热休克处理对金鱼胚胎发育影响的研究

采用不同的热休克温度处理金鱼受精卵,观察热休克处理对金鱼胚胎发育的影响。结果表明,较高温度的热休克处理能加快金鱼胚胎发育的速度,但过高的温度处理对金鱼胚胎有伤害或致死作用,金鱼较适宜的热休克处理温度为35℃。     

热休克法诱导日本沼虾四倍体的初步研究

以热休克抑制受精卵第一次卵裂，进行日本沼虾四倍体诱导实验，热休克温度在３８、３９、４０和４１℃，于产卵２１０￣２３０分钟后，处理１￣２分钟均可获得四倍体胚胎，４０℃处理１．５分钟，四倍体胚胎诱导率达３６．８％，３８和３９℃处理２分钟后所获得的嵌合体胚胎比率大于四倍胚胎比率，而热休克温度４０℃时，四倍体率显著高于合体比率，４１℃处理时由于有丝分裂异常导致胚胎死亡率高，更适宜的处理时间有待进一步研究，     

3种不同染色体组加倍法在草鱼人工雌核发育中的对比研究

以性成熟的普通草鱼卵子和经紫外线照射处理后遗传失活的湘江野鲤精子为材料，采用三种不同染色体加倍法诱导草鱼雌核发育，3次重复实验结果表明：在人工诱导草鱼雌核胚胎发育过程中，二倍体诱导率以冷休克法处理组最好，其次分别为秋水仙素处理组织和热克法处理组。     

冷、热休克法诱导黄颡鱼三倍体的比较研究

分别采用冷、热休克抑制第二极体释放的方法诱导黄颡鱼三倍体。结果表明,在卵受精后2min,5℃处理20min,胚胎时期的三倍体率达70%左右,孵化率50%左右,幼鱼时期三倍体(含嵌合体)的检出率为25%,此条件为冷休克处理的优化参数;在卵受精后2min,40℃处理2min,胚胎时期的三倍体诱导率达58%,孵化率为39%,幼鱼时期三倍体(含嵌合体)的检出率为40%,此条件为热休克处理的优化参数。正交分析得出,冷休克条件下起始休克时间是原肠期三倍化率和孵化率的重要影响因子,温度对畸形个体的产生有重要影响;热休克条件下,参考三倍体率、畸形率、孵化期相对存活率三者而言,休克温度均是重要因素。比较观察到冷休克处理组的胚胎受损情况严重,后期的成活率较热休克处理组要低,总体诱导效果逊于热休克处理组。     

咖啡因＋热刺激法诱导太平洋牡蛎多倍体研究初报

对太平洋牡蛎解剖取卵,然后人工授精,在50％的受精卵出现PBI时,用咖啡因＋热休克处理受精卵15分钟。在不同的温度条件下变态发育,其中34℃时的三倍体率为59．4％。结果表明,在咖啡因浓度一定时,相对低的热休克温度有利于孵化率的提高,而相对高的热休克温度则有利于提高D形幼虫的三倍体率。     

用热休克和工业养鱼技术生产三倍体鲤鱼

本研究阐述了运用工业化养鱼技术生产三倍体鲤鱼的一种方法。用热休克阻断受精卵第二次减数分裂的方法获得得三倍体。用下列热休克参数得到了最佳结果（三倍体率８０％－１０％；胚胎存活率是对照组的５０％－７０％）；受精后６分钟开始（休克前的孵化温度是２０℃），温度为４０或４１℃，时间为２或１．５分钟。该技术可大规模生产三倍体鲤鱼，因此可以研究工业化养鱼条件下三倍体的性能。     

