免疫荧光层析快速检测河豚毒素的研究

本研究利用自制的河豚毒素荧光免疫层析检测卡对河豚毒素进行快速定量检测,并分析其稳定性、灵敏度、趋势线拟合程度及检测范围。研究结果表明,自制的河豚毒素荧光免疫层析检测卡变异系数为0.124,拟合方程相关系数r~2值为0.995 5,检测卡的检测范围为2~600 ng/m L,可以满足对河豚毒素快速定量检测的要求。     

水产品中孔雀石绿检测方法的优化

对水产品中孔雀石绿及隐色孔雀石绿的超高效液相色谱-串联质谱检测方法进行了优化。样品依靠缓冲盐体系将目标物质离子化后用酸性氧化铝除脂,利用乙腈提取,浓缩后过中性氧化铝小柱净化,35℃旋转蒸发近干,用1.00 m L 5 mmol/L乙酸铵0.1%甲酸-甲醇溶液(1∶1,V/V)定容,经0.22μm滤膜过滤后上机检测,采用同位素内标法定量。方法优化后孔雀石绿和隐色孔雀石绿的线性范围为0.5~20.0 ng/m L,相关系数均为0.999 9,检出限为0.500μg/kg,平均回收率分别为83.4%~101%和86.1%~101%,相对标准偏差(RSD,n=5)分别为3.44%~7.76%和2.28%~8.74%。该方法灵敏度高,准确性好,与现有国家标准相比,本方法减少了有机溶剂使用量、简化了前处理步骤,并且稳定了目标物质回收率。通过验证,该方法适用于水产品中孔雀石绿及隐色孔雀石绿残留的检测。     

高效液相色谱法测定水产品中15种多环芳烃

本文采用QuEChERS技术,对前处理条件进行改进,然后通过对色谱条件的优化,实现水产品中15种PAHs的高效液相色谱法检测。在优化条件下,15种PAHs线性范围为1~50 ng/m L,线性相关系数大于0.995;以信噪比(S/N)≥3确定各组分的检出限,15种PAHs的检出限在0.1~2.0μg/kg之间。对对虾样品进行15种PAHs污染物的加标实验,回收率在75.8%~101%范围内,相对标准偏差小于15.0%。最后,将Qu ECh ERS-高效液相色谱法应用于实际样品中15种PAHs的检测,结果证明,该方法操作简便、灵敏度高,适用于水产品中PAHs污染物的检测。     

HPLC-MS-MS测定水产品中的甲基睾丸酮残留量

在研究基质效应的基础上,建立了乙酸乙酯提取,石油醚净化,氘代甲基睾丸酮为内标,甲醇和5mmol/L乙酸铵(含0.15%甲酸)为流动相,梯度洗脱,高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS-MS)测定水产品中甲基睾丸酮残留量的方法。在2.0~500ng/mL浓度范围内,线性良好,R2≥0.999;定量限为5.0μg/Kg。空白样品添加标准物质后的回收率在75%~105%之间,相对标准偏差≤10%。该方法前处理简单,可适用于批量水产品中甲基睾丸酮残留量的快速定性定量检测。     

酶联免疫吸附方法分析海水和贝类中的滴滴涕及代谢物

采用间接竞争酶联免疫吸附分析(Ind irect Competitive Enzym e-linked Immunosorbent Assay,ELISA)方法测定海水样品和海洋贝类中的有机氯农药滴滴涕及其主要代谢产物的含量。采用碳二亚胺法,将半抗原DDA分别与载体蛋白牛血清白蛋白(Bovine serum album in,BSA)和卵清蛋白(Ovalbu-m in,OVA)偶联,得到包被抗原和免疫抗原。以DDA-OVA作为免疫抗原,免疫雌性BALB/c小鼠,免疫数次后,测定血清中抗体效价。以DDA-BSA为包被抗原,免疫多克隆抗血清为多克隆抗体,建立间接竞争酶联免疫吸附方法分析检测海水样品和海洋贝类中的有机氯农药二氯二苯三氯乙烷(DDT)及其代谢产物2,2-双(4-氯苯基)乙酸(DDA)、2,2-双(4-氯苯基)-1,1-二氯乙烷(DDD)、2,2-双(4-氯苯基)-1,1-二氯乙烯(DDE)的方法。最低检出限分别为DDT:25 ng/m l,DDA:1.56 ng/m l,DDD:25 ng/m l,DDE:25 ng/m l。贝类样品DDA回收率为96.37%~100.88%,批内变异系数为2.28%~5.13%;贝类样品DDT回收率为93.86%~100.08%,批内变异系数为4.71%~7.68%;海水样品DDT回收率88.23%,批内变异系数6.60%。     

