白斑综合征病毒PCR检测中使用dUTP扩增的PCR产物极限长度

依据白斑综合征病毒的序列设计了7对PCR引物,扩增长度从600bp到1 800bp.结果显示,使用dUTP代替dTTP,用普通Taq酶所能扩增的最大长度约为1 400bp.Mg2+梯度研究发现,扩增片段长度越长,最适Mg2+浓度越低.使用具有3,-5’外切酶活性的Taq酶无法扩增出任何长度的片段.     

凡纳滨对虾造血激素基因全长序列分析及其克隆与表达

虾造血激素(astakine,AST)是节肢动物中具有促进造血组织细胞分化和增殖的一种细胞因子。在对白斑综合征病毒(WSSV)感染分子机制的研究中发现,WSSV的一个可能受体蛋白与AST存在特异性结合。为进一步了解WSSV感染与对虾细胞分化之间的关系,本研究应用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)结合cDNA末端快速扩增(RACE)技术,成功克隆了凡纳滨对虾Litopenaeus vannamei造血激素基因(lvast)全长cDNA(GenBank登录号:HM594944),并对该基因进行了生物信息学分析。lvast全长共1846bp,含有1个372bp的开放阅读框,编码124个氨基酸,估算分子量为13.3kD。其编码的氨基酸序列包含一个前动力蛋白(Prokineticin)结构域。基因序列和氨基酸序列同源性比较表明,凡纳滨对虾造血激素(LvAST)与斑节对虾和软尾太平蝲蛄AST同源性较高,与脊椎动物的同源性较低。通过构建包含lvast基因ORF重组表达载体pBAD/gIIIA-lvast,本研究成功表达出与预期相符合的目的蛋白,为进一步研究LvAST的结构与功能提供了理论依据和实验基础。     

酸性磷酸酶在文昌鱼体内的分布

文昌鱼代表由无脊椎动物进化到脊椎动物的过渡类型。关于文昌鱼体内酸性磷酸酶(ACP)的分布至今未见报道。本实验采用酶组织化学方法,首次报道ACP在文昌鱼体内的分布。结果表明,文昌鱼表皮、消化道(包括肠和肝盲囊)、生殖腺和神经系统中具有极强的ACP活性,内柱细胞顶部具有较强的ACP活性,围鳃腔上皮和鳃上皮细胞中也具有一定的ACP活性。文昌鱼体内ACP的主要功能可能与细胞内消化和免疫活动有关。     

几种重金属离子对半滑舌鳎组织损伤的研究

实验室条件下,1龄半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevisG櫣nther)暴露在浓度为0·1×10-6mg/L的Pb~(2+)、Zn~(2+)、Cd~(2+)、Cu~(2+)溶液中。随暴露时间的延长,半滑舌鳎的行为发生一定的变化:Cd~(2+)、Cu~(2+)组的鱼行动缓慢,应激性很差,偶尔还出现不协调的颤抖性游泳行为,试验结束时几乎不摄食;Pb~(2+)和Zn~(2+)组的鱼游动积极,与实验前无大差别。利用常规组织切片法检查Pb~(2+)、Zn~(2+)、Cd~(2+)、Cu~(2+)对半滑舌鳎鳃、肝脏、肾脏、脾脏、脑的组织损伤情况。结果显示,Cd~(2+)、Cu~(2+)对鳃、肝脏和肾脏的损伤最为严重,引起了次鳃小瓣结构的崩溃;肝脏细胞脂肪颗粒的变形和大量堆积,造血组织坏死;肾小球结构溃解和管细胞肥大。Pb~(2+)、Zn~(2+)组鱼次鳃小瓣基部上皮呈空泡状,粘液细胞数量减少,氯细胞肥大增生;肝脏脂肪颗粒堆积,肝细胞肥大增生;肾脏血细胞坏死,肾小管形态溃解和管细胞增生。对脾脏和脑的损伤未观察到。将行为学变化和生理损伤结合可以对在人工养殖过程中重金属的污染及早提出预警。     

