草鱼出血病鱼主要器官组织的超薄切片观察及感染力的比较

草鱼出血病是一种严重的病毒性疾病,它会引起草鱼大批死亡。已有报告指出,在病鱼肾组织的超薄切片中观察到病毒粒子的存在,并认为肾脏是草鱼出血病病毒侵袭是严重的器官。在制备草鱼出血病组织疫苗时仅取病鱼的肝、脾、肾和肌肉组织,肠道组织往往弃之不用。为了进一步确定病     

草鱼呼肠孤病毒JX-0902株的分离和鉴定

收集江西南昌地区患典型草鱼出血病的病鱼组织,进行超薄切片电镜观察,结果显示,在脾、肾样品中发现大量病毒颗粒,病毒无囊膜,近球形,直径约70 nm,形态与已报道的草鱼呼肠孤病毒(grass carp reovirus,GCRV)相似。取病鱼肌肉、内脏研磨,组织液经离心、过滤除菌后进行鱼体人工感染试验和细胞感染实验,结果发现,人工感染试验鱼出现死亡,且具有典型出血症状;组织滤液感染草鱼肾细胞系(CIK)细胞后,盲传6代未观察到典型细胞病变效应,但感染细胞固定后经超薄切片电镜观察,细胞质内有大量病毒存在,与病鱼组织切片观察到的病毒形态一致。SDS-PAGE结果进一步揭示,新分离病毒株(暂命名JX-0902)基因组由11条dsRNA组成,呈现水生呼肠孤病毒基因组典型特征,但基因组带型与GCRV 873株存在差异,而与HZ08株接近。根据GenBank上已提交的草鱼呼肠孤病毒S6序列(GQ896337)设计特异引物,以JX-0902株的cDNA作为模板,可扩增出特异性条带。基于S6序列的聚类分析结果显示,JX-0902与GCRV HZ08株、GD108株S6同源性高达98%、99%,该分离株应为草鱼呼肠孤病毒。     

草鱼呼肠孤病毒湖州分离株的分离及鉴定

2008年6月从湖州某患病草鱼池塘采集草鱼出血病疑似病样,将除菌过滤后的患病鱼肝、脾、肾组织滤液,注射健康的8～10 cm的草鱼鱼种.5d后草鱼开始发病,且症状与原发病症状一样,死亡率为57%,对照组未有死亡.将无菌处理的病样滤液接种草鱼肾细胞(CIK),连续接5代均出现明显的细胞病变(CPE),并与草鱼呼肠孤病毒参考株所产生的CPE一致.该株病毒的TCID50为10-8/0.1ml.内脏组织经超薄切片,电子显微镜观察,发现组织内有大量的病毒颗粒,大小均一,近似球形,直径约70～75 nm.理化鉴定表明,氯仿、乙醚处理组病毒的感染力和对照组相比并没有多大变化,说明该株病毒对氯仿和乙醚有一定的抗性.经草鱼呼肠孤病毒特异性的RT-PCR检测,获得阳性的目的片段,测序的结果与草鱼呼肠孤病毒相应序列的同源性达99%以上.上述鉴定结果表明所分离的病毒为草鱼呼肠孤病毒,将其命名为HZ2008.     

葡萄球菌A蛋白协同凝集试验快速检测草鱼出血病病毒

本文报道葡萄球菌 A蛋白协同凝集(SPA COA)快速检测草鱼出血病病毒的方法以及对提纯病毒、染毒细胞内病毒和病鱼组织检测的初步结果。并对该方法进行了特异性和敏感性考核以及凝集物的电镜观察。该方法快速、特异、设备简单,适合基层单位检测草鱼出血病病毒,并有可能作为草鱼出血病疫苗质量鉴定的指标之一。     

草鱼呼肠孤病毒感染鳍条细胞株出现的变化

草鱼出血病(Hemorrhage of grass carp)是草鱼种的一种严重疾病,通常在水温25—30％时发病,1980年水生生物研究所病毒组从草鱼肾组织超薄切片(在电镜下)观察到品格状排列的病毒颗粒,并暂名为疱疹病毒。经进一步研究,1982年正式定名为草鱼呼肠孤病毒(Reovirus of grass carp)。此病毒属双股RNA类型。把病毒接种到草鱼鳍条细胞株,在28℃、72小时以后能清晰的看到细胞病变(CPE)。病变初期,细胞受刺激后无限制地加速生长,致使细胞间隔不清,出现一些颗粒状物。病变中期,细胞收缩,整个细胞单层拉成网状。     

草鱼出血病的组织病理研究

草鱼出血病是由呼肠孤病毒引起的一种急性传染病。病鱼全身出血，鱼的红细胞、白细胞及血红蛋白都明显地低于健康鱼。病毒侵袭草鱼后，小血管的内皮广泛受损，引起弥漫性血管内凝血，从而大量消耗了血液中的凝血因子，引起广泛性出血。由于循环血量减少和小血管阻塞，导致大多数组织和器官缺氧而变性和坏死；尤其是造血组织的坏死，更加速病鱼死亡。此外，还在草鱼血液中首次发现嗜碱粒细胞，查明了草鱼出血病同草鱼肠炎病的肠道组织病变之间的差异。     