渔业水域氯氰菊酯的检测方法及其消解动态

根据氯氰菊酯(Cypermethrin)对斑马鱼、剑尾鱼、鲫鱼、罗非鱼、鳜鱼5种鱼的安全浓度范围(0 001～1 06μg/L),建立相应的毛细管气相色谱检测方法,用于水体中氯氰菊酯消解动态试验检测,该方法的最小检测水平为1×10-3μg/L,氯氰菊酯质量浓度在0 1～10μg/L时线性相关系数为0 9993,平均回收率87 9%,变异系数14 7%。对25℃恒温条件下的残留消减实验结果进行回归分析,结果表明,水体中氯氰菊酯的残留消解动态可用三次曲线模型Y=6 1053-0 1566X+0 0035X2-(4 8068E-05)X3表达。35℃、15℃恒温条件下,同样是三次曲线模型的相关指数R2最大。上述3种不同温度下建立的消解动态方程导出的氯氰菊酯残留半衰期分别为20d、29d和31d,表明氯氰菊酯水中残留半衰期随温度升高而下降。     

分散固相萃取-高效液相色谱串联质谱法同时测定沉积物中氟喹诺酮类药物残留

本文建立了分散固相萃取结合高效液相色谱-串联质谱同时测定沉积物中氟喹诺酮类药物残留的分析方法。沉积物经20 m L乙腈-磷酸盐(1∶1,V/V)缓冲液超声提取,0.15 g乙二胺四乙酸二钠络合除杂,分散固相萃取材料净化,Ultimate XB-C18色谱柱分离,含4 mmol/L乙酸铵的0.1%甲酸水溶液-0.1%甲酸甲醇梯度洗脱,电喷雾正离子模式下以多反应监测方式检测,内标法定量分析。通过试验优化了不同提取方法、净化吸附剂比。结果表明,5种氟喹诺酮类药物在2.5~200 ng/m L范围内线性关系良好(R20.99),方法定量限(S/N≥10)为2μg/kg。在2~50μg/kg添加水平内,平均回收率为79.8%~112%,日内相对标准偏差(RSD)为3.2%~9.9%,日间RSD为5.3%~8.6%。     

DcELISA检测泥鳅、鲫鱼中氯霉素残留方法的应用

应用直接竞争酶联免疫吸附试验方法(dcELISA)快速定量测定泥鳅、鲫鱼肌肉中氯霉素(CAP)残留量.氯霉素浓度在0.05～10ng/g范围内具有良好的线性关系,线性方程为y=-0.33-1.88x,r2=0.995,向样品中分别添加0.1、0.3、0.9ng/g三个浓度水平的氯霉素标准品,泥鳅样品的平均回收率分别为87.2%、88.9%、93.0%,鲫鱼样品的平均回收率分别为86.1%、79.9%、99.0%.最低检测限为0.05ng/g,批内变异系数为8.0%.批间变异系数为7.2%,结果表明该方法灵敏度高,重复性好,适合在泥鳅、鲫鱼肉样中氯霉素残留筛选检测.     

渔业水质中拟除虫菊酯农药残留的气相色谱分析

建立渔业水质中七氟菊酯、联苯菊酯、甲氰菊酯、三氟氯氰菊酯、氯菊酯、氟氯氰菊酯、氯氰菊酯、氰戊菊酯、氟胺氰菊酯、溴氰菊酯10种拟除虫菊酯残留的分析方法。样品以石油醚萃取、无水硫酸钠脱水、减压浓缩后用气相色谱-电子捕获检测器(GC-ECD)测定。七氟菊酯在2.5～100ng/mL、其它9种菊酯在5～200ng/mL内线性关系良好(r≥0.9954);0.05μg/L、0.5μg/L、1μg/L添加浓度水平的回收率在73.8%～100.2%之间,相对标准偏差(RSD)为2.53%～10.3%;检出限(LOD)为0.125～2.5ng/L,最低定量限(LOQ)为0.025～0.05μg/L。该方法简单快速、准确可靠,能满足渔业水质拟除虫菊酯污染的检测要求。     

液相色谱-串联质谱法测定养殖水体中的孔雀石绿

应用液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)测定养殖水体中孔雀石绿的含量。水样经二氯甲烷萃取浓缩,以1 m L50%的乙腈-乙酸铵溶液定容,采用液相色谱-三重四级杆串联质谱仪多反应监测扫描模式(MRM)检测,使用氘代孔雀石绿内标法定量。检测方法的定量限为0.010 ng/m L,线性范围为0.25~10.0 ng/m L,加标浓度在0.005~0.100 ng/m L时,平均回收率在80%~110%,相对标准偏差小于10%。实验证明,该方法比较稳定,适用于检测养殖水体中孔雀石绿的含量。     