施氏鲟精子诱导匙吻鲟雌核发育

采用照射强度为10 188 μW/(cm2·s),照射距离为15 cm的紫外线对施氏鲟(Acipenser schrenckii)精子进行4～7 min的照射,用照射后的精子对匙吻鲟(Polyodon spathula)卵进行人工授精,以探索精子的最佳紫外线照射时间.设计热休克起始时间、持续时间和休克温度3因子、3水平的正交试验,以探索人工诱导匙吻鲟雌核发育的理想热休克条件.结果表明:用紫外线照射5 min处理的施氏鲟精子,与匙吻鲟卵受精所得胚胎经染色体观察均为单倍体(n=60),表明照射精子遗传失活的有效性和可靠性;若热休克处理前受精卵保持在(18±013)℃,在一定的休克温度(35～39℃)条件下,于不同时间(受精后16～20 min)起始热休克,持续处理2 min均能诱导受精卵染色体加倍.对热休克处理条件的优化结果表明,将受精卵于受精后18 min,在37℃的水中热休克处理2 min,二倍体诱导率最高,达18.8%.染色体鉴定显示,该条件下处理的胚胎均为二倍体(2n=120),未发现单倍体和非整倍体.本研究为进一步分析异源精子诱导匙吻鲟雌核发育机制以及匙吻鲟性别决定的分子机制奠定了基础.     

热休克和水静压刺激诱导三倍体硬头鳟(Oncorhynchus mykiss)对比研究

雌性三倍体鲑鳟鱼已知是不育的,因而有利于水产养殖。本研究旨在对多种温度和水静压刺激处理诱导三倍体硬头鳟(Oncorhynchus mykiss的一种溯河回游类型)的效果加以对比。热休克和水静压刺激在各组硬头鳟卵受精后25分钟开始施行。热休克处理所用温度为26—36℃,持读1.25～20分钟;水静压处理所用压力为5.5～8.3×10~4KPa(1KPa=0.145psi)持续2～6分钟。三倍体的诱导率通过红血球细胞核长径的测定来计算。在26℃温度下持续20分钟的热休克处理和在7.6×10~4kPa压力下持续6分钟的水静压刺激诱导出100％的三倍体比率(triploid rate),但是各组卵的成活率却与处理的强度成负的相关关系。因而三倍体产量(triploid yield)(即三倍体的诱导率与孵出时的成活率的乘积)在26℃下持续10分钟的热休克或6.9×10~4KPa下持续6分钟的水静压刺激处理时为最好,分别是50.3％和49.9％。     

热休克诱导黄颡鱼三倍体的研究

以正交试验设计,采用热休克法研究了诱导三倍体黄颡鱼的适宜条件.试验结果表明,在卵受精后2 min,40 ℃持续处理2 min,三倍化率可达57.5%,原肠期相对存活率43.0%,孵化期相对存活率38.5%.分析了热休克处理的参数与三倍体出现率和胚胎相对存活率的关系,诱导参数中处理温度和诱导时机为重要因素,其次为持续时间.     

3种染色体组加倍方法诱导黄河鲇雌核发育的比较

用经紫外线照射后遗传失活的黄河鲇精子、刺激性成熟的黄河鲇卵子,进行雌核发育,采用冷休克、热休克和秋水仙素浸泡等3种染色体组加倍方法诱导黄河鲇卵进行二倍体雌核发育.实验结果表明:在人工诱导黄河鲇二倍体雌核发育过程中,以冷休克处理组的效果最好,胚胎孵化率达到8.1%;其次为秋水仙素处理组,胚胎孵化率达到6.3%;热休克处理组诱导效果较差,胚胎孵化率仅为4.0%.     

3种染色体组加倍方法诱导黄河鲇雌核发育的比较

用经紫外线照射后遗传失活的黄河鲇精子、刺激性成熟的黄河鲇卵子, 进行雌核发育, 采用冷休克、热休克和秋水仙素浸泡等3种染色体组加倍方法诱导黄河鲇卵进行二倍体雌核发育。实验结果表明: 在人工诱导黄河鲇二倍体雌核发育过程中, 以冷休克处理组的效果最好, 胚胎孵化率达到8. 1%; 其次为秋水仙素处理组, 胚胎孵化率达到6. 3%; 热休克处理组诱导效果较差, 胚胎孵化率仅为4. 0%。     

