溶藻弧菌对三疣梭子蟹溶菌酶和磷酸酶活性的影响

将健康的三疣梭子蟹（平均体重176±21.3g）分别注射生理盐水和溶藻弧菌,在感染后0、24、48和72h分别采集不同处理组梭子蟹的血淋巴、肌肉和肝胰腺组织,测定其中的溶菌酶（LSZ）、酸性磷酸酶（ACP）及碱性磷酸酶（ALP）活性,研究溶藻弧菌对三疣梭子蟹体内免疫相关酶活的影响。结果表明,感染组梭子蟹血淋巴LSZ活性在感染后24h显著高于对照组（P〈0.05）,随后活性显著降低（P〈0.05）;肌肉和肝胰腺组织中LSZ活性在感染24h有稍微上升的趋势,但是随着感染时间的延长其活性又逐渐下降,且在感染48h后分别显著低于对照组（P〈0.05）。感染组梭子蟹不同组织中ACP和ALP酶活随着感染时间的延长均呈下降的趋势,且感染48h后显著低于对照组（P〈0.05）。试验表明,三疣梭子蟹感染溶藻弧菌后对机体免疫相关酶活指标的影响较大,导致机体免疫防御能力的减弱。     

溶藻弧菌诱导对三疣梭子蟹血淋巴非特异性免疫水平的影响

以平均体质量为(162±26)g雌性三疣梭子蟹为试验对象,注射组从游泳足第一关节基膜注射200 μL浓度为2.4×107 CFU/mL的溶藻弧菌菌悬液,对照组注射等量无菌生理盐水.各组在注射0、24、48、72、96h后随机取9只三疣梭子蟹,从游泳足基膜部位抽取血淋巴,测定血淋巴的血细胞总数、大颗粒细胞比例、血清蛋白、酸性磷酸酶、碱性磷酸酶、一氧化氮和诱导型一氧化氮合成酶等非特异性免疫指标.结果表明,遭受低剂量的溶藻弧菌侵袭后,三疣梭子蟹血细胞总数迅速降低(P＜0.05),与对照组相比降低36％,而大颗粒细胞比例则先上升(P＜0.05),72 h后恢复至正常水平；血清蛋白含量则无明显变化；血清中酸性磷酸酶、碱性磷酸酶活性也迅速增加,并分别在24、72 h达到峰值(P＜0.01,P＜0.05),在96h后两种酶的活性均恢复至对照组水平；血清中一氧化氮含量及诱导型一氧化氮合成酶活性则稳步增加,并在96 h达到峰值(P＜0.01).研究证实低剂量的溶藻弧菌能刺激三疣梭子蟹调动血细胞、酸、碱性磷酸酶、一氧化氮合成酶系统进行免疫防御,但是各非特异性免疫指标大多具有明显的时间效应,响应速度有较大差异.     

盐度胁迫对三疣梭子蟹血清非特异性免疫因子的影响

采用紫外分光光度法和酶学分析方法研究了盐度(14和36)胁迫下12 h内经溶藻弧菌筛选过的三疣梭子蟹F2代(简称筛选蟹F2)的血蓝蛋白含量及血清酶活力的变化,用普通三疣梭子蟹F1代(简称普通蟹F1)作对照。试验结果表明,在高盐和低盐短时胁迫下,筛选蟹F2和普通蟹F1的血蓝蛋白含量、3种保护酶(SOD、POD和CAT)和磷酸酶(ACP和AKP)活力随时间变化呈现有升有降的变化趋势。此外,无论在低盐还是高盐胁迫下,筛选蟹F2的血蓝蛋白含量和各项血清酶活力分别在0 h(正常水平)和盐度胁迫下均显著高于普通蟹F1(P<0.05)。低盐和高盐短时胁迫对三疣梭子蟹的非特异性免疫影响显著且表现出较强的应激反应;在正常和抗盐度胁迫下,筛选蟹F2的非特异性免疫比普通蟹F1更具优势。     