高效液相色谱法检测水产品中的四环素类药物残留

建立了水产品中土霉素、四环素、金霉素的快速提取方法。样品用甲醇+水+甲酸=80+20+0.3的溶液和0.3%甲酸的甲醇溶液两步提取,减压蒸去甲醇,定容后高效液相色谱分析。土霉素回收率在75.90%~116.2%之间,四环素回收率在67.87%~102.2%之间,金霉素回收率在43.78%~84.17%之间,RSD15%。土霉素和四环素检出限0.1mg/kg,金霉素检出限0.2mg/kg。     

酶联免疫(ELISA)法测定水产品中呋喃唑酮代谢物AOZ的残留

采用MaxsignalTM AOZ快速检测试剂盒检测水产品中呋喃唑酮代谢物。通过对精密度、回收率和检测限等项目的测定，验证了方法的可行性。呋喃唑酮代谢物标准液在0．05ng／mL～4．5ng／mL范围内具有良好的线性，微孔板孔间变异系数为3．2％～7．7％。样品批内变异系数为5．2％～8．4％，批间变异系数为6．3％～8．9％，平均回收率为94．5％～98．4％。试剂盒的理论检测下限为0．05μg／Kg。该方法灵敏度高，重复性好，适用于水产品中呋喃唑酮代谢物残留的检测。     

水产品中辛硫磷、倍硫磷和蝇毒磷的超高效液相色谱-串联质谱法检测

[目的]建立了水产品中辛硫磷、倍硫磷和蝇毒磷3种有机磷农药的检测方法。[方法]样品经酸化乙腈提取,PSA吸附剂分散固相萃取净化,超高效液相色谱-串联质谱在多反应离子监测模式下检测,基质匹配外标法定量。结果加标浓度在10~100μg/kg范围内,线性相关系数(R)大于0.99。3种有机磷农药的平均回收率范围为65.8%~101.0%,RSD范围为11.4%~16.0%。本方法检出限为10μg/kg,定量限为20μg/kg。[结论]该方法可用于水产品中辛硫磷、倍硫磷和蝇毒磷等3种有机磷农药残留的同时测定。     

QuEChERS结合HPLC-MS-MS测定鲮体内孔雀石绿及其代谢物残留及消除规律

通过对干燥剂、分散吸附剂的种类及质量进行对比及优化,对鲮体内孔雀石绿(MG)及其代谢物的分散固相萃取/高效液相色谱-串联质谱(Qu ECh ERS-HPLC-MS/MS)联用方法进行了优化。方法以乙腈为萃取溶剂,无水硫酸镁为干燥剂,乙二胺-N-丙基硅烷(PSA)与石墨化炭黑(GCB)为分散吸附剂,电喷雾正离子模式(ESI+),多反应监测模式,内标法定量。结果显示,无水硫酸镁对样品中水分干燥效果良好,50 mg PSA+10 mg GCB可达到净化效果。在优化条件下,MG和无色孔雀石绿(LMG)在1~50 ng/m L范围内呈现良好的线性相关,相关系数r分别为0.999 21和0.999 37;方法检测限(LOD,S/N=3)为0.5μg/kg。采用该方法对鲮空白样品进行检测及加标回收率的测定,在2.0、10、25μg/kg 3个浓度水平下,MG的加标回收率为82.5%~92.6%,LMG的加标回收率为84.6%~95.1%。将该方法用于鲮体内MG及LMG残留消除规律研究,得到MG和LMG的消除半衰期分别为13.6、178.3 h,表明MG在鲮体内消除相对较快,但是其主要代谢产物LMG消除缓慢,直到40 d后低于检测限。本研究可为鲮等水产品中MG和LMG的检测提供支持技术,为水产品质量安全监管提供参考数据。     

高效液相色谱-串联质谱法测定池塘沉积物中氯霉素残留

[目的]建立一种使用液相色谱-串联质谱联用仪快速准确检测池塘沉积物中痕量氯霉素残留的方法,为水产品中氯霉素污染来源的排查提供技术支持。[方法]底泥经润湿后,经乙酸乙酯水饱和溶液提取,Sep-Pa K C_(18)固相萃取柱净化,Shim-Pack XR-ODS色谱柱分离,采用甲醇和水为流动相,并用梯度洗脱对待测物进行分离,以氘代氯霉素(氯霉素-D5)为内标,采用负离子扫描,多反应监测模式(MRM),定性离子对m/z为321→152.0,256.8,定量离子对m/z为321→152.0。[结果]氯霉素类药物在0.5~10.0 ng/m L范围内线性良好,相关系数均大于0.99,本方法的检出限为0.1μg/kg,定量限为0.3μg/kg。3个加标水平(0.5、1.0和5.0μg/kg)的平均回收率为90.1%~96.6%,相对标准偏差为2.4%~7.0%。[结论]实验结果符合氯霉素药物残留检测的相关法规要求,适用于淡水池塘沉积物中氯霉素残留的定性定量检测。     

