自由基氧化法制备海带岩藻聚糖硫酸酯的抗凝血活性

以海带(Laminaria japonica)为原料,采用阴离子交换和自由基氧化降解反应制备了不同分子量和硫酸根含量的岩藻聚糖硫酸酯,然后以血浆复钙时间(RT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)为指标,研究海带岩藻聚糖硫酸酯抗凝血活性的构效关系.结果表明,采用离子交换,可从海带糖提取物中分离出低硫大分子组分F-A和高硫大分子组分F-B.粗糖经自由基氧化降解,可得到分子量为1.5 kD和8.0 kD左右的低分子组分,实验重复性好,产物分子量集中,其中分子量8.0 kD左右的低分子组分硫酸根含量最高.抗凝血实验表明,岩藻聚糖硫酸酯能显著延长RT、APTT和TT,尤以高硫组分大分子F-B抗凝血效果最好,而对PT影响不大,说明岩藻聚糖硫酸酯对外源凝血系统影响很小,它的抗凝血活性主要是通过内源性凝血途径来实现的.岩藻聚糖硫酸酯分子量对抗凝血活性的影响要比硫酸根含量的影响更大,其抗凝血活性随着分子量的降低而显著降低.对于分子量相近的岩藻聚糖硫酸脂,硫酸根含量越高,则抗凝血活性越高.总之,岩藻聚糖硫酸酯分子量和硫酸根含量越高,其抗凝活性越高.     

海带岩藻聚糖硫酸酯电渗析分离工艺

采用电渗析法对盐沉后的海带酶解液中岩藻聚糖硫酸酯进行分离,探索工业化分离生产岩藻聚糖硫酸酯的方法,以解决目前乙醇沉淀法存在的安全性和高成本等问题。以脱盐率、糖保留率为检测指标,采用响应面法优化了电渗析工艺参数。结果显示,在操作电压80 V、料液流量3.2 L/min、固形物浓度10 mg/ml、p H=5的条件下,电渗析连续循环3次,海带酶液解干基中多糖含量由40.17%提高至47.11%,硫酸根含量由3.36%提高至4.97%。电渗析后海带酶解液干基中的金属离子含量为Ca 0.13 mg/g、Mg 16.04μg/g、Cu 0.29μg/g、Se 11.7μg/g、Cr 8.06μg/g,Pb未检出,较电渗析前均有降低。电渗析对脱除褐藻胶的海带酶解液进行脱盐纯化处理,可有效地分离纯化出岩藻聚糖硫酸酯。     

褐藻多糖体外免疫调节活性研究

以甘露糖醛酸多糖和岩藻聚糖硫酸酯为实验材料,通过酸水解法得到不同的聚甘露糖醛酸组分;采用超声法对岩藻聚糖硫酸酯进行降解,收集不同分子量范围区间的组分,对各样品进行红外光谱分析,并考察了体外对RAW264.7细胞活力的影响,以探索各组分的体外免疫调节活性。实验结果表明,采用三氟乙酸对甘露糖醛酸多糖进行水解,其红外谱图与水解前有明显变化,出现酯基吸收峰,表明水解程度较高;而醋酸水解后红外吸收谱图峰型无显著变化;采用凝胶排阻层析进行分子量检测,各组水解后的聚甘露糖醛酸分子量有不同程度降低。岩藻聚糖硫酸酯经超声处理后,分子量>100kD的组分在2μg/mL浓度下具有提高RAW264.7活性的作用,而浓度上升至54、162μg/mL时对细胞活性有抑制作用;而水解后所得的聚甘露糖醛酸各样品对RAW264.7活性无显著影响。     

离子色谱法和氯化钡一明胶法测定海带岩藻聚糖硫酸酯中硫酸根含量的比较

岩藻聚糖硫酸酯（Fucoidan）是一种以岩藻糖为主要成分的含有硫酸酯的水溶性杂聚糖。研究发现，岩藻聚糖硫酸酯在医学方面具有独特的抗凝血、抗肿瘤、抗HIV、抗血栓、提高免疫力、降血脂等活性，而硫酸根含量对其生理活性的影响最大。目前从对泡叶藻、墨角藻、昆布、钩鹿角藻等制备的岩藻聚糖硫酸酯的抗凝和抗血栓活性及构效关系的报道中发现，     

