卵形鲳鲹消化酶活性的研究Ⅰ.成鱼和幼鱼消化酶活性

比较研究了卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)成鱼和幼鱼阶段消化酶(蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶)在不同消化器官中的活性.结果表明:1)成鱼蛋白酶在不同消化器官中的活性大小依次为胃＞前肠＞中肠＞幽门盲囊＞后肠＞肝;淀粉酶活性为前肠＞后肠＞幽门盲囊＞中肠＞肝＞胃;脂肪酶活性为前肠＞中肠＞后肠＞幽门盲囊＞肝＞胃.2)幼鱼蛋白酶在不同消化器官中的活性大小依次为胃＞肠＞幽门盲囊＞肝;淀粉酶活性为肠＞幽门盲囊＞肝＞胃;脂肪酶活性为肠＞幽门盲囊＞肝＞胃.3)成鱼不同消化器官中蛋白酶和淀粉酶的活性均小于幼鱼,成鱼胃和幽门盲囊的淀粉酶活性与幼鱼的差异显著;幼鱼胃脂肪酶活性大于成鱼,但其他器官的活性均小于成鱼.卵形鲳鲹幼鱼不同消化器官中的3种消化酶活性大小顺序与成鱼基本相似.     

卵形鲳鲶消化酶活性的研究I．成鱼和幼鱼消化酶活性在不同消化器官中的分布及其比较

比较研究了卯形鲳够（Trachinotus ovatus）成鱼和幼鱼阶段消化酶（蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶）在不同消化器官中的活性。结果表明：1）成鱼蛋白酶在不同消化器官中的活性大小依次为胃〉前肠〉中肠〉幽门盲囊〉后肠〉肝；淀粉酶活性为前肠〉后肠〉幽门盲囊〉中肠〉肝〉胃；脂肪酶活性为前肠〉中肠〉后肠〉幽门盲囊〉肝〉胃。2）幼鱼蛋白酶在不同消化器官中的活性大小依次为胃〉肠〉幽门盲囊〉肝；淀粉酶活性为肠〉幽门盲囊〉肝〉胃；脂肪酶活性为肠〉幽门盲囊〉肝〉胃。3）成鱼不同消化器官中蛋白酶和淀粉酶的活性均小于幼鱼，成鱼胃和幽门盲囊的淀粉酶活性与幼鱼的差异显著；幼鱼胃脂肪酶活性大于成鱼，但其他器官的活性均小于成鱼。卵形鲳鳕幼鱼不同消化器官中的3种消化酶活性大小顺序与成鱼基本相似。     

温度和pH值对斜带髭鲷蛋白酶、淀粉酶活性的影响

研究了温度和pH值对斜带髭鲷Hapalogenys nitens蛋白酶、淀粉酶活力的影响。结果表明，斜带髭鲷胃内pH值范围为4.9～5.4；肝胰脏pH值为5.8～6.2；肠道pH值为6.5～6.9。蛋白酶活性随温度的上升而增加，在40℃达最大，40℃以上酶活性随温度的上升而下降。在不同消化器官中，蛋白酶活性大小顺序为：胃〉前肠〉幽门盲囊〉后肠〉肝胰脏。在15～50℃范围内，斜带髭鲷消化道不同部位淀粉酶活性的最适温度均为35℃，淀粉酶活性由高到低顺序为：肝胰脏〉幽门盲囊〉前肠〉后肠〉胃。在pH值为2.2～7.6范围内，胃蛋白酶活性的最适pH值为2.8；在pH值为4.8～8.0范围内，其他消化器官蛋白酶的最适pH值均为7.2；在最适pH值下，各消化器官中的蛋白酶活性由高到低顺序为：前肠〉幽门盲囊〉后肠〉肝胰脏。在pH值为4.8～8.0范围内，胃淀粉酶活性的最适pH值为6.0，肠、肝胰脏与幽门盲囊淀粉酶的最适pH值均为6.8，活性由高到低顺序为：肝胰脏〉幽门盲囊〉前肠〉后肠〉胃。在最适温度和pH值下，蛋白酶活性由高到低顺序为：胃〉前肠〉幽门盲囊〉后肠〉肝胰脏；淀粉酶活性由高到低顺序为：肝胰脏〉幽门盲囊〉前肠〉后肠〉胃。     

