大鲵[Megalobatrachus dauidianus]人工繁殖的初步研究

大鲵是我国珍贵的大型两栖动物,经济价值高,但由于天然凡殖率低,加之人工捕捉强度大,而导致资源衰退;为保护增殖大鲵这一珍贵动物,湖南省水产研究所与桑植县娃娃鱼研究所协作,进行了大鲵人工凡殖的初步研究。通过试验探索了大人工催产姝方法;大鲵泄殖孔内边周有无突出的小白点是鉴别雄、雌性别的主要特征;成熟精子经显微镜观察表明:其形态与蛙相似,头部为尖长的辣椒状,尾部是一根长长的细丝;成熟卵球呈园球形,直径为5—7毫米。本实验成功地采用干湿法人工授精,获卵721颗,受精率为68%,证明大鲵凡殖为体外受精,产出卵带成长珠链条状,产出的卵有三层膜即外包膜、胶体膜与卵黄膜,卵球本身直径为9毫米,外包胶体球直径为1.7厘米;每个卵之间有胶带相连,间距为2—2.2匣米;卵为半浮性的端黄卵。大鲵胚胎发育早期的细胞分裂为不全裂卵裂;由于卵黄球大,故发育时间长达33—40天之久(从受精——胚体孵化出苗)。整个大鲵的胚胎发育过程显示出从鱼类到两栖类的过渡演变类型,因此兼有鱼类和蛙类的特点。大鲵人工孵化过程中其病害主要发现有“水霉病”,试验采用15万分之一的孔雀石绿水溶液,将卵浸洗10—15分钟,每天1—2次,连续数天,“水霉病”即可防治;其次发现静水孵化大鲵卵胚易发生胚体“贴壳”而造成中途夭折。通过本试验首次获得了人工孵化的大鲵幼苗,孵化率为2.5%。本文讨论了大鲵生殖季节、卵带及胚胎发育特点及提高孵化率等问题,这是珍贵动物大鲵人工凡殖的第一次突破,为全面解决与深入研究大鲵人工凡殖提供了可贵资料。     

栉孔扇贝（♀）×虾夷扇贝（♂）精子入卵过程的电镜观察

采用扫描电镜和透射电镜技术对栉孔扇贝(Chlamys farreri,)×虾夷扇贝(Patinopecten yessoensis,)的精子入卵过程进行观察。结果表明,这2种扇贝杂交与亲本自交的精子入卵过程没有本质的区别。成熟的精卵相遇时,相互激活,产生一系列胞间反应,卵子的激活集中表现为皮层反应、受精膜举起、成熟分裂重新启动;精子激活集中表现为顶体反应和受精锥形成。在16～18℃条件下,精子入卵的时间集中在精卵混合后的第6 min。8 min后,精子的线粒体随精核一起进入卵子中。精子入卵后精核略微膨胀,卵细胞中的线粒体在精核附近出现聚集现象。杂交中有多精入卵现象。本研究目的旨为优化扇贝种间杂交技术及探讨种间受精生物学过程提供基础依据。     

泥蚶受精过程的细胞学荧光显微观察

采用荧光染色剂ＤＡＰＩ已固定的泥蚶成熟卵和受精卵进色染色的方法，在显微镜下观察泥蚶受精细胞学过程。通过ＤＡＰＩ的染色，在荧光显微镜下可清楚观察到，泥蚶的成熟未受精卵处于第一次成熟分裂的中期，精子入卵后分裂再次启动，释放出第一和第二极体，完成成熟分裂，部分受精卵的第一极体有极明显的分裂现象，精子入卵的部位是随机的，且自精子入卵至成熟分裂完成，入卵的精子在形态等方面将发生一系列变化，形成雄性原核。雌雄     

海水及氨水对九孔鲍卵催熟的研究

分别于水温26℃、盐度32的条件下和水温24℃、盐度32以及产卵后用0．002％的氨水刺激卵子的条件下，利用光学显微镜观察了九孔鲍排出体外的成熟未受精卵的形态，并研究了形态与时间、受精与时间的关系。实验结果表明，在水温为26℃、盐度为32的条件下，卵子在排出后开始吸水膨胀，卵趋于卵膜中间。产卵20min后，卵子吸收了一定水分，卵才有受精能力，在排卵后25－50min，在用有很强活力的精子的前提下，受精率达到最高值，而在排卵2h后，卵子开始失水，卵趋于卵膜一侧，卵的受精能力开始大幅度下降。在水温24℃、盐度为32及产卵后用0．002％的氨水刺激卵子的条件下，6min后，卵子吸收了一定水分，卵大多数成熟。     

