鱼诺卡氏菌培养条件及培养基的优化

对鱼诺卡氏菌(Nocardia seriolea)ZJ0503的增菌培养基和生长条件进行优化。研究了温度、盐度、初始pH对鱼诺卡氏菌生长的影响,并通过单因素试验对培养基的碳源、氮源和无机盐成分进行了筛选,采用正交试验法对培养基各主要成分的添加量进行了优化。结果表明,鱼诺卡氏菌最适宜生长条件为温度25℃、盐度5、pH 6.5±0.2;经筛选,鱼诺卡氏菌培养基中最佳碳源是葡萄糖,最佳氮源是酵母粉,促生长作用最强的2种无机盐是磷酸氢二钾(K2HPO4)和氯化钙(CaCl2);确立了培养基优化配方为葡萄糖20 g·L-1,酵母粉15 g·L-1,K2HPO40.75 g·L-1,CaCl20.2 g·L-1(单独灭菌),氯化钠(NaCl)5 g·L-1,pH 6.5±0.2。     

南极冰藻Pyramidomonas sp．和Chlorophyceae L-4的优化培养

设计温度、光强、盐度、pH值、营养盐等培养条件,测定其对南极冰藻中2种绿藻Pyramidomanassp.和Chloro phyceaeL-4生长的影响。研究结果表明,f/2培养基为适合这2种南极绿藻生长的适宜培养基。Pyramidomonassp.最适生长温度为2～6℃,pH为9.0;ChlorophyceaeL-4的最适生长温度为-3～6℃,pH为8.0～8.5。2种南极绿藻生长最适光强为7.0～60.0μE·m-2·s-1,最适盐度为22～33。选择NaNO3为培养基中的氮源,适合Pyramidomonassp.的浓度为0.88mmol·L-1。氮源浓度在0.56～1.47mmol·L-1,对ChlorophyceaeL-4生长影响不明显。适宜2种南极绿藻生长的磷酸盐浓度为0.13mmol·L-1。     

海洋红酵母RH1菌株发酵培养条件的研究

该研究比较了不同碳源、氮源、无机盐对海洋红酵母菌（Rhodotorula sp.）RH1菌株发酵产量的影响,通过葡萄糖、蛋白胨、酵母膏和硫酸镁（MgSO4）4因素3水平的正交试验,确定了RH1菌株的最优培养基为蛋白胨10 g.L-1,酵母膏15 g.L-1,葡萄糖20 g.L-1,MgSO40.25 g.L-1,磷酸二氢钾（KH2PO4）0.25 g.L-1,氯化钠（NaCl）10 g.L-1。结果显示,该菌株最佳摇瓶发酵条件为接种量10%,初始pH 5.0,摇瓶装液量80 mL/500 mL三角瓶,培养温度28℃,经48 h培养,菌量可达10.46×108cfu.mL-1,比优化条件前提高23.9%。还进行了RH1菌株25 L发酵罐扩大培养试验,在接种量为8%、初始pH 5.0、搅拌速率350～400 r.min-1、通气量9 L.min-1、温度28℃的条件下,经28 h的培养,菌量可达33.6×108cfu.mL-1。预计通过连续补料的方式进行培养,有望进一步提高菌量。     

蓝鳃太阳鱼诺卡氏菌的分离鉴定及药敏分析

为探明患结节病蓝鳃太阳鱼的病因,从蓝鳃太阳鱼(Lepomis macrochirus)脾脏结节处分离获得一病原菌SD1810。通过菌落形态、细菌生理生化鉴定和16S rRNA基因序列分析,确定所得菌株为鰤鱼诺卡氏菌(Nocardia seriolae)。人工回归感染试验结果显示,注射浓度为2.8×107 CFU/mL的菌液能使蓝鳃太阳鱼患病致死,发病症状与原感染鱼相似。从死亡太阳鱼体内可重新分离到与SD1810形态特征、生理生化指标相一致的病菌。对分离获得的鰤鱼诺卡氏菌进行药敏试验分析,结果表明,鰤鱼诺卡氏菌SD1810对红霉素、利福平、庆大霉素、氯霉素、阿米卡星、氟苯尼考等10种抗生素极其敏感,对头孢唑啉,诺氟沙星,青霉素、氨苄青霉素和阿莫西林等6种抗生素具有耐药性。     