卵形鲳鲹消化酶活性的研究ⅢpH对幼鱼和成鱼消化酶活性的影响

研究了pH对卵形鲳鲹幼鱼和成鱼3种主要消化酶(蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶)活力的影响。实验用鱼暂养7 d后解剖取样,在设计的10个酶反应pH值(2.2,3.2,4.2,5.2,6.2,7.2,8.0,8.6,9.6,10.6)下测定消化酶活力。结果表明:卵形鲳鲹胃内pH为强酸性,幼鱼肠内为中性偏酸性,肝、幽门盲囊和成鱼肠内为中性偏弱碱性。胃蛋白酶的最适pH值幼鱼为2.2,成鱼为3.2;肝、幽门盲囊和肠的蛋白酶活性最适pH值幼鱼为7.2,成鱼为8.0。淀粉酶活性的最适pH值幼鱼为8.0,成鱼为8.6。脂肪酶活性的最适pH值均为弱酸性,幼鱼和成鱼均为6.2。卵形鲳鲹幼鱼和成鱼3种相同消化酶活性的变化趋势相似,并以胃蛋白酶、肠淀粉酶、肠脂肪酶的活力最高。     

野生及养殖茴鱼体内ACP、AKP和CAT活力的比较研究

茴鱼是我国珍稀濒危冷水性鱼类,本研究分别对黑龙江茴鱼的野生群体及养殖群体肝、肾、肌肉组织中免疫相关的碱性磷酸酶、酸性磷酸酶及过氧化氢酶活力进行了测定。实验结果表明：两群体三种组织中AKP活力均表现为：肾脏〉肝脏〉肌肉;ACP活力均表现为：肾脏〉肌肉〉肝脏;而CAT活力表现为：肝脏〉肾脏〉肌肉。同时,肾脏及肌肉组织中,A...     

水温对细鳞鱼幼鱼消化酶活性的影响

1在水温6℃、14℃、22℃下和180×60×50cm控温水族箱中,饲养初始鱼体质量11.3±0.94g的细鳞鱼Brachymystax lenok幼鱼21d,测定了幼鱼消化器官（胃、幽门盲囊、肝脏和肠）中的蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶的活力。结果表明：水温14℃下胃蛋白酶活性最高,其次为水温6℃时,22℃时消化酶活性最低,显著低于前2个处理组（P〈0.05）。肠中脂肪酶活性最高,显著高于胃和肝中（P〈0.05）,其次为幽门盲囊。各消化器官脂肪酶活力均在14℃时最高,其中肠和幽门盲囊中脂肪酶活力显著高于其他2个处理组。各水温条件下,幽门盲囊中淀粉酶活性最高,其次为肠。6℃时,幽门盲囊中淀粉酶活性显著高于胃和肝脏中（P〈0.05）;14℃和22℃时,幽门盲囊和肠中淀粉酶活性显著高于胃和肝脏中（P〈0.05）,胃和肝脏中差异不显著（P〉0.05）。14℃时各消化器官淀粉酶活力最高,6℃时肝脏和肠中淀粉酶活性显著低于14℃时,其它组织中各处理组间淀粉酶活力差异不显著（P〉0.05）。     