三疣梭子蟹患"乳化病"后几种保护酶活力的变化

以酶活力试剂盒测定法研究三疣梭子蟹患“乳化病”后主要病变组织中保护酶系统的病理变化。以患病三疣梭子蟹的肝胰腺、鳃、心肌及步足肌组织为材料，研究4种组织中淀粉酶（AMS）、超氧化物岐化酶（SOD）、溶菌酶（Lysozyme）、过氧化氢酶（CAT）、碱性磷酸酶（AKP）、酸性磷酸酶（ACP）、谷草转氨酶（AST／GOT）和谷丙转氨酶（ALT／GPT）8种酶活力及丙二醛（MDA）指标的变化。试验结果表明：病变后梭子蟹4种组织中9种指标均存在不同程度的病理变化，表明酶活力指标可以作为乳化病病理分析的重要参考依据。     

黄芪等复方中药对锯缘青蟹免疫力的影响

将黄芪、黄芩、杜仲和甘草按照4∶3∶2∶1的质量比制成一定浓度的复方药液并注射锯缘青蟹,分析血淋巴中的酚氧化酶、碱性磷酸酶、酸性磷酸酶、过氧化物酶、超氧化物歧化酶、溶菌酶等相关的非特异免疫因子活力.结果表明,青蟹血清酚氧化酶、碱性磷酸酶、酸性磷酸酶、过氧化物酶、超氧化物歧化酶、溶菌酶的活力和血清抗菌活力比对照组显著提高(P＜0.05),除超氧化物歧化酶外,各种免疫酶活力在注射后先缓慢上升,2d达到最高值,然后缓慢下降,至第4天基本回复到正常水平.用副溶血弧菌攻毒7d后,注射复方中药提取液的锯缘青蟹,其免疫保护率达到53.33％.     

成年日本新糠虾血细胞组成、形态及其不同发育阶段的免疫活性酶

采用光镜和电镜的方法,以血细胞所含颗粒与否,颗粒多少和核质比等将成年日本新糠虾血细胞进行分型,并对各型血细胞所占比例进行统计。利用生化分析的方法,对不同发育阶段(新孵后0、10、20和30d)日本新糠虾全组织中磷酸酶(酸性磷酸酶和碱性磷酸酶)、溶菌酶和酚氧化酶的活性进行测定。结果表明,日本新糠虾血细胞可为3种类型,它们分别为透明细胞、半颗粒细胞和颗粒细胞。它们的胞体大小依次增大,核质比依次降低。对此3种类型血细胞比例分别统计后发现,颗粒细胞所占比例最多约为47.53%±0.02,其次是半颗粒细胞约为31.23%±0.01,最少的是透明细胞约为21.24%±0.02。日本新糠虾体内磷酸酶(酸性磷酸酶和碱性磷酸酶)、溶菌酶和酚氧化酶的活性均有随个体发育而呈降低的趋势。3种酶中以溶菌酶的活性最高,平均约为305.20U/mg蛋白,其次是酸性磷酸酶约为0.2365U/mg蛋白,而酚氧化酶和酸性磷酸酶在成体中的活性基本一致,约为0.1295U/mg蛋白。研究表明,日本新糠虾血细胞组成中,以颗粒细胞为主。溶菌酶是其主要的免疫活性物质。日本新糠虾体内磷酸酶(酸性磷酸酶和碱性磷酸酶)、溶菌酶和酚氧化酶活性有随其个体发育而逐渐...     

饲料中水解鱼蛋白对中国对虾非特异免疫的影响

在中国对虾基础饲料中用水解鱼蛋白替代0%、5%、10%和15%鱼粉蛋白,制成饲料投喂中国对虾30d,实验结束取样测定对虾生长指标并进行血细胞记数,以肝胰脏中的酸性磷酸酶、碱性磷酸酶、溶菌酶、超氧化物歧化酶活性和血清中的酸性磷酸酶、碱性磷酸酶、溶菌酶、超氧化物歧化酶、过氧化物酶、一氧化氮合酶活性为非特异免疫指标,探讨水解鱼蛋白作为免疫增强剂对中国对虾非特异性免疫效应的影响。结果表明,5%水解鱼蛋白替代鱼粉蛋白组对虾肝胰脏中酸性磷酸酶活性为0.54U/gprot,显著高于对照组和其他替代组(P<0.05);血液中总的血细胞数量最多,血清的酸性磷酸酶、碱性磷酸酶和溶菌酶活性均显著高于对照组和其他替代组(P<0.05),并且特定生长率最高。说明水解鱼蛋白作为免疫增强剂对中国对虾的非特异性免疫功能具有明显的增强作用。     