岩藻聚糖硫酸酯抗炎、抗氧化及其交互作用研究进展

<正>岩藻聚糖硫酸酯是一种主要存在于褐藻和海洋无脊椎动物中的天然活性成分。岩藻聚糖硫酸酯结构中含有L-岩藻糖和硫酸基团,是一种具有多种生物活性的酸性杂多糖,已有研究表明,其具有抗氧化、减轻炎症反应、抑制肿瘤细胞生长、预防心脑血管疾病和肾功能衰竭等生物活性^[1]。因其源于天然原料,来源丰富,并且安全无毒副作用,近年来人们对岩藻聚糖硫酸酯的活性研究越来越关注。     

海带粗提物及褐藻酸钠寡糖的保湿与抗氧化作用研究

以海带为原料提取海带粗提物,以褐藻酸钠制备古罗糖醛酸寡糖与甘露糖醛酸寡糖,研究比较海带粗提物、褐藻酸钠、古罗糖醛酸寡糖、甘露糖醛酸寡糖及岩藻聚糖硫酸酯的吸湿、保湿性及抗氧化性。试验结果表明,海带粗提物、褐藻酸钠、古罗糖醛酸寡糖及甘露糖醛酸寡糖具有较高的吸湿性与保湿性,且古罗糖醛酸寡糖、甘露糖醛酸寡糖、褐藻酸钠及岩藻聚糖硫酸酯对超氧阴离子和羟基自由基均有较强的清除作用。     

低分子量海带岩藻聚糖硫酸酯的清除活性氧自由基和体内抗氧化作用

用化学发光分析法研究了3种低分子量涨带岩藻聚糖硫酸酯（LMWF－M，LMWF－I，LMWF－IV）体外清除超氧阴离子自基基（O2^-)及羟基自同基（．OH）的作用，并观察了LMWF－M对高脂血症大鼠的抗氧化作用，结果表明阴离子分量海带岩藻聚糖硫酸酯组分均有清除活性氧自由基的能力，随体系中LMWF浓度的增加，其清除活氧自由基的能力增强，LMWF－I清除自同基的能力最强，它对O2^-的IC50为0.044mg.mL^-1,对.OH的IC50为0.062mg.mL^-1,，LWMF－M能显著降低高脂血症大鼠箅清和组织中LPO含量（P＜0．01），增强SOD活力（P＜0．01）.     

低分子褐藻聚糖硫酸酯寡糖的研究进展

正褐藻聚糖硫酸酯又称岩藻聚糖,主要来源于褐藻、海参和海胆等生物。不同来源的褐藻聚糖硫酸酯结构因来源不同而存在差异、且较复杂。即使同一特定褐藻中的褐藻聚糖硫酸酯也可能存在不同的结构~([1])。近些年来褐藻聚糖硫酸酯的大部分结构及其骨架已经被逐渐揭示~([2]);随着结构的揭示其功效或构效研究逐渐增多。     

海带多糖清除氧自由基的活性及机理

通过比较不同分子量和化学组成的海带硫酸多糖和褐藻胶的清除氧自由基的活性,探讨了海带多糖清除氧自由基活性的构效关系和作用机理。研究发现,分子量为6~15 ku、糖醛酸含量20.4%的低硫组分F-A2清除自由基活性羟基自由基和超氧阴离子自由基活性高于大分子量的组分F-A和F-B,而高硫低分子量组分清除氧自由基的活性非常低。酶降解得到的低分子量褐藻胶组分清除自由基活性随分子量的降低而升高,明显高于其他硫酸多糖,说明硫酸根对低分子量糖与自由基的反应有阻碍,而多糖中糖醛酸含量越高,清除自由基活性越好。大分子量的海带硫酸多糖经铜离子和H₂O₂反应产生的羟基自由基氧化降解以后,直接可以得到两个比较集中的低分子量岩藻聚糖硫酸酯Fa2(分子量为7 ku)和Fa1(分子量为1 ku),其化学组成和清除自由基活性的比较说明自由基首先降解糖醛酸含量高的硫酸糖片断,甘露糖、半乳糖和葡萄糖形成的糖苷键很容易被自由基氧化降解,而高硫高岩藻糖部分不易被自由基水解,研究结果说明,海带多糖的抗氧化活性不仅与分子量和硫酸根含量有关,糖醛酸、岩藻糖含量和糖链上中性糖的组成对多糖的清除自由基活性都有影响。     