野生及养殖茴鱼体内ACP、AKP和CAT活力的比较研究

茴鱼是我国珍稀濒危冷水性鱼类,本研究分别对黑龙江茴鱼的野生群体及养殖群体肝、肾、肌肉组织中免疫相关的碱性磷酸酶、酸性磷酸酶及过氧化氢酶活力进行了测定。实验结果表明：两群体三种组织中AKP活力均表现为：肾脏〉肝脏〉肌肉;ACP活力均表现为：肾脏〉肌肉〉肝脏;而CAT活力表现为：肝脏〉肾脏〉肌肉。同时,肾脏及肌肉组织中,ACP活力野生群体明显高于养殖群体相应组织,而在肝脏中,则表现为养殖群体较高;CAT活力与AKP活力变化趋势相同,均为：养殖群体肝脏及肾脏组织中,CAT活力明显高于野生群体相应组织,而在肌肉中,则表现为野生群体较高。了解和掌握养殖群体及野生群体茴鱼不同组织各种免疫相关酶活力的变化趋势,对完善并推广茴鱼全人工繁育、养殖具有重要的指导意义。     

酸性磷酸酶在文昌鱼体内的分布

文昌鱼代表由无脊椎动物进化到脊椎动物的过渡类型。关于文昌鱼体内酸性磷酸酶(ACP)的分布至今未见报道。本实验采用酶组织化学方法,首次报道ACP在文昌鱼体内的分布。结果表明,文昌鱼表皮、消化道(包括肠和肝盲囊)、生殖腺和神经系统中具有极强的ACP活性,内柱细胞顶部具有较强的ACP活性,围鳃腔上皮和鳃上皮细胞中也具有一定的ACP活性。文昌鱼体内ACP的主要功能可能与细胞内消化和免疫活动有关。     

A3α肽聚糖对牙鲆不同组织中超氧化物歧化酶及磷酸酶活性的影响

研究了口服不同剂量的A3α肽聚糖(A3α-PG)对牙鲆(Paralichthys olivaceus)体表粘液和组织中超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase, SOD)、酸性磷酸酶(Acid phosphatase, ACP)及碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase, AKP)活力的影响.饲料中A3α-PG添加量分别为0(对照),0.05%,0.10%,0.20%,0.40%,0.80%和1.60% (质量比),饲喂天数为40 d.结果表明,饲料中未添加A3α-PG时,牙鲆体表粘液、肾脏、肝脏和肌肉中SOD、ACP及AKP活性各异,其中SOD活性从高到低依次为粘液、肝脏、肌肉、肾脏;ACP活性大小依次为肝脏、肾脏、肌肉、粘液;AKP活性大小依次为肾脏、肝脏、肌肉,粘液中则检测不到AKP.饲料中添加A3α-PG后,实验组与对照组相比,各组织中SOD活性变化不大,未见显著性差异(P>0.05).ACP活性,肌肉与粘液中未见显著提高;而在肝脏中0.05%和0.40%(质量比)剂量组能显著提高其ACP活性,与对照差异显著(P<0.05);在肾脏中,0.20%(质量比)剂量组使其ACP活力得以显著提高(P<0.05).AKP活性呈现不同组织变化趋势各异,肌肉中没有明显提高,而在肾脏与肝脏中,除两个低剂量组(0.05%和0.10%) (质量比) 未能使AKP活力得以显著提高外,其他剂量组与对照组相比均有显著提高 (P<0.05或P<0.01).本次研究结果表明,A3α-PG作为一种天然免疫多糖,能对牙鲆体内氧化酶和水解酶系统产生积极地调理作用,使其非特异性免疫力得到改善与提高,可作为免疫增强剂使用,建议其适宜添加量为0.20%～0.40% (质量比).     