微孢子虫感染三疣梭子蟹的肌组织病理及其免疫相关酶活性

利用纯化的三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)"牙膏病"病原微孢子虫对三疣梭子蟹进行人工感染实验,观察感染蟹肌肉组织的临床变化及其超微病理,并测定感染后肌肉和肝胰腺组织酸性磷酸酶(ACP)和超氧化物歧化酶(SOD)不同时间点的活性。结果发现,微孢子虫肌肉注射感染三疣梭子蟹后,蟹的肌纤维透明度随着感染时间的延长逐渐下降并向白浊化转变。超微病理显示,注射感染176 h后,肌细胞内存在大量微孢子虫,感染蟹肌细胞出现核膜肿胀和线粒体双层膜破裂等病变,严重者肌纤维发生断裂、溶解,电镜下可见大量高电子密度的溶解灶。免疫相关酶活分析显示,微孢子虫感染后,三疣梭子蟹肌肉和肝胰腺组织ACP和SOD活性均呈现两个显著上升过程(P0.05);肝胰腺组织ACP活性始终高于肌肉组织,而两种组织的SOD活性恰好相反;感染蟹肌肉组织内两种酶活性几乎始终大于正常对照组。酶活的变化可能与蟹微孢子虫的肌肉组织亲嗜性及其增殖速度较慢等特点有关。     

三疣梭子蟹“科甬1号”生长速率、形态特征和对溶藻弧菌的耐受性

为探究三疣梭子蟹“科甬1号”新品种(简称“科甬1号”)和普通海捕野生三疣梭子蟹子1代(简称“普通蟹”)在生长速率、形态特征和对溶藻弧菌耐受性上的差异,通过对相同生长条件下 “科甬1号”和普通蟹的30、60、90、120和150日龄5个时间点进行体质量和形态指标测量,并在60、90、120和150日龄4个时间点,用浓度为1.14×10⁷ cfu/mL溶藻弧菌按10 μL/g(体质量)剂量进行体腔注射攻毒并统计死亡率。对数据进行ANOVA检验表明,在全部5个测量时间点,“科甬1号”体质量均极显著大于普通蟹体质量;“科甬1号”和普通蟹各形态特征差异均不显著;在60和90日龄2个攻毒时间点,“科甬1号”溶藻弧菌耐受性均极显著强于普通蟹,在120和150日龄2个攻毒时间点,“科甬1号”溶藻弧菌耐受性均显著强于普通蟹。LSD检验分析表明,在60～150日龄期间“科甬1号”对溶藻弧菌的耐受性较稳定,不随生长时间不同而存在显著差异,此外也表明相同浓度溶藻弧菌对相同品种60～150日龄的三疣梭子蟹根据体质量按10 μL/g剂量进行体腔注射攻毒具有相对稳定的致死率。     

pH胁迫对中华绒螯蟹5种非特异性免疫指标的影响

测定了不同pH(4.5,6.0,7.5,9.0,10.5)胁迫1、4、7、10d后中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)血细胞呼吸爆发(RP)、血细胞破碎物上清液(HLS)酚氧化酶(PO)、血清溶菌酶(LSZ)、酸性磷酸酶(ACP)及碱性磷酸酶(ALP)活性的变化.结果表明:在pH胁迫后第1天,pH4.5组...     

‘Delayed’ interference effects of air exposure on adult Chinese horseshoe crab Tachypleus tridentatus

As the haemolymph supplier of the tachypleus amebocyte lysate industry in China, Chinese horseshoe crab (Tachypleus tridentatus) inevitably undergoes air‐exposure stress during transportation and haemolymph collection. In this study, the effects of air‐exposure stress and subsequent recovery process on the activities of phosphatases, antioxidant enzymes and haemocyanin concentration in Chinese horseshoe crab were investigated to understand its ability to resist air‐exposure stress. Results showed no significant effects on the total antioxidant capacity (T‐AOC), superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT), malondialdehyde (MDA) and alkaline phosphatase (AKP) between the control and experimental groups during the air‐exposure stress period (0–4 hr), except acid phosphatase (ACP). During the subsequent recovery period in water, significant differences in plasma T‐AOC levels and SOD, CAT, AKP and ACP activities were observed between both groups. No significant effects of CAT activity, SOD activity, MDA content and T‐AOC level were noted between the two groups after 12 hr of recovery. However, the AKP and ACP activities of the experimental group were significantly lower than those of the control group. Results revealed that air exposure may affect the activities of most non‐specific immune enzymes in the plasma of Chinese horseshoe crab, showing a ‘delayed” interference effect. Nevertheless, tested antioxidant enzymes have a strong recovery ability and can generally recover to the control group level after 12 hr. Haemocyanin concentration was not affected by air‐exposure stress during the whole experiment. Hereby, Chinese horseshoe crab can strongly resist air‐exposure stress.     

