冷休克法和静水压法人工诱导大黄鱼三倍体

同时采用冷休克法和静水压法进行大黄鱼（Pseudosciaena crocea Richardson）倍体诱导条件研究，同时比较适合条件下两种方法诱导效果差异以及大批量诱导组不同生长阶段三倍体榆出率的差别。结果表明：（1）冷休克法和静水压法都可成功诱导出大黄鱼二倍体。冷休克法适宜诱导条件为20℃培育水温下授精后3min，在3～4℃海水中处理8～10min；静水压法适宜诱导条件为同样培育水温下授精后3min，在静水压450kg／cm^2下处理3min。三倍体诱导率受处理时刻、处理时间和处理温度（或压力）3因素的影响。（2）综合三倍体诱导率、处理后受精卵原肠期存活率和仔鱼孵化率，静水压法诱导效果要明显优于冷休克法。（3）采用冷休克法进行大黄鱼三倍体大批量诱导，早期胚胎、初孵仔鱼和4月龄幼鱼三倍体检出率分别为34．03％、29．54％和14.81％。表明随生长发育诱导组三倍体检出率有下降趋势。     

热休克诱导马苏大麻哈鱼三倍体的初步研究

为探索马苏大麻哈鱼(Oncorhynchus masou)三倍体育种技术方法,更好地解决其个体小、生长慢和性成熟后死亡率高等问题,采用热休克法进行三倍体诱导实验,设4个诱导温度(24、26、28、30℃),2个起始诱导时间(15 min、20 min)和2个持续诱导时间(15 min、20 min)共分13个实验组和1个对照组。结果显示,13个实验组均能诱导出三倍体个体,而不同温度组的诱导率差异显著,分别为13.3%、31.65%、52.28%和78.81%(P<0.0.5)。随着温度的上升,孵化率呈显著降低的趋势。结果表明,温度是影响诱导成功的关键因素,利用热休克诱导受精卵制备陆封型马苏大麻哈鱼三倍体苗种的方法是可行的,三倍体诱导的最佳条件是:水温28℃,卵子受精后15 min持续处理20 min,发眼率(72.57±0.26)%,孵化率(60.92±0.31)%,三倍体率53.1%,综合诱导效果最佳。     

冷、热休克法诱导黄颡鱼三倍体的比较研究

分别采用冷、热休克抑制第二极体释放的方法诱导黄颡鱼三倍体。结果表明,在卵受精后2min,5℃处理20min,胚胎时期的三倍体率达70%左右,孵化率50%左右,幼鱼时期三倍体(含嵌合体)的检出率为25%,此条件为冷休克处理的优化参数;在卵受精后2min,40℃处理2min,胚胎时期的三倍体诱导率达58%,孵化率为39%,幼鱼时期三倍体(含嵌合体)的检出率为40%,此条件为热休克处理的优化参数。正交分析得出,冷休克条件下起始休克时间是原肠期三倍化率和孵化率的重要影响因子,温度对畸形个体的产生有重要影响;热休克条件下,参考三倍体率、畸形率、孵化期相对存活率三者而言,休克温度均是重要因素。比较观察到冷休克处理组的胚胎受损情况严重,后期的成活率较热休克处理组要低,总体诱导效果逊于热休克处理组。     

虾夷扇贝三倍体诱导与培育技术的研究

取繁殖期虾夷扇贝（Patinopecten yessoensis)亲体，采用阴干、流水和升温海水催产以及小水体、高密度、雌雄分池排放、人工授精的方法，可获得批重受精卵。分别使用浓度为0．05，0．10，0．15，20，0．30，0．50和0．70mmol/L的6－DMAP诱导虾夷扇贝三倍体，实验水温分别为12℃和14℃。结果表明，水温12℃，6－DMAP0．05mmol/L时，在授精后67min处理胚胎45min诱导三倍体效果较好，三倍体率达83．3％，面盘幼虫相对孵化率达69．5％；水温12℃和14℃时，6－DMAP可诱导17．3％－100．0％的三倍体面盘幼虫；6－DMAP处理组胚胎发育至面盘幼虫的时间比对照组慢，故应推迟1d选优；处理组幼虫初始壳长、壳高及日生长速度皆高于对照组；6－DMAP的残留人影响处理幼虫的成活率，用0．2ml/L的DMSO海水浸洗处理可减轻6－DMAP的副作用。     