虾夷扇贝胚胎及早期幼虫酸性磷酸酶和碱性磷酸酶的组织化学研究

采用组织化学方法对虾夷扇贝胚胎及早期幼虫内的酸性磷酸酶(ACP)和碱性磷酸酶(AKP)进行了定位研究。结果显示:从卵细胞到D型面盘幼虫各个时期ACP和AKP都呈阳性;卵细胞中ACP阳性颗粒比较均匀地分散在细胞内,受精卵中央着色较浅;卵裂期个体较大的分裂球内阳性颗粒较多,16细胞期到囊胚期的细胞近核区域着色深;面盘幼虫可见ACP集中在内脏团和外套膜区域。卵细胞中AKP阳性颗粒主要存在于细胞中央及细胞膜附近,卵裂期、囊胚、原肠胚和担轮幼虫各个发育时期都可观察到细胞膜附近着色较深,面盘幼虫AKP活性集中在外套膜边缘和内脏团。     

盐度和溶解氧对刺参非特异性免疫酶活性的影响

测定了不同盐度(20、25、30、35、40)和不同溶氧水平(充空气,DO 7~9mg/L)充纯氧,DO15~20mg/L;不充气,DO 2~5mg/L)对刺参体腔液中酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)、溶菌酶(LZM)和超氧化物歧化酶(SOD)活性变化的影响。盐度试验结果表明,盐度急性变化会引起刺参体腔液ACP、AKP、LZM活性的升高和SOD活性降低,其中第10天时盐度对酶活性的影响最大。溶氧试验显示,过饱和溶氧(DO 15~20mg/L)可使刺参体腔液ACP、AKP、LZM、SOD活性维持在较高水平,不充气组(DO 2~5mg/L)刺参体腔液中ACP、AKP、LZM活性出现短暂升高。恢复性试验中,盐度20、25组对AKP活性和盐度20、40组对SOD活性的影响未恢复到初始水平,其余实验组均能恢复至初始水平,说明低盐对刺参免疫力的影响较大。充纯氧组刺参的AKP活性显著高于充空气组,表明高溶解氧水平在一定程度上提高了刺参免疫力。     

汞暴露对草鱼器官组织中碱性磷酸酶活性的影响

测定暴露于不同汞离子质量浓度(0 mg/L、0.05 mg/L、0.10 mg/L、0.15 mg/L、0.20 mg/L、0.25 mg/L)下草鱼(Ctenopharyngodon idella)血清、鳃、肝胰脏、脾、肾脏和肌肉等组织器官中碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AKP)活性。研究目的在于评价汞离子对草鱼生理代谢的影响。暴露周期为21 d。结果显示,与对照组相比,血清AKP活性在0.05mg/L、0.10 mg/L和0.15 mg/L汞暴露组无显著性变化(P>0.05),而在0.20 mg/L、0.25 mg/L组显著下降(P<0.01);鳃AKP活性在0.10 mg/L和0.15 mg/L汞暴露组显著上升(P<0.05或P<0.01),而0.05 mg/L、0.20 mg/L和0.25mg/L组无显著变化(P>0.05);肝胰脏和脾脏AKP活性在所有实验组均显著下降(P<0.01);肾脏AKP活性在0.05mg/L组无显著变化,其他实验组均显著升高(P<0.01);肌肉AKP活性在所有实验组均无显著性变化(P>0.05)。本研究说明草鱼暴露于不同汞离子浓度下,具有不同生理功能的器官组织的AKP活性变化存在较大差异     

A3α-肽聚糖对凡纳滨对虾磷酸酶及细胞内酚氧化酶活性的影响

为考察A3α-肽聚糖(Peptidoglycan,PG)在凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)的养成期对其免疫酶活性的影响,设立了连续投喂、间隔投喂和浸浴共6个实验组。连续投喂组中PG的添加量分别为0(对照)、0.01%、0.05%和0.1%;间隔投喂组中PG的添加量为0.05%;浸浴组的给予方式为50mg/ml,3h/次/15d。分别在30、60和90d时,测定对虾体内及血浆上清中的酸性磷酸酶(Acid phosphatase,ACP)和碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,AKP)活性,另外,在60d和90d时,测定对虾血细胞内酚氧化酶(Phenoloxidase,PO)活性。结果表明,30d时,PG浸浴组、0.05%和0.1%PG添加量组的ACP活性,各PG作用组的AKP活性均较对照组高,且0.1%PG添加量组的ACP活性及0.05%和0.1%PG添加量组的AKP活性较对照组增长显著(P<0.05);60d时,除间隔投喂组外,各组的ACP活性均较对照组高,且0.1%PG添加量组增长显著(P<0.05),而各实验组的AKP活性均较对照组高,且0.05%PG添加量组增长显著(P<0.05),除浸浴组外,各组血细胞内PO活性均有提高;90d时,浸浴组和间隔组的ACP和AKP活性均较对照组高,且间隔投喂组的AKP活性增长显著(P<0.05);间隔投喂组的血细胞内PO活性较对照组有增长。实验证明,PG能激活对虾的免疫力,并可作为免疫增强剂应用于对虾的生产。     