对虾细胞培养的研究现状

对虾的细胞培养，是研究对虾不同学科和领域的重要工具之一，至今，国内外已有不关于对虾细胞培养的研究报道，本文综述了不同作者对不同对虾细胞原代培养的结果，比较了其培养方法和培养条件的异同；描述了研究尝试多种方法对原代细胞的传代培养，其中一些方法对对虾细胞系的建立起到了积极的作用，介绍了利用细胞培养技术在对虾不同领域的应用状况，尤其是对对虾病毒性疾病的研究方面应用较多。     

桡足类浮游动物细胞膜与白斑综合症病毒的结合研究

通过差速离心法提取桡足类组织细胞膜，依照本实验室确立的细胞膜与WSSV特异性的结合关系，进行了桡足类细胞膜与白斑综合症病毒(WSSV)结合实验。结果表明，桡足类细胞膜与WSSV之间存在着特异性的结合，二者的结合说明了桡足类细胞膜上存在有WSSV的受体蛋白，其为确定桡足类属于WSSV感染宿主提供了重要证据。同时，比较了凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)鳃细胞膜对桡足类细胞膜与WSSV结合的影响作用，证实了凡纳滨对虾鳃细胞膜对二者的结合具有明显的封闭作用，侧面说明了WSSV在二者细胞膜上存在有相同的受体蛋白或结合位点。桡足类细胞膜经表面活性剂Triton x-100处理后，与WSSV的结合活性没有受到影响，而经Tween-20处理能显著提高与WSSV的结合活性，提示受体蛋白在细胞膜上可能占有一段较小的跨膜区域。经SDS-PAGE分析确定了桡足类细胞膜由分子量为18～207kD范围的约33条蛋白条带组成。     

核酸检测技术在水产动物病毒感染诊断中的应用

目前,应用于水产动物病毒感染诊断中的核酸检测技术主要包括核酸杂交、聚合酶链反应、聚舍酶链反应与分子杂交联用、聚合酶链反应与免疫学联用、限制性酶切技术、环介导的等温扩增、基因芯片及测序等技术。这些技术发展迅速,并在原有基础上根据实际的需求产生出很多相应的衍生技术。它们已被广泛应用在水产动物病毒感染诊断中并发挥着巨大的作用。核酸检测技术以其无法比拟的优点得到了快速的推广和应用,有着广阔的发展空间。     

水产动物中一氧化氮合酶的研究概况

近年来发现，由一氧化氮合酶催化产生的一氧化氮参与机体的多种生理功能。NADPH-黄递酶染色法和免疫组化方法研究发现，生物体内广泛存在一氧化氮合酶。本文参阅了国内外资料，对一氧化氮及一氧化氮合酶的作用、合成、结构及组织分布进行了概括，重点对一氧化氮合酶在水产动物中研究进行了综述。     

牙鲆的头肾免疫细胞

对牙鲆（Paralichthys olivaceus)头肾印迹片、光镜片和电镜片的观察发现，其头肾主要集中于肾脏前部2个分叉部分。组织学研究证明，头肾是由基质组织网络着不同发育阶段的血细胞构成，具无肾小球等分泌结构。进一步超微观察表明，其质是由网状细胞和成纤维细胞等组成，各种免疫细胞由淋巴细胞、单核细胞、颗粒细胞（Ⅰ型和Ⅱ型）以及巨噬细胞等组成。头肾中免疫细胞丰富，其中淋巴细胞占36.6%，单核细胞占31.0%，颗粒细胞占19.7%。说明牙鲆的头肾免疫细胞种类比较丰富，是免疫细胞的主要生发中心，在鱼体免疫防御系统中占有相当重要的地位。同时以特殊颗粒细胞的分类进行了讨论。     

对虾白斑综合征病毒(WSSV)致病相关基因研究进展

介绍了最近几年白斑综合征病毒WSSV致病相关基因的研究进展,包括病毒囊膜蛋白基因、核衣壳蛋白基因、病毒复制过程的关键酶基因、细胞因子受体基因、潜伏相关基因和抑制宿主细胞凋亡机制的基因等。