双斑东方鲀三倍体育苗生产性研究

采用温度休克方法诱导双斑东方鲀三倍体,在水温18-20℃条件下,卵受精后5分钟用40℃的水处理双斑东方鲀受精卵10分钟,三倍体诱导率100％,孵化率相对诱导量达25％;育苗采用前期室内工厂化培育与后期土池培育相结合方法,培育出全为三倍体(体长3 cm以上)苗种5．8万尾,对应孵出苗量,成活率为34．6％。     

红鳍东方鲀三倍体诱导的初步研究

通过冷休克的方法诱导红鳍东方鲀的受精卵,孵化后的仔鱼,用PAS-Ⅲ型细胞流速仪测定其倍性,得到较高的三倍体诱导率。受精后8 min,0℃下处理15 min和受精后5 min,2℃下处理15min三倍体率最高,为100%;受精后8 min,4℃下处理10 min倍化率最低,为20%;其余几组的三倍体率为90%。正交试验结果表明,影响三倍体诱导率的主次顺序是处理时间、处理温度、处理起始时间。     

双斑东方鲀三倍体育苗生产性研究

研究了双斑东方鲀三倍体的诱导方法、技术参数的筛选及生产性育苗的模式.采用温度休克方法诱导双斑东方鲀三倍体,在水温18～20℃条件下,卵受精后5 min用40℃的水温处理双斑东方鲀受精卵10 min,三倍体诱导率100%,孵化率相对诱导量达25%;育苗采用前期室内工厂化培育与后期土池培育相结合方法,培育出全为三倍体(体长3 cm以上)苗种5.8万尾,对应孵出苗量,成活率为34.6%.     

低温诱导胡子鲶四倍体

胡子鲶卵子受精后48分钟即将开始第一次卵裂时施以4℃冷水处理20分钟，孵化率30．9％，仔鱼畸形率61．3％。对存活小鱼作染色体检查初步估计约有33％四倍体、22％嵌合体（2n－4n）、其余为二倍体。四倍体染色体数4n=112、二倍体2n=56，而嵌合体并存2n和4n两种染色体组合。四倍     

利用紫外线辐射遗传失活精子诱导虹鳟雌核发育

本试验利用紫外线辐射遗传失活精子,热休克诱导虹鳟雌核发育,确定了最佳诱导参数。结果表明,精子经紫外线照射80 s、卵受精后40 min在26℃水浴下持续处理15 min,雌核发育率最高,育成率为21.35%。利用白化体虹鳟品系金黄体色的显性性状作为鉴定雌核发育个体的依据,方法可行。     

中华绒螯蟹多倍体的诱导研究I.细胞松驰素B诱导中华绒螯蟹三倍体和四倍体胚胎

采用细胞松驰素Ｂ（Ｃ．Ｂ）处理法，研究了诱导中华绒螯蟹（Ｅｒｉｏｃｈｅｉｒｓｉｎｅｎｓｉｓ）三倍体、四倍体的可能性和处理条件。实验所用Ｃ．Ｂ浓度为０．５～２．０ｍｇ／Ｌ，处理的起始时间分别在受精后１０～２５ｍｉｎ（诱导三倍体）和８．５～９．８ｈ（诱导四倍体），处理的持续时间为１０～２５ｍｉｎ。三倍体的适宜诱导条件为卵子在受精后１５ｍｉｎ，浓度为１．５ｍｇ／Ｌ的Ｃ．Ｂ溶液处理１８ｍｉｎ。三倍体诱导率最高可达５８．１８％。根据诱导三倍体的适宜Ｃ．Ｂ处理浓度和处理时间，用１．５ｍｇ／ＬＣ．Ｂ溶液处理卵子１８ｍｉｎ，获得了２９．４６％～５７．８９％的四倍体胚胎。另外，还对中华绒螯蟹三倍体、四倍体胚胎的诱导技术、诱导参数对胚胎发育的影响等有关问题进行了分析讨论     

