斜带石斑鱼抗菌肽hepcidin基因克隆及其成熟肽的原核融合表达

文章根据已报道的硬骨鱼类hepcidin cDNA序列设计简并引物，通过RT—PCR从重要海水经济鱼类斜带石斑鱼（Epinephelus coioides）肝脏中扩增出1条具有完整开放阅读框的246bpcDNA序列，Blast分析表明该序列是鱼类hepcidin基因家族的一员，被命名为斜带石斑鱼hepcidin样抗菌肽前体，该cDNA所推导的氨基酸序列有如下特点：1）信号肽序列与多数鱼类hepcidin信号肽的同源性在67％～87％之间；2）C端20个氨基酸序列具有绝大多数动物hepcidin成熟肽的共同典型保守序列特征，即在对应位置具有8个Cys；3）序列中不具有已报道的hepcidin前体肽转化酶作用典型基序[RX（K／R）R]；4）与GenBank中已注册的2条斜带石斑鱼hepcidincDNA序列（GU391241和GU391242）所推导的氨基酸序列同源性分别为36％和33％，且NJ进化树显示不与这2条序列聚为一枝，表明该序列是斜带石斑鱼hepcidin基因家族中一种新亚型，其预测成熟肽融合表达载体成功在大肠杆菌（Escherichiacoli）中表达，为后续研究奠定基础。     

棕点石斑鱼Piscidin样肽基因的克隆及其成熟肽的原核表达

以简并引物通过RT-PCR从重要经济海水鱼类棕点石斑鱼Epinephelus fuscoguttatus白细胞中扩增出一条388bp具有完整编码框的cDNA序列。Blast分析初步显示,该序列属于鱼类抗菌肽Piscidin家族的一员,将其命名为棕点石斑鱼Piscidin样肽(GU592793),推导氨基酸序列具有界定鱼类Piscidin的以下共同特征:(1)预测的信号肽序列与其他Piscidin的同源性较高,在60%~95%之间;(2)推测的成熟肽N端6个氨基酸残基富含Phe、Ile及His;(3)成熟肽第8个和第13个氨基酸位点均为Gly。NJ进化树分析表明,该cDNA推导的氨基酸序列与赤点石斑鱼Epinephelusakaarapiscidin-like peptide(ACE78290)、斜带石斑鱼Epinephelus coioidesPiscidin-like peptide(ACE78291)以高达81%的支持率聚为一支。也表明本研究成功克隆到棕点石斑鱼首条PiscidincDNA序列。推测的成熟肽为两亲性阳离子肽,等电点12.48,Schiffer-Edmunson预测其二级结构呈α螺旋构型。将...