三疣梭子蟹血淋巴免疫功能的初步研究

利用API ZYM试剂盒和酶活力测试盒检测了三疣梭子蟹血细胞及血清中的19种酶类及血清中溶菌酶、碱性磷酸酶、酸性磷酸酶、超氧化物歧化酶和过氧化物酶的活性。试验结果表明,在雄蟹血清和血细胞中均检测到19种酶,在雌蟹血清和血细胞中分别检测到18种和16种。碱性磷酸酶和酸性磷酸酶的活性很低。在此基础上,研究了三疣梭子蟹血清和血细胞溶解物(HLS)对溶藻弧菌的抗菌活力,结果显示血清样品对溶藻弧菌的抗菌活力较强,但其体外作用的持续时间较短;而血细胞溶菌酶对溶藻弧菌的抗菌活力较弱。     

黄芪等复方中药对锯缘青蟹免疫力的影响

将黄芪、黄芩、杜仲和甘草按照4∶3∶2∶1的质量比制成一定浓度的复方药液并注射锯缘青蟹,分析血淋巴中的酚氧化酶、碱性磷酸酶、酸性磷酸酶、过氧化物酶、超氧化物歧化酶、溶菌酶等相关的非特异免疫因子活力.结果表明,青蟹血清酚氧化酶、碱性磷酸酶、酸性磷酸酶、过氧化物酶、超氧化物歧化酶、溶菌酶的活力和血清抗菌活力比对照组显著提高(P＜0.05),除超氧化物歧化酶外,各种免疫酶活力在注射后先缓慢上升,2d达到最高值,然后缓慢下降,至第4天基本回复到正常水平.用副溶血弧菌攻毒7d后,注射复方中药提取液的锯缘青蟹,其免疫保护率达到53.33％.     

二价金属离子对光棘球海胆免疫相关酶活力的影响

二价金属离子在海洋无脊椎动物免疫相关酶的活力调控中发挥重要作用。为了解二价金属离子对光棘球海胆免疫相关酶活力的影响,采用生化方法研究了8种二价金属离子在体外不同浓度下对光棘球海胆体腔液中酸/碱性磷酸酶、过氧化氢酶、超氧化物歧化酶、酚氧化酶和髓过氧化物酶活力的影响。结果显示,Cu~(2+)可明显增强碱性磷酸酶、过氧化氢酶、超氧化物歧化酶和酚氧化酶的活力;Mn~(2+)对酸性磷酸酶、碱性磷酸酶、超氧化物歧化酶和髓过氧化物酶有强烈的激活作用;Zn~(2+)对超氧化物歧化酶和酚氧化酶有强烈的抑制作用;Fe~(2+)抑制过氧化氢酶和超氧化物歧化酶的活力;Ca~(2+)对酸性磷酸酶和髓过氧化物酶有抑制作用;Mg~(2+)对碱性磷酸酶有抑制作用;Cd~(2+)对超氧化物歧化酶和酚氧化酶有抑制作用;Pb~(2+)对过氧化氢酶、超氧化物歧化酶和酚氧化酶有抑制作用。试验结果表明,适宜浓度的Mn~(2+)和Cu~(2+)对光棘球海胆的非特异性免疫系统可能有促进作用,而Fe~(2+)、Zn~(2+)、Ca~(2+)、Mg~(2+)、Pb~(2+)和Cd~(2+)可能会削弱光棘球海胆的免疫应答能力。     