栉孔扇贝三倍体率在不同生长阶段的变动趋势

使用流式细胞计和染色体制片法，对栉孔扇贝同一诱导群体的胚胎、Ｄ型初期幼虫和６～７ｍｍ稚贝的三倍体率进行了检测，结合制片法对非整倍体现象进行了观察。结果表明，胚胎阶段检测出的三倍体率较高，Ｄ型初期幼虫和稚贝阶段的三倍体率先无明显差异。胚胎阶段存在的非整倍体，在稚贝阶段未查出，尚不能确定存在的可能性。     

湘云鲫、湘云鲤消化道的组织学研究

采用石蜡切片法和显微测量法研究了新型三倍体鱼－湘鱼鲫（Carassius auratus Triploid)，湘云鲤（Cyprinus carpio Triploid)消化道的组织结构，并探讨了消化道组织结构和食性之间的关系，结果表明：湘云鲫，湘云鲤食道和肠道壁均由粘膜层，粘膜下层，肌层，浆膜层4层组成，缺乏粘膜肌，二者消化道的组织结构与其各自的食性一致，二者食道粘膜上皮由单层柱状细胞和杯状细胞组成，这与其它鱼类的不同，湘云鲫比湘云鲤具有对食物更强的消化吸收能力；／湘云鲫，湘云鲤肠道可分为前肠，中肠，后肠3段。     

三倍体栉孔扇贝的生殖腺观察

在栉孔扇贝（Chlamys farreri)的繁殖季节，对人工诱导的三倍体栉孔扇贝的生殖腺进行了外观，组织学及电镜观察，结果表明，三本栉孔扇贝的生殖腺外观呈透明状，分不出雌雄，组织切片观察，三倍体雌性的生殖腺滤泡细胞数量少，为一大的空腔，沿滤泡壁排列着单层不连续的卵原细胞，呈不规则形态，另外有许多三倍体的生殖腺组织内含有大量的不定性细胞，可能是尚未分化的生殖细胞，分布在稀少的滤泡内及及其周围，未发现卵原细胞和精原细胞，无法根据滤泡的组织学牧场生区分雌雄，在检查的样品中未发现雄性个体，电镜下观察到了三倍体的精母细胞，细胞结构呈梭形，核开始收缩，细胞质内线粒体较发达，但与二倍体相比细胞及线粒体数量稀少，说明三倍体栉孔扇贝存在着雄性个体，生殖细胞增殖分化出精原细胞和少数初级精母细胞后即停止了发育。     

Preliminary study on performance of triploid Thai silver barb, Puntius gonionotus

The triploid chromosome condition was induced in Thai silver barb (Puntius gonionotus) by application of cold shock (2°C) to eggs at time intervals after activation of 0.5 min with a duration of 10 min which resulted in mean triploidy yield of 72.5% at 9 months of age. Growth rate of the 2–9-month-old, cold shock group (0.1–6.2 g/month) did not differ from that of the control (0.1–5.7 g/month). Gonadal somatic indices (GSI) of presumed triploid males and females were lower than that of control (GSI values of the presumed triploids were 35.0–60.2% and 28.7–75.9% of control males and females, respectively). Spermatogenesis and oogenesis were retarded in triploids. However, all stages of spermatogenic cells were observed in triploid males, including few spermatozoa. Oocytes of triploid females did not undergo vitellogenesis while normal oogenesis was observed in diploids. Nuclear volume of red blood cells (RBCs) of triploid fish was 1.63 times larger than that of diploids.     

6-DMAP诱导栉孔扇贝三倍体的细胞学观察

用Bouin氏液固定、连续石蜡切片方法,对6-二甲基氨基嘌呤(简称6-DMAP)抑制第二极体诱导栉孔扇贝三倍体在受精和早期卵裂过程中的细胞学变化进行了详细观察。结果表明,在授精后25min,以60mg/L的6-DMAP处理栉孔扇贝受精卵15min,有效地破坏了纺锤体结构的形成,抑制了第2次减数分裂进程,致使受精卵内形成两种核相:一种是1个大的二倍性雌核和1个雄核;另一种是两个单倍性的雌核和1个雄核。不论形成几个雌原核,它们都能与雄原核相互靠近,在卵轴中央核膜逐渐发生融合,形成合子核,三倍体的合子核在卵内所占体积明显较二倍体的大。继而,合子核经过DNA复制,最后凝缩成染色体,发生有丝分裂,其过程与正常二倍体相同。     