中国对虾受精过程的细胞学研究

通过光镜和电镜切片技术，对中国对虾的受挤过程进行了观察。结果表明，中国对虾成熟卵子处于第1次成熟分裂前期，卵子激活后产生胶质层，精子在卵子的诱导下产生顶体反应后进入卵子。中国对虾为多精入卵、单精受精。精子入卵后，卵子完成成熟分裂并举起围卵膜，但精子的存在并非此过程所必需。在卵子进行第1次成熟分裂时，其纺锤体旋转90°。卵子完成成熟分裂后，精卵原核原核化并向卵子中央移动，最后，精卵原核结合形成合子核，卵子完成受挤过程。     

大菱鲆成熟精子、卵子及精子入卵早期过程的电镜观察

通过人工授精和电镜技术,观察和描述了大菱鲆Scophthalmus maximus成熟精卵的形态、精子入卵的早期过程及精子入卵过程发生的一系列形态结构变化。大菱鲆卵子表面均匀地布满纵横交错的网纹,并整齐地分布许多微小孔,在动物极有一个受精孔。大菱鲆精子为无顶体类精子,由头部、中片和尾部三部分组成,中片有9～14个圆形线粒体。大菱鲆精子入卵速度非常快,授精后0～5s已经有精子通过受精孔(Micropyle)进入卵子。精子入卵过程还伴随着其他一些结构的变化,如精孔管管壁边缘由锯齿状变为平滑的环状等。     

黄颡鱼精子入卵的扫描电镜观察

应用扫描电镜观察了黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)成熟卵和精子的形态、卵子对精子的应答反应、受精孔的数量与形态、受精方式与过程。结果显示:黄颡鱼精子为鞭毛型,头部近圆球形,无顶体,单尾;卵为圆球形,卵膜表面多嵴,且有15～16条宽度不同的小沟;卵表面仅有1个受精孔,精孔管口内径约2.8μm。黄颡鱼为单精受精,受精后30 s内完成精子入卵过程。     

中华沙塘鳢(Odontobutis sinensis)精子入卵过程扫描电镜(SEM)观察

为探讨中华沙塘鳢(Odontobutis sinensis)单精入卵机制,指导中华沙塘鳢人工繁育技术,采用扫描电子显微镜(SEM)对中华沙塘鳢精子和成熟卵子的形态和精子入卵过程予以观察,较为准确地描述了中华沙塘鳢精子和成熟卵细胞的形态与结构。结果显示,中华沙塘鳢精子头部为椭圆形,长轴约为2.25±0.25μm,短轴1.00±0.20μm,颈部较短。成熟卵细胞呈鲜艳黄色,呈圆球形,直径为1.30±0.02 mm,黏性卵,具黏着丝。观察发现,中华沙塘鳢精子能够准确通过成熟卵细胞的黏着丝达到受精孔,整个授精过程平均需要60 s完成,相对于其他科鱼类时间较长。中华沙塘鳢授精15 s,精子开始通过黏着丝;20 s大量精子进入筛网;25 s精子位于筛网孔内部,部分穿过筛网;55 s大量精子通过卵细胞黏着丝;60 s精子入卵;120 s受精孔关闭。     

银鲈胚胎和仔鱼的发育

本文对银鲈胚胎和仔鱼的发育进行了观察,详细描述了发育各期的形态特征和所需时间。受精卵充分吸水后呈圆形,为浮性卵,在23-25℃时,孵化时间约为32小时,仔鱼出膜后第三天卵黄囊消失,第五天开始摄食,到第七天基本发育完善。     

瓦氏黄颡鱼胚胎发育及幼苗发育的观察

瓦氏黄颡鱼卵呈近似圆球形、浅油黄色,为沉性卵,卵球极柔软.具有二层卵膜,内层薄而透明,卵径平均为1.67mm,外层厚且遇水后产生很强粘性而附着在异物上.卵受精后吸水膨胀,卵直径达2.14mm.刚孵化出的仔鱼全长4.85～5.35mm,出膜后第3～4天开始摄食,10～12天各器官发育完善,幼鱼的外部形态特征基本与成鱼相同.     