零换水条件下3种异养硝化细菌对底部充氧池塘水质和尼罗罗非鱼生长、抗氧化能力的影响

为了研究3株异养硝化细菌对底部充氧尼罗罗非鱼养殖池塘水质的净化效果,选择初始体质量为(2.66±0.94) g的尼罗罗非鱼600尾,随机平均放入20个水泥池,实验设对照组1(普通曝气头)、对照组2(底部盘式微孔曝气器)、嗜吡啶红球菌(P1-2)实验组(底部盘式微孔曝气器)、粪产碱杆菌(P3-1)实验组(底部盘式微孔曝气器)、巨大芽孢杆菌(P5-2)实验组(底部盘式微孔曝气器),每组各4个重复,分别在养殖池塘定期泼洒终浓度为5×10~5 CFU/mL的异养硝化细菌菌液。测定了不同组中各项水质指标及鱼体生长、抗氧化能力指标的变化情况。结果显示,在实验过程中,所有组的总氮浓度均呈持续上升趋势,而加菌组的各指标积累量始终低于对照组,其中,P5-2对尼罗罗非鱼养殖水体的处理效果最为理想。P5-2组水体中的总氮累积量在整个养殖周期始终低于对照组1和对照组2。P3-1组水体中的总氮累积量在整个养殖周期始终低于对照组2。P1-2组水体中的总氮累积量在第8周和第10周显著低于对照组1和对照组2。P5-2、P3-1和P1-2组水体中的氨氮累积量在整个养殖周期始终低于对照组1和对照组2。P5-2组池塘水体中的亚硝酸盐氮累积量在第2周、第6周和第8周显著低于对照组2。养殖水体中泼洒异养硝化细菌可以提高尼罗罗非鱼的抗氧化功能。与对照组1相比,P3-1和P5-2组中尼罗罗非鱼血清中的超氧化物歧化酶(SOD)活性分别提高了12.10%和8.05%,与对照组2相比,P3-1和P5-2组中尼罗罗非鱼血清中的SOD活性分别提高了21.25%和16.87%。与对照组1相比,P1-2、P3-1和P5-2组中尼罗罗非鱼血清中的总抗氧化能力(T-AOC)分别提高了82.78%、98.68%和245.70%,与对照组2相比,P3-1和P5-2组中尼罗罗非鱼血清中的T-AOC分别提高了1.69%和76.95%。研究表明,在养殖池塘中添加异养硝化细菌,可有效维护养殖水质,提高尼罗罗非鱼的抗氧化能力,对鱼体生长无影响。     

水体中泼洒复合乳杆菌对尼罗罗非鱼养殖池塘环境、肠道和鳃健康的影响

研究在尼罗罗非鱼养殖池塘中添加复合乳杆菌对养殖池塘环境、尼罗罗非鱼肠道和鳃健康的影响,为乳杆菌在尼罗罗非鱼健康养殖中的应用提供基础。在尼罗罗非鱼养殖池塘水体中泼洒复合乳杆菌(对照组:0;实验组:1.0×104 CFU/mL),实验周期为10周。复合乳杆菌的成分为干酪乳杆菌和酸鱼乳杆菌,比例为1:2.2。监测池塘水质指标、罗非鱼肠道和鳃的免疫及抗氧化指标,并运用高通量测序技术(Illumina MiSeq),比较对照组和实验组水体、底泥、尼罗罗非鱼肠道和鳃黏膜共生菌群落结构差异。结果显示,从第7周开始,实验组水体中的硝酸盐含量始终低于对照组,实验组比对照组降低了72.68%、72.00%、26.27%和21.46%;实验组水体中的总氮含量在从第6周开始低于对照组,分别降低了43.39%、44.64%、15.64%、37.57%和34.49%;实验组水样中的总磷含量从第4周开始低于对照组,分别降低了40.91%、33.33%、50.00%、33.33%、17.39%、39.29%和25.71%。与对照组相比,实验组尼罗罗非鱼肠道的碱性磷酸酶(AKP)活性提高了45.04%,实验组尼罗罗非鱼鳃的总超氧化物歧化酶(SOD)和AKP分别提高了58.26%和60.99%。复合乳杆菌的添加对尼罗罗非鱼养殖池塘水体菌群结构影响较大,并未影响池塘底泥的菌群结构,影响了尼罗罗非鱼肠道和鳃的菌群结构,其中条件致病菌不动杆菌属、泛菌属细菌的相对丰度降低,而有益细菌鲸杆菌属的相对丰度增加。因此,在养殖水体中泼洒适当浓度的复合乳杆菌可以改善池塘水质,提高尼罗罗非鱼肠道和鳃的免疫力、抗氧化能力,同时调节养殖水体、尼罗罗非鱼肠道和鳃的菌群结构。     