Effects of hypoxia on immune responses and carbohydrate metabolism in the Chinese mitten crab,Eriocheir sinensis

In aquaculture, hypoxia is an important stressor that can inhibit the healthy development of Chinese mitten crab, Eriocheir sinensis. The aim of this work was to research on how hypoxia (1 mg/L) followed by reoxygenation affects the immune response and carbohydrate metabolism in the Chinese mitten crab. The activities of immune‐related enzymes including lysozyme (LZM), acid phosphatase (ACP), alkaline phosphatase (AKP), superoxide dismutase (SOD) and phenoloxidase (PO) and concentration changes in haemolymph glucose, trehalose and hepatic glycogen were evaluated after 8 hr of hypoxia followed by 12 hr of reoxygenation. After 8 hr of hypoxia, the activities of LZM, PO, SOD and hepatic glycogen concentration significantly decreased to the minimum when compared to the control group, but the activities of ACP and AKP, and haemolymph glucose concentration significantly increased. After 12 hr of reoxygenation, the activities of LZM, ACP, AKP and SOD recovered to the normal level except SOD in plasma, while the PO, SOD in plasma and hepatic glycogen concentration were still significantly lower than the control level. No significant change was observed in trehalose concentration during hypoxia and reoxygenation periods. These results indicated that although the activities of ACP and AKP were likely increased to facilitate the hydrolysis of foreign matter, the overall strength of the immune response was decreased as LZM, PO and SOD activities were suppressed after exposure to hypoxic conditions. The energy stores of exposed crabs were reduced due to the expenditure of energy during exposure to hypoxic stress. In general, chronic hypoxia would impair the immunocompetence and increase the energy expenditure of Chinese mitten crab, further increased the risk of pathogen infection and feed coefficient, so the negative effects of hypoxia should not be ignored.     

中华绒螯蟹感染“颤抖病”病毒后血清免疫因子的变化

对中华绒螯蟹进行颤抖病病毒悬液和PBS(对照)注射感染,研究其血清免疫因子抗菌活性(Ua)、溶菌活性(UL)、凝集活性(HA)、酚氧化酶(PO)、过氧化酶(POD)、超氧化物歧化酶(S0D)、酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)活性的变化,并对实验的结果进行统计学分析。结果表明,在中华绒螯蟹人工感染颤抖病病毒后,蟹体内的免疫因子发生了明显的变化,血清中Ua、UL活性先是降低,然后上升至高于正常值水平。P0活性先上升然后下降至低于正常值水平,POD、HA、SOD活性逐渐升高至显著水平;ACP及AKP活性则显著下降。     

副溶血弧菌感染日本蟳后对几种免疫活性酶的影响

用副溶血弧菌悬液和生理盐水(对照)注射感染日本蟳,研究其血清超氧化物歧化酶(SOD)、酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)、过氧化氢酶(CAT)活性的变化,并进行统计学分析。试验结果表明,注射副溶血性弧菌悬液组12、24、48 h后SOD活性均高于对照组,48 h达到最高;122、4 h CAT活性增加明显,24 h达最高;AKP活性5、12、24 h均有增加,高于对照组,24 h最高;ACP活性12 h开始上升,24 h达最高。在人工感染副溶血性弧菌48 h内,日本蟳体内的免疫因子发生明显的变化,血清中SOD、ACP、AKP、CAT活性在不同时间段均有显著升高趋势,高于对照组。     