大鲵人工繁殖技术初步研究

利用长200m、宽5．2m、高4．5m的山洞，在6m^2和0．48m^2的养殖池中用石板材和鹅卵石搭设人工洞穴，以人工养殖的Ⅴ-Ⅶ龄的子二代大鲵作为亲体开展人工繁殖研究。亲鲵培育水温19．0～20．5℃，pH7．2—7．3，DO5．8～7．4mg／L，光照〈300Lux；催产选择在7月上旬进行。激素选用LRH-A2＋HCG，剂量LRH—A2 10-20ug／kg＋HCG1000～2000IU／kg，雌雄同剂量。一次性腹腔注射；受精卵孵化温度18～18．5℃，pH7．2～7．3，DO6．0—8．0mg／L，光照〈100Lux。2010年7月催产雌鲵26尾，雄鲵24尾，催产后第4d，4尾雌鲵产卵3800粒，获受精卵962粒，受精率25．32％。受精卵经35—38d的孵化，共孵出稚鲵172尾，孵化率为17．88％。     

大鲵皮肤溃疡死亡相关的微生物区系

【目的】分析自然环境中病死大鲵和健康大鲵皮肤及水样的微生物区系差异，为科学养殖大鲵、保护野生大鲵以及开发益生菌改善大鲵养殖环境提供依据。【背景】大鲵（Andrias davidianus），俗称“娃娃鱼”，是中国特有的二级保护野生动物。主要分布在长江、黄河流域喀斯特溶洞中，具有极高的进化独特性，在全球生物多样性资源保护中占据重要地位，被称为“水中大熊猫”。最近在重庆某大鲵养殖基地出现大量大鲵染菌死亡案例，造成重大经济损失。【方法】本研究通过高通量16S rDNA基因的V4~V5区测序，对皮肤微生物区系进行差异分析，探讨大鲵在患病前后微生物区系的变化。【结果】健康大鲵和病死大鲵生活水样以及皮肤菌群的多样性、结构和功能存在显著差异。各样品Tag数量平均为97150条，测序平均长度为400bp，OUT数据显示健康大鲵生活水样和皮肤的微生物丰度远远高于病死大鲵。在健康大鲵生活水样中的优势菌群为砷氧化菌(Aliihoeflea)，而当大鲵病死后，其生活水样的优势菌群变为了金黄杆菌（Chryseobacterium）。同样，在病死大鲵皮肤样本中金黄杆菌、丛毛单胞菌属（Comamonas）、伯克氏菌目或伯克菌目（Burkholderiales）的微生物菌群丰度显著升高，而砷氧化菌、微小杆菌属（Exiguobacterium）、莱比托泉动性球菌（Planococcus rifietoensis）等微生物菌群丰度显著下降（P<0.05）。同时，病死大鲵皮肤表面有大量溃疡并伴有菌毛，具有典型的伯克氏菌属感染症状。【结论】我们的发现证实大鲵患病死亡前后皮肤微生物区系差异明显，人兽共患病菌伯克氏菌属可能是利用水媒传播感染自然环境下的大鲵并导致死亡的主要原因，为大鲵科学养殖提供了科学依据。     

大鲵肉酶解产物的制备及其抗氧化性的研究

以大鲵肉为原料,利用Aspergillus sp.酸性蛋白酶进行酶解,研究其最佳的酶解条件以及酶解产物的抗氧化作用。结果表明,大鲵肉酶解的最佳工艺条件为Aspergillus sp.酸性蛋白酶加酶量为0.4%(质量比)及底物浓度为0.1g/mL时,酶解时间5.5h,pH 2.0,温度45℃。时间飞行质谱表明酶解产物的分子量小于2 000,苯酚硫酸法测定糖含量为2%,Folin-酚试剂法测蛋白含量为93%。大鲵酶解产物清除羟基自由基(.OH)和DPPH自由基的能力随浓度升高而增强。     