应用Dot—ELISA技术检测草鱼出血病病毒的研究

报道了斑点免疫吸附ＥＬＩＳＡ快速检测草鱼出血病病毒的方法以及提纯病毒、染毒细胞内病毒和病鱼组织的检测结果，并对该方法的灵敏度与ＳＰＡ－ＣｏＡ和常规ＥＬＩＳＡ法进行了系统的比较。     

草鱼出血病的病原研究

草鱼出血病的病原研究,始于50年代。1978—84年,分离到一种病原病毒,定名为草鱼呼肠孤病毒或鱼呼肠孤病毒。本文报道从出血病病鱼组织的电镜研究中发现两种病毒颗料,一种即是呼肠孤病毒,另一种是20-30nm大小的病毒。经病毒的核酸分析,前者是双股RNA病毒;后者为单股RNA病毒。用分离到的这两种病毒分别注入1足龄健康草鱼,可发生两类不同症状的出血病;呼肠孤病毒主要导致“肠出血型”症状;另一种病毒(经初步鉴别属于小RNA病毒科病毒)主要导致“肌肉出血型”出血病。由此,可以证实两种病毒都是草鱼出血病的病原病毒,同时也初步解释出现两种不同症状出血病的原因。     

养殖中华鳖出血病病毒的电镜观察

本文应用电镜超薄切片技术，观察了福建省四个主要养鳖县市现场采集的鳖出血病样品，首次发现了一种感染养殖中华鳖的球形病毒（Trionyx sinensis spherovirus,TSSV）。该病毒分布在肺、胃、咽喉粘膜和腹甲皮层。主要靶细胞是这些组织的小血管和毛细血管的内皮细胞。TSSV粒子近球形，直径35-39nm，无囊膜包被，有的成群聚集在内皮细胞质中，有的由单位膜包裹在包涵体中，病毒感染的内皮细胞病变明显。本文还讨论了TSSV与出血病的关系。     

两株草鱼呼肠孤病毒江西株的分离与鉴定

对从江西省南昌县莲塘镇的患病草鱼鱼种池塘采集到草鱼出血病疑似病样材料分离出的两株病毒株进行了鉴定。结果显示:用除菌过滤后的患病鱼肝脏、脾脏、肾脏组织浆滤液腹腔注射感染8～10 cm健康草鱼鱼种,5 d后试验鱼发病,可复制出自然发病症状,死亡率达50%以上,对照组未有死亡。用病样滤液接种草鱼肾细胞系(CIK),可产生细胞病变效应(CPE),病毒的TCID50分别为10-8.3/0.1 mL和10-8.0/0.1 mL。理化特性研究结果显示:氯仿、乙醚处理组病毒的感染力和对照组相比变化不显著。病毒基因组RT-PCR反应可扩增出目的片段,序列测定与分析结果表明,其与GenBank中GCRV(登录号为AF403392,AF239175)相应序列的同源性达99%以上。     

鲫鱼出血病肝心组织超微病理变化的初步研究

用电子显微技术,对患出血病的鲫鱼(Carassius auratus)进行肝、心组织超薄切片观察,发现病鱼的肝、心组织发生了许多病理变化,其细胞结构变化与高等脊椎动物在急性致病因子作用下的病变状况相类似。     

急性病毒性鲫鳃出血病的病理变化

病毒性鲫(Carassius auratus)鳃出血病的突发流行可导致鱼高致死率,使中国部分养鱼场近些年受到重创。为了充分认识这种鱼病的发生发展过程,我们结合PCR、光学显微镜和透射电镜,对病鱼头肾等组织的病变及病毒分布情况进行了分析。注射自然发病鱼的组织滤液(病毒悬液),能使正常鲫感染,且出现与自然发病鲫相同的症状及高致死率;病原有典型疱疹病毒的形态特征(故称为鲫疱疹病毒,Ca HV)。经PCR扩增对已知鲤科疱疹病毒主要衣壳蛋白(MCP)基因进行检测,可确定Ca HV存在于被感染鱼的肝、脾、肾和头肾组织中。对组织病理变化及不同时序进行比较,结果表明Ca HV感染会引起鲫这些组织不同程度病变,而鳃和头肾的病理变化有显著时序相关性。在头肾细胞中还观察到大量Ca HV颗粒,预示鲫头肾是Ca HV侵染和复制的主要靶器官。     

草鱼出血病的研究进展及免疫防治

1 草鱼出血病的流行病学 1.1 草鱼出血病的发现 1980年发现病毒颗粒并确认为草鱼出血病病原,1991年国际病毒分类委员会将其命名为草鱼呼肠孤病毒(Grass carp reovirus,GCRV).GCRV是中国分离鉴定的第一株鱼类病毒,是水生呼肠孤病毒属中致病力最强的毒株,不仅能感染草鱼,而且还能感染青鱼、麦穗...     