尼罗罗非鱼海水养殖高产试验

本文报告在4．8亩海水池塘中饲养尼罗罗非鱼，获亩产1020．8公斤，亩净产909．5公斤，商品率74．9％，亩纯收入1593．78元，成本利润121%；带动群众承包鱼塘29．12亩，亩产316公斤。尼罗罗非鱼在盐度5-18．5‰的海水中生长良好，采取投放大规格越冬鱼种、施肥与投喂配合饲料相结合，人工耢苗及增放斑鳢控制密度、适时起捕商品鱼等措施可达到增产增收的目的。尼罗罗非鱼是联合闰粮农组织(FAO)向世界推荐为当今应加注目的蛋白质资源，并定为向世界各国推荐的养殖对象。1978年引入我国，979年进入我区。1981年我区首次进行尼罗罗非鱼海水试养成功后，由于尼罗罗非鱼摄食量大，养殖饵(饲)料供应不足，几年来的养殖单产徘徊在50多公斤，商品率仅在30％左右。为探索尼罗罗非鱼海水养殖高产途径，为将来大面积海水养殖解决饲料以及饲养措施等问题提供依据，1987年我们承担了区水产局下达的《尼罗罗非鱼海水养殖高产试验》项目，在防城县火光农场4．8亩海水池塘进行了1年试验，获平均亩产1020．8公斤，亩净产909．5公斤，商品率达74．9％，亩纯收入1593．78元的结果，现将试验情况报告如下：     

光合细菌对罗非鱼免疫功能的影响

为评价光合细菌在罗非鱼养殖过程中使用效果的生物学指标,本试验设计在养殖罗非鱼的水体里添加不同浓度的光合细菌,通过测定罗非鱼酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)、谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、溶菌酶(LZM)五种免疫酶活性指标,探讨在养殖水体里添加光合细菌对罗非鱼的免疫酶活性及生长性能的影响。结果表明:添加光合细菌的浓度为104cfu/mL的鱼血清的ACP活性显著高于其他组,光合细菌的浓度为105cfu/mL的鱼血清的AKP活性显著高于其他组,光合细菌的浓度为103cfu/mL的鱼血清AST活性显著高于其他组,光合细菌的浓度为104cfu/mL和105cfu/mL添加组的鱼血清ALT活性显著高于其他组,光合细菌的浓度为104cfu/mL的鱼血清的LZM活性显著高于其他组,且实验组显著高于对照组。为推广光合细菌在罗非鱼养殖过程中提高免疫功能提供了理论依据。     

海豚链球菌感染对不同品系罗非鱼血液生化指标和肝脏HSP70 mRNA表达的影响

以吉富罗非鱼、新吉富罗非鱼、埃及尼罗罗非鱼和红罗非鱼为研究对象,饲养100d后,进行海豚链球菌(2.95×108CFU/mL)感染试验,分析攻毒前后各品系罗非鱼的血液生化指标和肝脏HSP70 mRNA表达量的变化规律。另从各桶中取20尾鱼进行同样的攻毒试验,统计攻毒后各时间点的累积死亡率。结果表明,感染海豚链球菌96h后,吉富罗非鱼和新吉富罗非鱼对病原较为敏感,累积死亡率分别达到36.67%和38.33%;埃及尼罗罗非鱼对病原敏感性较差,试验期间未见死亡。吉富罗非鱼、新吉富罗非鱼和红罗非鱼血清皮质醇和葡萄糖水平以及肝脏HSP70 mRNA的表达量在攻毒后明显提高,血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶与溶菌酶活力也呈上升趋势,碱性磷酸酶活力与甘油三酯和胆固醇水平低于攻毒前。埃及尼罗罗非鱼可以利用糖原和脂类产生的能量,提高了HSPS与一些特定免疫蛋白(溶菌酶、球蛋白等)的合成,增强了鱼体的非特异性免疫力。罗非鱼选育过程中,需要将抗病力与生长性能进行有效的结合,在注重生长速度的同时也要增强其抗应激能力,从而为罗非鱼产业的可持续发展提供保证。     