河豚毒素胶体金免疫层析快速检测试剂盒的应用研究

在我国东南沿海地区,每年均有人因食用带有河豚毒素的河豚鱼或织纹螺引起中毒的事件。本文以河豚毒素标准品溶液分析河豚毒素胶体金层析快速检测卡的最低检测出限为0.5 MU/mL或100 ng/mL。根据河豚毒素限量值(10 MU/g)设计了织纹螺以及河豚鱼的样品前处理方法,进一步分析了20个织纹螺及河豚鱼实际样品,准确率为100%,单个样品测试时间为20 min。结果表明:河豚毒素胶体金层析快速检测卡具有灵敏度高、特异性好、操作简便、可通过肉眼直接判读结果的特性,尤其适合于基层检测机构、渔业管理单位及水产品加工企业对河豚鱼或织纹螺中河豚毒素的快速筛查与分析。     

沙丁胺醇化学发光免疫检测试剂盒的研制

该研究建立了直接竞争化学发光免疫法检猪尿中沙丁胺醇(Salbutamol,SAL)的方法。并优化了包被抗体浓度、酶标抗原浓度和加样操作模式。优化后的CLIA检测试剂盒,检测范围为0.3~24.3 ng/m L,IC50为0.615ng/m L,理论检测限小于0.1ng/m L。猪尿检测的平均回收率为87±15%,批内相对对标准偏差均小于10%。这些参数表明CLIA检测试剂盒可用于猪尿中沙丁胺醇的检测。     

应用ELISA试剂盒检测鱼肉中孔雀石绿和结晶紫

开发了一种用于检测鱼肉中孔雀石绿(MG)和结晶紫的间接竞争酶联免疫(ELISA)检测试剂盒,并对试剂盒性能进行了验证.结果表明,MG浓度在0.2～5.4ng/mL范围内有较好线性关系,50％竞争抑制率为0.50ng/mL,试剂盒检测鱼肉中MG的最低检测限为0.17ng/g.鱼肉中分别添加0.2、0.4、0.8ng/g的MG标准品,回收率均在72.4％以上,批内变异系数小于12.4％,批间变异系数小于12.9％.本方法灵敏度高,重复性好,检测时间短,可同时检测鱼肉中孔雀石绿、结晶紫、隐性孔雀石绿、隐性结晶紫等四种药物的残留总量.     

厦门市售贝类中氯霉素残留情况调查分析

为了解厦门市售常见贝类中氯霉素残留情况,本调查采集了水产品批发市场、超市、养殖场等场地的菲律宾蛤仔(Ruditapes philippinarum)、文蛤(Meretrix meretrix)、牡蛎(Ostrea gigas tnunberg)、缢蛏(Sinonovacula constricta)、贻贝(Mytilus edulis)、泥蚶(Tegillarca granosa)、寻氏肌蛤(Musculus senhousei)、扇贝(Chlamys farreri)共8种贝类169份样品,依据GB/T 20756—2006国家标准建立超高效液相色谱串联质谱法对贝类中的氯霉素残留量进行了检测调查分析。该方法在0.5~20 ng/m L范围内呈良好的线性关系,相关系数R2为0.999 8,检出限为0.1μg/kg,回收率在88%~104%之间。结果表明,169份贝类样品中,氯霉素的总检出率为3.6%(6/169),最高含量为7.05μg/kg,在8种贝类样品中,菲律宾蛤仔(Ruditapes philippinarum)和文蛤(Meretrix meretrix)的检出率较高,分别为7.7%(3/39)和6.7%(2/30)。调查结果显示,厦门市售的贝类中氯霉素残留情况依然存在,相关管理部门应该加强监管、监控,以保障广大消费者的身体健康。     

酶联免疫（ELISA）法测定水产品中氯霉素残留量

建立水产品中氯霉素残留量的酶联免疫检测方法。比较不同样品处理方法对检测结果的影响，通过对检测范围、精密度、回收率等项目的测定，验证了方法的可靠性。氯霉素标准在0．05ng／ml-4．05ng／ml范围内具有良好的线性，板问变异系数小于16．4％，样品测定的变异系数为9．4％-13.8％，乙腈水提取方法的回收率在84％-116％之间。