鲤病毒病原的感染性测定

为查明养殖鲤（Cyprinus carpio）突然大批发病死亡的原因，对鲤病样品进行了细胞攻毒、空斑测定、电镜观察，以及鱼体感染等实验。先以患病鲤的组织匀浆液，经过滤后，分别接种到草鱼鳍条细胞（GCF）、鲤上皮瘤细胞（EPC）等14种培养细胞中。利用倒置显微镜观察显示，在1-2d内，该病鱼组织匀浆液可使其中9种细胞出现典型的细胞病变。收集出现病变的细胞液（即病毒悬液），进一步进行病毒滴度检测、空斑测定和鱼体感染实验。结果显示，在GCF细胞上的病毒滴度为10^7.3TCID50／mL；在FHM，TSB和GCO等细胞中可产生直径1～4mm的圆形空斑，空斑的大小与宿主细胞的种类和接种的病毒浓度有关。通过对感染细胞制备的超薄切片和病毒负染样品进行电镜观察，显示这是一类呈典型子弹头样的弹状病毒颗粒。感染了病毒悬液的鲫和鲤先后在第2天和第3天开始出现病症，间隔1～2d后发病的鱼开始死亡，至第14天，两种感染鱼的死亡率均达到83．3％。收集人工感染后濒死的鲫和鲤，分别制备组织匀浆液，回接感染鱼类培养细胞，24h内能使其出现与原发病鲤组织匀浆液所引起的类似的细胞病变。因此证实患病鲤是由病毒病原感染所致。[中国水产科学，2006，13（4）：617—623]     

纯化病毒复制中华绒螯蟹“颤抖病”的组织病理观察

采用石蜡切片及超薄切片技术，对人工感染纯化病毒后具典型颤抖症状的中华绒螯蟹进行病理学观察。结果显示：人工感染“颤抖病”病毒发病与自然发病的病理变化相似，病蟹的肝胰脏、鳃、心脏及腹神经节等组织器官发生了病变，其病理特征主要表现为细胞浊肿、变性、坏死，某些细胞的细胞核固缩、碎裂或崩解；超薄切片电镜下可见细胞内存在病毒样颗粒，线粒体内嵴受损严重。病变严重的区域，组织细胞坏死，结构崩解。提示肝胰脏、鳃、心脏及神经组织是病毒感染主要靶器官。     

草鱼出血病病原—鱼呼肠孤病毒(FRV)核酸特性的研究

<正> 本协作组曾报道从草鱼出血病病鱼组织中首次分离出一种直径约为60nm的球形病毒,并证实这一病毒为草鱼出血病的病原。随后,做了其精细结构的观察与分析。本文对该病毒的核酸基本特性进行了研究。根据我们以前和本文报道的     

草鱼出血病的流行病学分析

草鱼是四大家鱼之一,它在水产养殖中仍占有比较 大的比例,2003年我国草鱼的养殖产量达349万吨。草 鱼出血病是草鱼鱼种培育阶段为害最大的一种鱼病,属 病毒性疾病,而了解草鱼出血病的发生、发展和分布 的规律,依据2001年和2002年全国养殖草鱼出血病病 情月报的数据进行分析,可以掌握草鱼出血病发生的季     

西藏裂腹鱼类出血病的病原分析

拉萨裸裂尻鱼(Schizopygopsis younghusbandi Regan)、拉萨裂腹鱼(Schizothorax waltoni Regan)和异齿裂腹鱼(Schizothorax o’connori Lloyd)来源于雅鲁藏布江米林江段,采集自西藏林芝地区八一镇农贸市场,规格250～300g。从裂腹鱼病鱼的肌肉、肠道、肝脏、肾脏等组织中共分离到12种细菌。用病鱼匀浆组织的超微(0.2μm)过滤悬液和12种细菌悬液感染健康的裂腹鱼,发现超微过滤悬液未导致出血病,3种细菌悬液具有较强的致病力,病鱼有典型的出血病症状,死亡率87%、100%和100%。革兰氏染色后镜检观察,该3种菌株均为革兰氏阴性杆菌,少数成对或短链状,菌种未鉴定。     

草鱼出血病

<正>│病原│草鱼出血病是危害草鱼的主要病害,其病原是草鱼呼肠弧病毒,也称草鱼出血病病毒,是一种具有高度传染性的鱼类病害,对2龄以下草鱼鱼种危害特别严重,2龄以上草鱼少见出血病。│症状│按病鱼的症状,草鱼出血病大致可分为红鳍红鳃盖型、红肌肉型、肠炎型三种类型,三种症状可能单一出现,亦可能两种和三种同时出现。     

无公害鱼病防治技巧（二）

3草、青鱼疾病的防治3．1草鱼出血病3．1．1病原该病病原为草鱼出血病病毒,最适复制温度在30℃左右。3．1．2症状与诊断病鱼体内外各器官和组织呈现出血,有时有腹水,肠道无食物,充血但不糜烂。诊断时,须全面观察病体内外器官和组织的出血症状。如果出血症状明显,或有上述几种症状表现,可以诊断为草鱼出血病。3．1．3流行与危害该病是目前草鱼饲养阶段危害最大的