虎杖提取物对尼罗罗非鱼脂肪肝的干预作用

为探究虎杖提取物对尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)脂肪肝的干预作用,选取120尾健康尼罗罗非鱼,随机分为4组,分别投喂基础饲料(正常组,粗脂肪6%),高脂饲料(高脂组,粗脂肪21%),以及含2.5、5 g/kg虎杖提取物的高脂饲料。饲养60 d后,采集尼罗罗非鱼血液和肝组织,并测定血脂水平、抗氧化状态和基因表达。结果显示:与正常组相比,高脂饲料投喂显著提高了尼罗罗非鱼血脂水平、引起了氧化应激和炎症反应、最终导致了肝损伤发生。与高脂组相比,虎杖提取物组明显抑制了血清血脂水平和谷丙转氨酶(GPT)活性上升,以及肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)、总抗氧化能力(T-AOC)和谷胱甘肽(GSH)水平的下降;同时虎杖提取物显著降低了肝组织中丙二醛(MDA)和肝脂肪含量;此外,基因表达数据显示,虎杖提取物显著阻碍了白细胞介素-1β(IL-1β)的上调和过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPAR-α)下调。结果表明虎杖提取物可明显缓解高脂饲料引起的尼罗罗非鱼脂肪性肝损伤。     

尼罗罗非鱼在淡水和海水中的生长及对蛋白质需求的比较

以酪蛋白为蛋白源,配制蛋白质含量为19 80%～40 50%的6种精饲料,采用室内循环水养殖系统,在饱食投喂和(27±1)℃水温条件下对吉富品系尼罗罗非鱼幼鱼进行8周的饲养实验,比较其在淡水和海水中的生长及蛋白质需求。结果显示:尼罗罗非鱼在淡水和海水中生长良好,存活率分别为100%和87%～100%;随着饲料蛋白质含量增加,实验鱼的平均终重、增重率和日增重率呈线性增加,饲料系数呈线性下降,蛋白质效率也呈下降趋势。在相同的饲料蛋白水平下,上述指标在淡水鱼和海水鱼之间均无显著差异蛋白质适宜需要量为28%～32%。     

Effects of Two Densities of Caged Monosex Nile Tilapia, Oreochromis niloticus, on Water Quality, Phytoplankton Populations, and Production When Polycultured with Macrobrachium rosenbergii in Temperate Ponds

The effects of different densities of caged Nile tilapia, Oreochromis niloticus, on water quality, phytoplankton populations, prawn, and total pond production were evaluated in freshwater prawn, Macrobrachium rosenbergii, production ponds. The experiment consisted of three treatments with three 0.04‐ha replicates each. All ponds were stocked with graded, nursed juvenile prawn (0.9 ± 0.6 g) at 69,000/ha. Control (CTL) ponds contained only prawns. Low‐density polyculture (LDP) ponds also contained two cages (1 m³; 100 fish/cage) of monosex male tilapia (115.6 ± 22 g), and high‐density polyculture (HDP) ponds had four cages. Total culture period was 106 d for tilapia and 114 d for prawn. Overall mean afternoon pH level was significantly lower (P ≤ 0.05) in polyculture ponds than in CTL ponds but did not differ (P > 0.05) between LDP and HDP. Phytoplankton biovolume was reduced in polyculture treatments. Tilapia in the LDP treatment had significantly higher (P ≤ 0.05) harvest weights than in the HDP treatment. Prawn weights were higher (P ≤ 0.05) in polyculture than prawn monoculture. These data indicate that a caged tilapia/freshwater prawn polyculture system may provide pH control while maximizing pond resources in temperate areas.     

中华绒螯蟹感染“颤抖病”病毒后血清免疫因子的变化

对中华绒螯蟹进行颤抖病病毒悬液和PBS(对照)注射感染,研究其血清免疫因子抗菌活性(Ua)、溶菌活性(UL)、凝集活性(HA)、酚氧化酶(PO)、过氧化酶(POD)、超氧化物歧化酶(S0D)、酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)活性的变化,并对实验的结果进行统计学分析。结果表明,在中华绒螯蟹人工感染颤抖病病毒后,蟹体内的免疫因子发生了明显的变化,血清中Ua、UL活性先是降低,然后上升至高于正常值水平。P0活性先上升然后下降至低于正常值水平,POD、HA、SOD活性逐渐升高至显著水平;ACP及AKP活性则显著下降。     