人工诱导稀有鮈鲫雄核发育条件研究

为了探究单性群体选育途径，定向生产具备特定生长和繁殖性状的苗种，满足繁殖育种需要，进行濒危鱼类保护，以稀有鮈鲫（Gobicypris rarus）为试验对象，采用紫外线-热休克雄核发育技术诱导二倍体的方法，人工诱导稀有鮈鲫超雄个体产生。试验设置14组，1号为空白对照组，2~8号紫外线总辐射剂量分别为60、90、120、150、180、210、230 mJ/cm2，9～14号紫外线-热休克组的总辐射剂量分别为60、90、120、150、180、210 mJ/cm2。处理水温均为(38.5±0.5)℃，热休克2 min。结果表明：(1) 在紫外线总辐射剂量60~230 mJ/cm2时，随着照射剂量的不断增加，紫外线辐照组、紫外线-热休克组的受精率﹑孵化率均有下降趋势；(2)紫外线和热休克处理对受精卵造成一定的损伤，成活率大幅度降低的时间点主要集中在囊胚晚期、肌肉效应期以及出膜前期，少数胚胎由于活力差，存在难以正常脱膜孵化现象；(3)经紫外线或紫外线-热休克处理的受精卵，发育速度稍慢于正常受精卵，且均存在畸形发育卵。通过紫外线-热休克雄核发育技术获得的稀有鮈鲫畸形个体较少，可能为超雄正常形态的个体则更少。研究显示，紫外线和热休克相结合处理鱼类染色体的技术，有望成为人工诱导稀有鮈鲫雄核发育的有效方法。     

热休克诱导全雌虹鳟三倍体

以虹鳟二倍体的伪雄鱼为父本（遗传型为xx），探讨了采用热休克方法阻止第二极体排放诱导全雌虹鳟三倍体的适宜条件。结果表明：虹鳟三倍体诱导率明显受处理温度、起始时间以及持续时间等因子的影响。在孵化水温为6．5℃，卵子受精后20min经26℃热处理20min，孵化率为64．62％，三倍体诱导率为86．67％；卵子受精后lOmin经26℃热处理20min，三倍体诱导率为100％，但孵化率仅为3．87％。受精卵经26℃处理的诱导效果好于24℃和28℃的（P〈0．01）。     

热休克诱导鲫鱼纯合雌核发育二倍体的研究

采用热休克的方法诱导鲫鱼纯合雌核发育二倍体。正交试验和重复试验结果分析表明，诱导鲫鱼纯合雌核发育二倍体的适宜条件是：在受精后的第46分钟和第54分钟，采用38℃、持续2min的热休克处理，雌核发育二倍体的产量最高可达18．1％。     

HSP90抑制剂根赤壳菌素对斑马鱼胚胎发育的影响

为研究热休克蛋白90(heat shock protein 90,HSP90)在斑马鱼(Danio rerio)胚胎发育中的作用,本实验采用2μmol/L、5μmol/L、10μmol/L的HSP90抑制剂根赤壳菌素(radicicol)对斑马鱼发育期胚胎进行处理,监测斑马鱼胚胎不同发育时期两个HSP90功能抑制标志基因BAG3(BCL2-associated athanogene3)和HSPB1(heat shock protein beta-1)的mRNA的表达水平,并观察不同发育时期的胚胎发育状况。结果如下:(1)实时荧光定量PCR结果显示,BAG3和HSPB1 mRNA水平在根赤壳菌素处理胚胎12 hpf(hours post-fertilization,hpf)或24 hpf后显著增高,Western blot检测到5μmol/L根赤壳菌素处理胚胎24 hpf后HSP70表达上调,证明该实验条件下HSP90功能受到抑制;(2)根赤壳菌素处理后斑马鱼胚胎发育变缓,胚胎成活率统计显示:2μmol/L、5μmol/L、10μmol/L根赤壳菌素处理24 hpf胚胎成活率分别是95%、77%、35%,成活率随根赤壳菌素浓度的增高而降低;(3)5μmol/L根赤壳菌素处理72 hpf可见部分个体色素沉积减少、心包膜增大、肌肉萎缩等发育畸形。研究结果证明HSP90在斑马鱼胚胎发育过程中发挥重要的作用,根赤壳菌素在5μmol/L时已达到较佳抑制效果且成活率较高,而且胚胎发育出现了各种形态学变化,为后期研究HSP90调节斑马鱼胚胎发育奠定了基础。     