南四湖表层沉积物重金属的空间分布、来源及污染评价

为研究南四湖表层沉积物中重金属含量、分布与污染特征,采集了29个表层沉积物站点并测定了8种重金属含量。采用主成分、相关分析、聚类分析法分析了重金属来源,同时运用地累积指数法和潜在生态风险指数法综合评价了南四湖沉积物中重金属的污染现状和潜在生态风险。结果表明,（1）南四湖表层沉积物中,As、Hg、Pb、Cr、Cd、Cu、Zn、Ni的平均含量分别为14.41、0.048、25.69、71.10、0.22、30.14、87.55、35.33mg/kg,其中As、Hg、Pb、Cd均超过环境背景值,在空间上表现出上级湖高,下级湖低的分布特征;（2）相关性分析、主成分以及聚类分析显示,Pb、Cr、Cu、Zn、Ni具有同源性,为自然源元素;As和Cr具有同源性,为人为源元素;Hg元素主要来源与其他几种重金属不同,受自然地质背景与人类活动的双重影响。③地累积指数法评价结果表明,南四湖沉积物重金属元素的污染程度：Hg＞Cd＞As＞Pb＞Cr＞Zn＞Ni＞Cu,Hg、Cd、As、Pb已处于无污染-中度污染程度,而其它元素无污染。④潜在生态指数法研究结果表明,南四湖表层沉积物单项重金属生态风险程度顺序为：Hg＞Cd＞As＞Pb＞Ni＞Cu＞Zn＞Cr,Hg、Cd具有较高的生态风险等级,为主要的生态风险贡献因子,其它7种重金属元素均为低生态风险等级。综合分析可见,Hg、Cd、As、Pb为南四湖表层沉积物主要重金属污染元素,各湖区沉积物污染程度由高至低依次为：南阳湖＞独山湖＞微山湖＞昭阳湖。     

日本鳗鲡(Anguilla japonica)脾脏小分子抗菌肽的分离纯化

为分离日本鳗鲡脾脏中的抗菌肽,实验采用10 ku和3 ku切向流中空纤维柱对脾脏醋酸粗提物进行分级分离,并结合阳离子交换层析和反相高效液相层析技术对小于10 ku和小于3 ku 2部分样品分别进行分离纯化。结果显示,2种分子量截留纤维柱超滤获得了大于10 ku、小于10 ku和小于3 ku 3部分样品。小于10 ku和小于3 ku蛋白样品抗菌活性较大于10 ku样品强。对小于10 ku样品经阳离子交换层析以及采用pH 9缓冲液进行反相高效液相层析分离纯化,获得一个抗菌肽,质谱分析其分子量为1 391.82 u;对小于3 ku样品经阳离子交换层析并采用pH 9和pH 2两种缓冲液进行反相高效液相层析分离纯化,获得一个抗菌肽,质谱分析其分子量为839.19 u。研究表明,日本鳗鲡脾脏中起抗菌活性的主要成分是一些小分子蛋白。     

尼罗罗非鱼鱼皮胶原蛋白中游离基清除肽的制备及其抗氧化活性

采用菠萝蛋白酶和Alcalase酶依次对尼罗罗非鱼皮胶原进行复合酶解.研究了该酶解产物的体外抗氧化活性.实验表明,该酶解产物具有较强的超氧阴离子/羟基自由基清除活性和还原能力.采用不同截留分子量的超滤膜将该酶解物分离成5个组分,即TGH-Ⅰ(＞10 ku),TGH-Ⅱ(10～5 ku),TGH-Ⅲ(5～3 ku),TGH-Ⅳ(3～1 ku)和TGH-Ⅴ(10 ku).其中TGH-Ⅴ组分显示出最强的超氧阴离子自由基清除活性,因此采用凝胶过滤、离子交换和反向高压液相色谱技术对该组分进一步分离纯化.纯化得到的肽具有很强的超氧阴离子自由基清除活性,其IC50值为4.6 μg·mL-1.通过质谱分析可知,该肽的分子量位于311.3～932.8 u之间.     