Evaluation of Nile tilapia pond management strategies in Egypt

Five pond management strategies for Nile tilapia Oreochromis niloticus L. production were evaluated in 0.1‐ha earthen ponds in Egypt during a 145‐day production cycle. Pond management strategies developed by the Pond Dynamics/Aquaculture Collaborative Research Support Programme (PD/A CRSP) were compared with a traditional and a modified Egyptian pond management strategy. Young‐of‐year Nile (mixed‐sex or sex‐reversed) tilapia were stocked into ponds at 20 000 fish ha^?1. Sex‐reversed tilapia were stocked into chemical fertilization, organic fertilization plus formulated feed and feed only treatment ponds, whereas mixed‐sex tilapia were stocked into organic fertilization plus formulated feed and chemical plus organic fertilization plus formulated feed treatment ponds. Nile tilapia yields ranged from 1274 to 2929 kg ha^?1. Nile tilapia yields in organic fertilization plus formulated feed treatments were significantly greater than the yield from chemical fertilization ponds. PD/A CRSP pond management strategies did not produce significantly greater Nile tilapia yields than the traditional Egyptian system, but a larger percentage of harvested tilapia in the organic fertilization plus feed treatments were classified in the first and second class size categories compared with the traditional Egyptian system. Organic fertilization plus formulated feed pond management strategies had the highest net returns, average rate of return on capital and the highest margin between average price and break‐even prices to cover total variable costs or total costs.     

WSSV＋斑节对虾的血清免疫相关酶对人工感染WSSV粗提液的反应

用含3×103拷贝·g^-1、6×1062拷贝·g^-1和2×10^2拷贝·g^-1的对虾白斑综合征病毒（white spot syndrome virus,WSSV）粗提液和PBS液（对照）注射感染病毒携带量约1×10^5拷贝·g^-1的斑节对虾（Penaeusmonodon）,分别于第15分钟、第30分钟、第1小时、第3小时、第6小时、第12小时、第24小时、第48小时、第72小时取样,研究了WSSV感染对斑节对虾血清内酸性磷酸酶（acidphosphatase,ACP）、碱性磷酸酶（alkalinephospha—tase,AKP）、酚氧化酶（phenoloxidase,PO）、过氧化物酶（peroxidase,POD）和超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活性的影响。结果表明,在3种感染浓度下ACP、AKP、SOD活性总体呈现先上升后下降随后上升的趋势,其中SOD活性后期水平显著高于初期;PO、POD活性总体呈现先下降后上升随后下降最后上升的趋势,但PO后期活性水平与初期相当,而POD后期活性水平显著高于初期。各免疫相关酶的反应强度与WSSV的感染浓度存在一定关系,除ACP外其余4种酶的活性变化均以6×10^2拷贝·mL^-1浓度组最为敏感。PBS组5种免疫酶活性变化幅度均显著小于3种WSSV浓度感染组。     

嗜酸小球菌对凡纳滨对虾体液免疫因子的影响

在饲料中添加不同剂量的嗜酸小球菌投喂凡纳滨对虾,并在投喂后的20、40和60d,分别测定凡纳滨对虾血清中的一氧化氮合酶(NOS)、溶菌活力(Bacteriolytic activity)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP),并分析了这5种酶之间的相关性。结果显示,嗜酸小球菌能有效提高凡纳滨对虾体内的NOS、溶菌活力、T-SOD、ACP、AKP的活性;NOS与溶菌活力存在显著正相关性(P<0.05),与SOD存在显著负相关性,溶菌活力与AKP存在显著负相关性。表明在饲料中添加适量的嗜酸小球菌(剂量10mg/kg)可使凡纳滨对虾体液免疫因子活力到达较高的水平;凡纳滨对虾血清中一氧化氮合酶对于嗜酸小球菌的添加量较为敏感,可作为评价嗜酸小球菌使用效果的指标之一。     

盐度胁迫对三疣梭子蟹血清非特异性免疫因子的影响

采用紫外分光光度法和酶学分析方法研究了盐度(14和36)胁迫下12 h内经溶藻弧菌筛选过的三疣梭子蟹F2代(简称筛选蟹F2)的血蓝蛋白含量及血清酶活力的变化,用普通三疣梭子蟹F1代(简称普通蟹F1)作对照。试验结果表明,在高盐和低盐短时胁迫下,筛选蟹F2和普通蟹F1的血蓝蛋白含量、3种保护酶(SOD、POD和CAT)和磷酸酶(ACP和AKP)活力随时间变化呈现有升有降的变化趋势。此外,无论在低盐还是高盐胁迫下,筛选蟹F2的血蓝蛋白含量和各项血清酶活力分别在0 h(正常水平)和盐度胁迫下均显著高于普通蟹F1(P<0.05)。低盐和高盐短时胁迫对三疣梭子蟹的非特异性免疫影响显著且表现出较强的应激反应;在正常和抗盐度胁迫下,筛选蟹F2的非特异性免疫比普通蟹F1更具优势。     