栉孔扇贝三倍体与二倍体的呼吸代谢比较

对栉孔扇贝三倍体的基础耗氧率进行了研究，结果表明，栉孔扇贝三倍体的基础耗氧率在18－20℃范围内随温度的升高而增加，其耗氧与温度的关系可用以下公式表示：0＝0.017e^0-1945tr^2=0.943(2N-A),O=0.072e^0-0958tr^2=0.9955(2N-B),O=0.0492e^0.1185tr^2=0.9088(2N-C),O=0.049e^0.1282t,r^2=0.9882(3N-A),0=0.1265e^0.0802t,r^2=0.9512(3N-B),O=0.0927e^0.0063tr^2=0.9861(3N-C),(O为耗氧率，t为温度）三倍体栉孔扇贝的基础耗氧率存显的昼夜节律，在上午9：00－10：00达到最高，为1．301－0.823mg/(g.h)，在夜间21：00－22：00最低，为0．0002－0.243mg/(g.h)，其基础耗氧率和昼液节律均与二倍体没有明显的差异。     

三倍体僧帽牡蛎生殖腺发育观察

在僧帽牡蛎繁殖盛期，详细观察了二倍体，三倍体僧帽牡蛎生殖腺外部形态特征，比较了成熟卵母细胞卵径和核径。结果表明，外观上三倍体生殖腺发育较二倍体差，三倍本成熟卵母细胞卵径和核径分别比地倍体大１９．６％和１７．６％，体积分别比二倍体增加７０．３％和６４．２％，组织切片检查结果，二倍体生殖腺发育正常，三倍体生殖腺发育受阻，大都在增殖期和休止期，一部分个体可发育至生长期和成熟期，并能产生成熟的卵子和精子，     

文蛤染色体核型及三倍体诱导的初步研究

文蛤染色体核型及三倍体诱导的初步研究ＡＰＲＥＬＩＭＩＮＡＲＹＳＴＵＤＹＯＮＴＨＥＫＡＲＹＯＴＹＰＥＡＮＤＴＲＩＰＬＯＩＤＩＮＤＵＣＴＩＯＮＩＮＭＥＲＥＴＲＩＸＭＥＲＥＴＲＩＸ常建波魏利平杨建敏宫向红孙逢贤（山东省海洋水产研究所，烟台２６４０００）Ｃｈ...     

太平洋牡蛎二倍体和三倍体卵母细胞发育的超微结构

本文利用电子显微镜比较研究了太平洋牡蛎二倍体和三倍体卵母细胞发育过程中细胞和各细胞器的超微结构变化。结果表明,在卵黄形成期,二倍体卵母细胞呈椭圆形,细胞器发达,细胞外布满微绒毛,卵黄粒多并均匀分布于细胞质中,卵母细胞生物合成旺盛,代谢活动强;而三倍体卵母细胞呈长条形或不规则形,细胞器少,不发达,细胞外未观察到微绒毛,卵黄粒少,有些细胞的卵黄粒畸形,卵母细胞生物合成及代谢弱。     

Optimal chemical triploid induction in geoduck clams, Panopea abrupta, by 6-dimethylaminopurine

The development of geoduck culture techniques coupled with increased market demand during the past decade led to cultured intertidal geoduck beds, over which concerns have arisen regarding the potential genetic risk posed by the reproductive contribution of hatchery outplants to wild stocks. Although an ongoing study to determine the genetic stock structure of Puget Sound geoducks has yet to yield definitive results, sterile triploids would enable geoduck culture to proceed irrespective of any genetic differences found, and may increase rate of growth. At 15 °C and salinity of 30‰, we evaluated the suitability of cytochalasin B (CB) and 6-dimethylaminopurine (6-DMAP) for triploid induction in geoducks. Parallel tests of induction agent, start time, duration, and concentration were conducted on the same gamete pool. We found optimal triploid induction (92%) and suitable survivorship (30%) resulted from a 600 μM 6-DMAP treatment. This work enables the future examination of the efficacy of triploid induction for conferring sterility and increasing growth rate in this commercially valuable species.