鱼类培养的体细胞与成熟卵的电融合技术研究

利用极化注射仪—I型,对混有青鱼体外培养细胞的草鱼,鲢鱼成熟未受精卵进行正弦交(?)电场处理,使细胞与卵紧密接触,继而进行两次电脉冲。结果在673粒草鱼实验卵中有45粒发育至囊胚期,12粒发育至血液循环期,孵出鱼苗8尾。在224粒鲢鱼实验卵中,有68粒发育至囊胚期,13粒发育至血液循环期,孵出鱼苗6尾。鱼类体外培养细胞和未受精卵融合后,能继续分裂发育,说明已分化的体细胞核仍具有发育的全能性。     

大鲵引进与地下室人工养殖试验研究

2009年11月山东省成功引进大鲵(Andrias davidianus),开晨了大鲵地下室人工养殖试验.其结果表明:放养1 100尾,平均体重5.43 g、体长8.5 cm,经过2年饲养,平均体重1.146 kg、平均体长50.12 cm,成活率98.7％,总重1 244.6 kg,最大个体为2.3 kg.大鲵在海拔108m地区人工养殖的成功,对野生种群修复、保护及开发将起到积极的重要作用.     

ARTIFICIAL REPRODUCTION OF Penaeus japonicus BATE AS A BASIS FOR THE MASS PRODUCTION OF EGGS AND LARVAE1

Penaeus japonicus Bate is absent on the Italian coasts, but it is considered a very promising species for national aquaculture. To develop the shrimp-culture on a commercial basis, a convenient method for producing eggs and larvae of Penaeus japonicus was studied. A stock of 156 females, age class 1+ and F₃, underwent unilateral eyestalk ablation and they were stocked with males in three plastic tanks (bottom area 14 m²) at a density of 25 individuals/m² and a sex ratio of 1:1. Conditions of environment and management consisted of: temperature 21±3°C; natural light and photoperiod; total exchange of sea water every day; feeding on mussels. A month after eyestalk ablation the females were inspected every 7–10 days; mature females were transferred to the spawning tanks. Females with well developed gonads averaged 25.0% of the population of females at every inspection; 51.3% of spawners were impregnated with spermatophores; others were inseminated artificially by the method of introducing spermatophores into the thelycum. In six inspections (carried out during a period of 89 days), 3,028,525 eggs were released; a female released 17,500 eggs on the average (maximum was 123,000 eggs, minimum 4,340). The mean rate of fertilized eggs was 52.7%—67.7% from naturally inseminated females and 7.5% from the artificially inseminated ones. The mean hatching rate was 30.9%—40.1% from natural insemination and 3.3% from artificial insemination. Total amount of viable nauplii was 820,550.     

高寒鲤的形态学特征及主要经济性状

高寒鲤体色为青灰色,全鳞,体纺缍形、二龄鱼的体长／体高比值为2．55,体长／头长比值为3．3,尾柄长／尾柄高比值为0．91,空壳重／体重的指数为87.3％,食肉率为66．2％.生长快,产量比黑龙江野鲤高50％以上。抗寒能力较强,自然越冬成活率：一、二龄鱼都在95％以上,是三北地区养殖的优良鲤鱼品种。     

陆封型大西洋鲑发眼卵孵化和稚鱼养殖

本文报道了从美国引进的陆封型大西洋鲑发眼卵孵化和稚鱼养殖试验情况。经42天孵化，发眼卵的孵化率为81．85％，仔鱼至上浮稚鱼成活率为96．8％，稚鱼成活率为80％。     

青蛤受精卵和幼虫密度对孵化和生长的影响

本文报道了青蛤受精卵密度对孵化的影响和青蛤幼虫培养密度对生长的影响。受精卵密度在26个/ml、30个/ml、38个/ml、44个/ml、53个/ml时,孵化率在87.8～89.9％之间;受精卵密度为53个/ml时,幼虫畸形率较高。实验发现,幼虫的培养密度应控制在6～11个/ml,幼虫变态后,减少培养密度,可以提高幼虫成活率。     

贵定王寨河浮游藻类调查及水质评价

对贵定野生大鲵自然生态保护区内王寨河6个断面不同季节浮游藻类的种类、密度进行了调查,并采用Margalef和Shannon-wiener多样性指数进行了水质评价.结果表明,王寨河春季有浮游藻类5门83种,秋季有4门66种.王寨河水质总体上清洁,有利于大鲵(Andrias davidianus)野生种群的栖息生存.