Non-specific immune potentiating activity of fucoidan from a tropical brown algae (Phaeophyceae), <Emphasis Type="Italic">Sargassum cristaefolium</Emphasis> in tilapia (<Emphasis Type="Italic">Oreochromis niloticus</Emphasis>)

Fucoidan mainly produced by brown algae is a sulfated polysaccharide with fucose as a main molecule backbone. The objective of this research was to evaluate the non-specific immune potentiating activity of fucoidan from a tropical brown alga, Sargassum cristaefolium indigenous to the Gunungkidul coast, Yogyakarta, Indonesia. Fucoidan was extracted by acidic extraction, separated from alginate by CaCl₂ precipitation and precipitated with ethanol. To know the component of fucoidan, acid hydrolysis was conducted and analyzed by using silica gel thin layer chromatography. In these analyses, a commercial fucoidan from Fucus vesiculosus was used as a standard fucoidan. Fucoidan isolated from S. cristaefolium was composed by monosaccharide components of fucose and galactose. The result revealed that injection of fucoidan increased phagocytic activity, total plasma protein, leukocrit and leukocyte count significantly (p < 0.05). The immunomodulating activity of fucoidan from S. cristaefolium was comparable to that of fucoidan standard from F. vesiculosus. However, administration of fucoidan did not affect the phagocytic index and leukocyte differentiation. Injection of fucoidan from S. cristaefolium effectively increased innate immunity parameters of tilapia at doses of 0.4–0.6 mg/kg fish suggested that this fucoidan was potential use for immunostimulant to control fish diseases.     

鳜皮肤黏液IgM样蛋白的纯化

对经嗜水气单胞菌全菌疫苗浸泡免疫后的鳜皮肤黏液中的免疫球蛋白采用盐析法、重组蛋白A(HiTrap rProteinA Sepharose)亲和层析法及鼠抗鳜血清IgM单克隆抗体偶联的Sepharose 4B亲和层析法分离纯化,并通过SDS-PAGE及Western-blot技术对纯化蛋白的部分特性进行分析比较。结果表明:50%硫酸铵溶液可以沉淀黏液中大部分蛋白,条带仍较多,约十几条,其中含有72 ku和29 ku的条带,因此仅可作为免疫球蛋白粗提的方法;Sepharose 4B亲和层析法所提取鳜黏液Ig经SDS-PAGE检测,只含有72 ku和29 ku 2个条带(初步认为鳜黏液Ig的重链和轻链),与鳜血清IgM的重、轻链分子量相同;rProteinA亲和层析法所提蛋白除具有上述重链(72 ku)和轻链(29 ku)外,还含有43 ku的蛋白带(可能为鳜黏液Ig另外一种形式的重链)。Western-blot显示,兔抗鳜Ig多克隆抗体可与72 ku及43 ku条带发生发应。两种亲和法所提蛋白纯度较高,但含量较低,条带较淡,仅可作为实验室小量提纯鳜黏液Ig的有效方法。     

Dietary influence of Fucoidan supplementation on growth of Lates calcarifer (Bloch)

Sulphated polysaccharides exhibit a range of activities which promote health and growth benefits to aquaculture species. One class of sulphated polysaccharides derived from marine algae is fucoidan, which is suggested to exhibit an affinity to the negative muscle growth inhibitory protein myostatin. Addition of fucoidan to the diet of fish therefore may lead to enhancements in growth through inactivation of the myostatin protein. To examine the growth enhancing potential of this sulphated polysaccharide, fucoidan extracts from Undaria pinnatifida were added to the diet of juvenile barramundi, Lates calcarifer. The fucoidan extract was of 86% purity and included in two treatment diets at 5 g kg^?1 (0.5%) and 10 g kg^?1 (1%) respectively. Fish were fed the diet for 52 days. At the end of the feeding trial, barramundi fed with the 1% fucoidan inclusion diet exhibited enhanced growth with significantly increased lengths, weights and muscle fibre area (hypertrophy) when compared to the 0.5% fucoidan inclusion diet and the non‐fucoidan control diet. This research suggests that addition of fucoidan to the diet of fish may have growth promoting effects.     