卵形鲳鲹碱性磷酸酶和酸性磷酸酶的分布及其低温保存

测定了卵形鲳鲹（Trachinotus ovatus）的碱性磷酸酶（AKP）和酸性磷酸酶（ACP）在不同器官和肌肉中的活性;将样品分别置于4℃、-20℃和-80℃下保存3 d、7 d、15 d和30 d,研究不同保存温度和保存时间对样品中AKP和ACP酶活性的影响。结果表明,在卵形鲳鲹胃中未检测到AKP活性,其他器官中均检测到AKP活性,AKP活性大小顺序依次为后肠〉幽门盲囊〉肾〉中肠〉肝〉前肠〉心〉肌肉;ACP在卵形鲳鲹体内分布较广,所测器官中均有ACP活性,其活性大小顺序为肝〉肌肉〉后肠〉中肠〉幽门盲囊〉肾〉心〉前肠〉胃。低温保存试验结果表明,AKP和ACP在4℃和-20℃下保存,时间越长,活力越低;在-80℃下保存,AKP和ACP活力在30 d内基本稳定,只有幽门盲囊的AKP和ACP在长时间保存后活力明显下降。     

复方中草药对杂色鲍幼鲍血淋巴中几种酶活力的影响

将12种中草药按其不同的药理作用和药效进行配伍，形成5组复方中草药，分别编号为中草药1～5号。将以上中草药添加到杂色鲍幼鲍的人工配合饲料中，连续喂饲幼鲍，饲养47d后，测定幼鲍无细胞血淋巴中超氧化物歧化酶(SOD)、酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)、溶茵酶(LSZ)活力。结果显示，所有添加中草药的sOD活力均比对照组降低，中草药1、5号可提高幼鲍血淋巴的ACP和LSZ活力，而对AKP则起到降低的作用；中草药3、4号可提高幼鲍血淋巴的LSZ活力，却降低幼鲍血淋巴的ACP和AKP活力，中草药2号对ACP、AKP和LSZ活力均有提高作用，具有较突出的促进杂色鲍幼鲍免疫酶活力的功能。     

The in vitro effects of divalent metal ions on the activities of immune‐related enzymes in coelomic fluid from the sea cucumber Apostichopus japonicus

The immune‐related enzymes in marine animals are very sensitive to divalent metal ions. To investigate the roles divalent metal ions play in the influence on the immunity of sea cucumber Apostichopus japonicus, one of the most important commercial species in Asian countries, the effects of eight divalent metal ions at concentrations of 2.5, 5, 10, 15, 20, 25 and 30 mmol L^?1 on the activities of superoxide dismutase (SOD), phenoloxidase (PO), acid phosphatase (ACP), alkaline phosphatase (AKP) and myeloperoxidase (MPO) in coelomic fluid were determined with the nitro blue tetrazolium chloride (NBT) method, dopachrome formation method, p‐nitrophenyl phosphate (pNPP) method and 3,3′,5,5′‐tetramethyl benzidine (TMB) method. The results indicated that Mg²⁺ enhanced the activities of SOD, PO, ACP and AKP significantly and showed no obvious effect on MPO activity; Zn²⁺ increased the activities of SOD, ACP and AKP, and showed no obvious effect on the activities of PO and MPO; Cu²⁺ enhanced the activities of ACP, AKP and MPO and activated SOD and PO at a certain concentration range; Ca²⁺ and Mn²⁺ inhibited the activities of ACP and AKP; Fe²⁺ had strong inhibitory effect on SOD activity; Pb²⁺ showed inhibitions on the activities of SOD, PO, ACP and AKP; and Cd²⁺ inhibited MPO activity greatly. The data obtained in this study collectively suggest that Mg²⁺, Zn²⁺ and Cu²⁺ have potential in promotion of A. japonicus immunity, while Ca²⁺, Fe²⁺, Pb²⁺, Cd²⁺ and Mn²⁺ might be limiting factors to the immune response of A. japonicus.