热应激对鱼类生命活动影响的研究进展

本文综述了热应激对鱼类生命活动的影响,包括代谢与生长、抗氧化能力、热休克蛋白以及免疫相关研究成果。鱼受到热应激时,机体会产生对自身有害的活性氧,在一定的温度范围内,鱼类通过酶联通路和非酶联通路来消除体内多余的活性氧。大多水鱼类在适宜温度内,生长率与水温成正相关,超过适宜温度,鱼类代谢紊乱,生长缓慢甚至停止,长时间的热应激会导致鱼类死亡。研究鱼类的耐高温性,对创造更高的水产养殖经济效益和选育耐高温品种具有重要的理论价值和现实意义。     

热休克蛋白-70调控公畜繁殖机能的研究进展

环境热应激对哺乳动物生殖系统的影响十分严重,高温季节对畜禽热应激的缓解是养殖业中面临的一项难题。热休克蛋白与雄性动物的繁殖机能和热应激密切相关,文章就硒和热应激蛋白70对公畜繁殖机能影响的研究进展做一综述。     

热休克工业养鱼技术生产三倍体鲤鱼

本研究详尽阐述了使用工业养鱼技术生产三倍体鲤鱼的方法。通过对受精卵使用热休克抑制第二成熟分裂获得三倍性。采用下列休克参数取得了最好的结果(三倍体率80-100%、胚胎成活率为对照的70％、受精后6分钟(休克前孵化温度年20℃)开始、温度4或41℃、持续时间2分钟或1．5分钟、此技术准许大规模生产三倍体鲤鱼、因此允许工业养鱼条件下研究三倍体的特性。     

热休克诱导马苏大麻哈鱼三倍体的初步研究

为探索马苏大麻哈鱼(Oncorhynchus masou)三倍体育种技术方法,更好地解决其个体小、生长慢和性成熟后死亡率高等问题,采用热休克法进行三倍体诱导实验,设4个诱导温度(24、26、28、30℃),2个起始诱导时间(15 min、20 min)和2个持续诱导时间(15 min、20 min)共分13个实验组和1个对照组。结果显示,13个实验组均能诱导出三倍体个体,而不同温度组的诱导率差异显著,分别为13.3%、31.65%、52.28%和78.81%(P<0.0.5)。随着温度的上升,孵化率呈显著降低的趋势。结果表明,温度是影响诱导成功的关键因素,利用热休克诱导受精卵制备陆封型马苏大麻哈鱼三倍体苗种的方法是可行的,三倍体诱导的最佳条件是:水温28℃,卵子受精后15 min持续处理20 min,发眼率(72.57±0.26)%,孵化率(60.92±0.31)%,三倍体率53.1%,综合诱导效果最佳。     

脊尾白虾热休克蛋白HSP70基因的克隆及其表达分析

克隆了脊尾白虾热休克蛋白基因全长cDNA,并进行了序列分析。该基因由2 250 bp的碱基组成,开放阅读框长1 959 bp,编码由652个氨基酸组成的蛋白,基因两翼分别存在83 bp(5′端)和208 bp(3′端)的非翻译区,将该基因命名为Ec-HSP70。与其它物种HSP70s氨基酸序列进行同源性比较发现,与甲壳动物的同源性都在90%以上,表明该蛋白属于热休克蛋白HSP70家族。聚类分析表明,脊尾白虾热休克蛋白氨基酸序列与中国明对虾和凡纳滨对虾紧密聚为一支,之后聚类顺序依次为斑节对虾、日本囊对虾、刀额新对虾等。通过荧光定量RT-PCR对该基因在肝胰腺、肌肉的表达分析表明,温度、pH和氨氮胁迫都可以引起该基因的高表达,而且肝胰腺中的高表达时间相对肌肉中出现的较早。试验结果表明,温度、pH和氨氮胁迫对脊尾白虾HSP70基因表达有一定的诱导效果,但胁迫的时间过长则抑制其表达,肝胰腺对胁迫比肌肉较敏感。