胰蛋白酶水解虾头壳制备钙结合肽的工艺条件优化研究

在单因素试验研究时间、底物浓度、pH,酶浓度和温度对蛋白水解度和酶解液中可溶性钙含量的影响基础上,通过响应面分析法对酶解条件进行了优化,得出最佳酶水解工艺条件为:底物浓度10%,pH 7.4,温度50℃,酶添加量1.39%,水解5h.在此条件下,酶解液水解度为29.0%,可溶性钙含量为176.4 mg/ml,水解液经凝...     

大眼金枪鱼头蛋白酶解物1 ku超滤组分的抗氧化活性及其理化性质

研究大眼金枪鱼头蛋白酶解物1 ku超滤组分体外的还原力、自由基清除能力及对衰老小鼠体内抗氧化能力的影响,分析1 ku超滤组分的一般成分、氨基酸组成及分子量分布,为进一步分离纯化金枪鱼头抗氧化肽提供基础。体外结果显示,1 ku超滤组分对羟基自由基、超氧阴离子和DPPH自由基的清除活性随浓度的增加而增强,IC50分别为1.38、0.73与0.93mg/mL,还原力也随浓度的增加而增大,在浓度为12.5 mg/mL时为0.763;体内结果显示,灌胃30 mg/kg的1 ku超滤组分连续42 d,D-半乳糖致衰老小鼠肝组织的超氧化物歧化酶(SOD)活性、肝组织和血清的谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性显著提高(P<0.05),血清丙二醛(MDA)含量显著降低(P<0.01);理化分析结果显示,1 ku超滤组分(干基计)蛋白质含量为96.40%,脂肪0.11%,灰分4.86%,疏水性氨基酸占氨基酸总量的35.8%,活性组分分子量在1 802~2 519 u和422~922 u。     

鲢鱼鱼皮蛋白肽的制备与抗氧化活性评价

为制备抗氧化活性良好的鲢鱼鱼皮蛋白肽,采用胰蛋白酶、碱性蛋白酶、菠萝蛋白酶和木瓜蛋白酶等4种常见的商业酶对鲢鱼鱼皮进行酶解,测定酶解物的ABTS自由基清除力和Fe2+螯合力来评价其抗氧化活性,并用超滤及凝胶层析对酶解物进行分离,以期得到活性更好的酶解物分离组分。酶解后产物的抗氧化活性均有所提高,其中碱性蛋白酶酶解2 h产物活性较强。对此酶解物用截留分子量为10 k Da、5 k Da和3 k Da的中空纤维超滤膜进行超滤,得到的4个组分中,分子量越小的组分抗氧化活性越强。分子量小于3 k Da的组分经Sephadex G-15凝胶层析得到3个组分,其中分子量最大的组分活性较好,在0.51 mg/m L质量浓度下测定其ABTS自由基清除率和Fe~(2+)螯合力分别为(79.65±0.87)%和(93.40±0.20)%。该研究成果对鲢鱼鱼皮抗氧化肽的开发具有较好的指导作用。     

Antiviral Effect of Fucoidan Extracted from the Brown Seaweed,Sargassum wightii,on Shrimp Penaeus monodon Postlarvae against White Spot Syndrome Virus

This study was carried out to determine the effect of seaweed polysaccharide, fucoidan from brown seaweed, Sargassum wightii, on Penaeus monodon postlarvae (PL) against white spot syndrome virus (WSSV). The fucoidan was extracted from S. wightii, and the yield was observed as 2.832 ± 0.204%. Artemia franciscana nauplii were enriched with extracted fucoidan at four different concentrations (100, 200, 300, and 400 mg/L) and fed to shrimp P. monodon PL for 20 d. After feeding experiment, the P. monodon PL were challenged with WSSV, and the mortality percentage was recorded daily up to 21 d. During the challenge test, the control PL showed 100% cumulative mortality within 9 d, but the fucoidan‐enriched Artemia nauplii fed groups of PL exhibited 60–94% cumulative mortality within 21 d. The reduction in mortality percentage of experimental groups of PL over control PL was ranged between 33.71 and 61.65%. The polymerase chain reaction analysis confirmed the concentration‐dependent variation in WSSV infection.