（26～30℃）的个体发育和性腺分化发育过程。结果表明，仔鱼个体发育分为2个时期，仔鱼前期（从出膜到卵黄囊消失）和仔鱼后期（卵黄囊消失至奇鳍褶消失）；性腺发育分化的时序为：5DPH时，开始出现生殖嵴；10DPH时，出现少数原始生殖细胞，形成原始性腺；28DPH时，可清晰辨认卵原细胞，呈现明显的性腺分化组织学特征，至42DPH时可辨认精原细胞。     

半滑舌鳎胚胎发育及其与水温的关系

2002年8～9月在山东莱州明波水产公司养鱼场,半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis Günther, 1873)亲鱼经人工诱导催熟,在亲鱼培养池中雌、雄个体同时排卵、排精并完成了自然授精.卵子受精后,对受精卵进行连续的取样,在Nikon SMZ-10双筒解剖镜下观察胚胎发育的全过程.培养水温20.5～21.6 ℃,盐度33.50,pH 7.8～8.6,受精卵1 h 30 min细胞开始分裂,4 h 5 min为多细胞期,5 h 0 min为囊胚期,22 h 20 min胚孔关闭,40 h 20 min仔鱼开始孵出.根据本次实验以及1982年、1987年、1989年和2002年8月进行的半滑舌鳎人工孵化实验结果,应用3种数学统计方法,从理论上对半滑舌鳎胚胎发育的阈温度和有效积温值进行计算,结果表明,半滑舌鳎胚胎发育的阈温度和有效积温分别为13.2 ℃和347.0 ℃·h.     

两种杂交石斑鱼子一代及其亲本的线粒体COⅠ基因遗传变异分析

对两种杂交石斑鱼子一代（青龙斑和虎龙斑）及其亲本（斜带石斑鱼、棕点石斑鱼和鞍带石斑鱼）的线粒体DNA细胞色素氧化酶Ⅰ（COⅠ）基因序列进行了测序分析。在15个样本中，同源序列片段（1551bp）中共检测到9个单倍型和249个核苷酸多态位点。序列差异分析和遗传距离比较结果显示，核苷酸序列同源性在88．1％-100％之间，无明显遗传分化。虎龙斑的2个COⅠ基因单倍型与母本棕点石斑鱼单倍型的同源性为99％和100％，而与父本鞍带石斑鱼的同源性均为88．1％。青龙斑的2个单倍型与母本斜带石斑鱼的3个单倍型的同源性在99．7％-100％之间，而与父本鞍带石斑鱼的同源性分别为89．3％和89．4％，结果表明两种杂交子一代在线粒体DNACOⅠ基因上严格遵循母性遗传规律。