复方中草药对杂色鲍幼鲍血淋巴中几种酶活力的影响

将12种中草药按其不同的药理作用和药效进行配伍，形成5组复方中草药，分别编号为中草药1～5号。将以上中草药添加到杂色鲍幼鲍的人工配合饲料中，连续喂饲幼鲍，饲养47d后，测定幼鲍无细胞血淋巴中超氧化物歧化酶(SOD)、酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)、溶茵酶(LSZ)活力。结果显示，所有添加中草药的sOD活力均比对照组降低，中草药1、5号可提高幼鲍血淋巴的ACP和LSZ活力，而对AKP则起到降低的作用；中草药3、4号可提高幼鲍血淋巴的LSZ活力，却降低幼鲍血淋巴的ACP和AKP活力，中草药2号对ACP、AKP和LSZ活力均有提高作用，具有较突出的促进杂色鲍幼鲍免疫酶活力的功能。     

鳗弧菌感染对日本鑚部分免疫活性因子的影响

对日本蟳(Charybdis japonica)进行鳗弧菌(Vibrio anguillarum)悬液和生理盐水(对照)注射感染,研究其血清免疫因子超氧化物歧化酶(SOD)、酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)、过氧化氢酶(CAT)活性的变化,并对试验结果进行统计学分析。结果表明,注射鳗弧菌悬液组SOD活性12、24、48h均高于对照组,48h达到最高;CAT活性12、24h增加非常明显,12h达最高;AKP活性5、12、24h都有增加,均高于对照,24h最高;ACP活性12h开始上升,24h达最高。在人工感染鳗弧菌48h内,日本蟳体内的免疫因子发生了明显的变化,血清中SOD、ACP、AKP、CAT活性在不同时间段均有显著升高趋势,高于对照组水平。     

不同浓度诺氟沙星对中国对虾非特异性免疫酶活的影响

向对虾配合饲料中添加不同剂量的诺氟沙星投喂中国对虾7d,分析不同时间诺氟沙星对中国对虾肌肉及鳃溶菌酶(LSZ)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、碱性磷酸酶(AKP)及酸性磷酸酶(ACP)活性的影响.结果表明,15mg/kg诺氟沙星可以显著抑制中国对虾肌肉SOD活力(P＜0.05),而对鳃SOD活力则整体呈现促进作用,该浓度组肌肉和鳃CAT及LSZ活力整体高于对照组,而AKP和ACP活力则显著低于对照组(P＜0.05);30 mg/kg诺氟沙星对中国对虾肌肉SOD活力呈现先抑制后促进的作用,而对鳃SOD活力则整体呈现抑制作用,该组肌肉和鳃CAT活力显著高于对照组(P＜0.05),肌肉LSZ活力呈现先下降后上升的趋势,而鳃LSZ活力则与对照组没有显著差异;向饲料中添加60 mg/kg诺氟沙星对中国对虾肌肉、鳃SOD、CAT、LSZ活力整体呈现促进作用,而对AKP和ACP活性则呈现显著抑制作用(P＜0.05).     

不同温度下2种沼虾磷酸酶活性变化的研究

用比色法测量4℃和-70℃下离体的罗氏沼虾和日本沼虾肝胰腺中的碱性磷酸酶、酸性磷酸酶酶活性在一周内的变化。试验结果表明,4℃条件下保存的日本沼虾与罗氏沼虾的离体组织中碱性磷酸酶和酸性磷酸酶酶活性有效测定下时间为3 d,-70℃下有效测定时间为2 d,对后续酶活性试验没有大的影响。     

嗜酸小球菌对凡纳滨对虾体液免疫因子的影响

在饲料中添加不同剂量的嗜酸小球菌投喂凡纳滨对虾,并在投喂后的20、40和60d,分别测定凡纳滨对虾血清中的一氧化氮合酶(NOS)、溶菌活力(Bacteriolytic activity)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP),并分析了这5种酶之间的相关性。结果显示,嗜酸小球菌能有效提高凡纳滨对虾体内的NOS、溶菌活力、T-SOD、ACP、AKP的活性;NOS与溶菌活力存在显著正相关性(P<0.05),与SOD存在显著负相关性,溶菌活力与AKP存在显著负相关性。表明在饲料中添加适量的嗜酸小球菌(剂量10mg/kg)可使凡纳滨对虾体液免疫因子活力到达较高的水平;凡纳滨对虾血清中一氧化氮合酶对于嗜酸小球菌的添加量较为敏感,可作为评价嗜酸小球菌使用效果的指标之一。