干露胁迫对刺参体壁非特异性免疫的影响

研究了不同温度(4、8、12、16、20、24℃和温度突变)下干露对刺参体壁非特异性免疫的影响。结果表明,在温度20和24℃条件下干露24h后,刺参全部死亡,其余处理组刺参成活率为100%。刺参体壁水解酶类和抗氧化指标对于不同温度下干露胁迫具有不同的响应:(1)在本研究的温度范围内,刺参体壁酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)活性总体随温度升高而增高,随干露时间的延长而逐渐下降;(2)刺参体壁中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和总抗氧化(T-AOC)活性等抗氧化指标呈现随温度的升高先增强,再逐渐下降的趋势,以16℃为最高。对于干露胁迫时间的响应,抗氧化酶活性等则在低温时(4~16℃)呈现先升高,然后逐渐下降的趋势,在高温(20和24℃)干露胁迫下,则呈现持续下降的趋势。(3)而模拟干法运输的刺参非特异性免疫指标的响应,总体上与12~16℃下干露胁迫相当,而且4~24h之内,其AKP、SOD活性和T-AOC和MDA数值基本保持稳定。本研究结果表明,刺参干法运输中保持适当的低温可有效降低刺参的胁迫反应,提高刺参运输的成活率。     

WSSV＋斑节对虾的血清免疫相关酶对人工感染WSSV粗提液的反应

用含3×103拷贝·g^-1、6×1062拷贝·g^-1和2×10^2拷贝·g^-1的对虾白斑综合征病毒（white spot syndrome virus,WSSV）粗提液和PBS液（对照）注射感染病毒携带量约1×10^5拷贝·g^-1的斑节对虾（Penaeusmonodon）,分别于第15分钟、第30分钟、第1小时、第3小时、第6小时、第12小时、第24小时、第48小时、第72小时取样,研究了WSSV感染对斑节对虾血清内酸性磷酸酶（acidphosphatase,ACP）、碱性磷酸酶（alkalinephospha—tase,AKP）、酚氧化酶（phenoloxidase,PO）、过氧化物酶（peroxidase,POD）和超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活性的影响。结果表明,在3种感染浓度下ACP、AKP、SOD活性总体呈现先上升后下降随后上升的趋势,其中SOD活性后期水平显著高于初期;PO、POD活性总体呈现先下降后上升随后下降最后上升的趋势,但PO后期活性水平与初期相当,而POD后期活性水平显著高于初期。各免疫相关酶的反应强度与WSSV的感染浓度存在一定关系,除ACP外其余4种酶的活性变化均以6×10^2拷贝·mL^-1浓度组最为敏感。PBS组5种免疫酶活性变化幅度均显著小于3种WSSV浓度感染组。     

不同温度下2种沼虾磷酸酶活性变化的研究

用比色法测量4℃和-70℃下离体的罗氏沼虾和日本沼虾肝胰腺中的碱性磷酸酶、酸性磷酸酶酶活性在一周内的变化。试验结果表明,4℃条件下保存的日本沼虾与罗氏沼虾的离体组织中碱性磷酸酶和酸性磷酸酶酶活性有效测定下时间为3 d,-70℃下有效测定时间为2 d,对后续酶活性试验没有大的影响。     

中华绒螯蟹感染“颤抖病”病毒后血清免疫因子的变化

对中华绒螯蟹进行颤抖病病毒悬液和PBS(对照)注射感染,研究其血清免疫因子抗菌活性(Ua)、溶菌活性(UL)、凝集活性(HA)、酚氧化酶(PO)、过氧化酶(POD)、超氧化物歧化酶(S0D)、酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)活性的变化,并对实验的结果进行统计学分析。结果表明,在中华绒螯蟹人工感染颤抖病病毒后,蟹体内的免疫因子发生了明显的变化,血清中Ua、UL活性先是降低,然后上升至高于正常值水平。P0活性先上升然后下降至低于正常值水平,POD、HA、SOD活性逐渐升高至显著水平;ACP及AKP活性则显著下降。     

三种生态环境下尼罗罗非鱼免疫因子的比较

随机选取海水池塘(盐度28)和淡水池塘养殖及水库天然增殖的3种不同生态环境下、体质量为200~500g的尼罗罗非鱼为研究材料,采用生物化学方法测定3种生态环境尼罗罗非鱼血清中碱性磷酸酶、酸性磷酸酶、过氧化物酶、谷胱甘肽还原酶的活性和蛋白质量浓度。结果显示,3种生态环境中罗非鱼血清中碱性磷酸酶和酸性磷酸酶活力差异不显著(P0.05),其余各组间罗非鱼血清中过氧化物酶和谷胱甘肽还原酶的活性及血清蛋白质量浓度差异显著(P0.05),酶活力和蛋白质量浓度依次为:水库海水池塘淡水池塘。试验结果表明,水库天然增殖的尼罗罗非鱼具有较高的磷酸酶活性。     

溶藻弧菌对三疣梭子蟹溶菌酶和磷酸酶活性的影响

将健康的三疣梭子蟹（平均体重176±21.3g）分别注射生理盐水和溶藻弧菌,在感染后0、24、48和72h分别采集不同处理组梭子蟹的血淋巴、肌肉和肝胰腺组织,测定其中的溶菌酶（LSZ）、酸性磷酸酶（ACP）及碱性磷酸酶（ALP）活性,研究溶藻弧菌对三疣梭子蟹体内免疫相关酶活的影响。结果表明,感染组梭子蟹血淋巴LSZ活性在感染后24h显著高于对照组（P〈0.05）,随后活性显著降低（P〈0.05）;肌肉和肝胰腺组织中LSZ活性在感染24h有稍微上升的趋势,但是随着感染时间的延长其活性又逐渐下降,且在感染48h后分别显著低于对照组（P〈0.05）。感染组梭子蟹不同组织中ACP和ALP酶活随着感染时间的延长均呈下降的趋势,且感染48h后显著低于对照组（P〈0.05）。试验表明,三疣梭子蟹感染溶藻弧菌后对机体免疫相关酶活指标的影响较大,导致机体免疫防御能力的减弱。     

盐度对澳洲宝石鲈幼鱼3个免疫因子活力的影响

实验室条件下测定了在盐度0、5、8、11、13、16下胁迫20d,澳洲宝石鲈（Scortum barcoo）幼鱼内脏组织中超氧化物歧化酶（SOD）、碱性磷酸酶（AKP）及酸性磷酸酶（ACP）共3个免疫相关因子的活力变化。结果表明,盐度胁迫对澳洲宝石鲈3个免疫因子均有一定的影响,在不同盐度的胁迫下,随着盐度的升高,其SOD活性先下降、再升高;碱性磷酸酶（AKP）活性在低盐度胁迫下有短暂升高的过程,然后随着盐度的升高,其活性又明显下降;而酸性磷酸酶（ACP）则是随盐度的升高逐渐增大。试验结果说明低盐度胁迫能引起宝石鲈的应激反应,适当提高其免疫力,而大幅度升高盐度可显著影响其免疫力。