乌鳢致病诺卡氏菌的鉴定及其系统发育分析

2006年6月,浙江萧山养殖乌鳢(Ophiocephalus argus Cantor)暴发一种类似细菌性的结节病,从患典型症状乌鳢肝脏和肾脏中分离到纯度一致的菌株W060622.形态结构观察显示,菌株W060622革兰氏阳性,好氧,具有弱抗酸性,菌体呈长或短杆状,或细长分枝状.常规生理生化试验表明,该菌株具有诺卡氏菌属(Nocardia)的基本特性.对其16S rRNA基因进行PCR扩增、测序及系统发育分析,结果表明,该菌株与诺卡氏菌属的菌株亲缘关系最近,与鰤鱼诺卡氏菌(Nocardia seriolea JCM 3360T)的16S rRNA基因序列相似性达99.9%.据此鉴定菌株W060622为鰤鱼诺卡氏菌(Nocardia seriolea).     

乳酸菌利用罗非鱼下脚料水解液发酵L-乳酸的探讨

以罗非鱼（Oreochromis spp.）下脚料为原料,采用高温热水抽提法提取其蛋白质作为乳酸菌发酵L-乳酸的氮源。以酵母膏作为对照,探讨了保加利亚乳杆菌（Lactobacillus bulgaricus）、嗜热链球菌（Streptococcus thermophi-lus）和鼠李糖乳杆菌（L.rhamnosus）在罗非鱼下脚料水解液培养基中的生长情况及L-乳酸的产量。结果显示,3种乳酸菌在2种培养基中均能良好地生长,pH下降明显;L-乳酸产量随乳酸菌菌种不同而异,其中鼠李糖乳杆菌在罗非鱼下脚料水解液培养基中发酵10 h后,L-乳酸净产量为3.38 g.L-1,与以酵母膏作为氮源的产酸水平相当。可见罗非鱼下脚料水解液可以替代酵母膏作为L-乳酸发酵的一种低成本氮源。     

大黄鱼结节病病原菌—诺卡氏菌的鉴定及其系统发育分析

一株分离自浙江台州、舟山海水网箱养殖患结节病大黄鱼（Larimichthys crocea）的病原菌,经生理生化试验及形态结构观察显示,该菌株革兰氏阳性,好氧,具有弱抗酸性,菌体呈长或短杆状,或细长分枝状,过氧化氢酶阳性、氧化酶阴性,还原硝酸盐,不水解酪素、黄嘌呤、酪氨酸、淀粉和明胶,能以柠檬酸盐为唯一碳源生长.对其16S rRNA基因进行PCR扩增、测序和系统发育分析,结果表明,该菌株与诺卡氏菌属的菌株亲缘关系最近,与（鱼师）鱼诺卡氏菌（Nocardia seriolea JCM 3360^T）的16S rRNA基因序列相似性达99.9%.据此鉴定结果认为,该菌株为（鱼师）鱼诺卡氏菌（Nocardia seriolea）.[中国水产科学,2006,13（3）：410-414]     

黄海黄杆菌YS-9412-130产酶发酵条件的优化

以产低温碱性蛋白酶的黄海黄杆菌YS－9412－130突变株SW2－104为培养菌株，进行碳源、氮源、无机盐、起始pH值、培养时间、接种量和接种龄等发酵条件的优化实验。实验结果证明，在以1％葡萄糖为碳源，以3.5％豆饼粉为氮源，无机盐：0.4%Na2HPO4、0.03%KH2PO4、0.02%MgSO4、0.1%Na2CO3、0.2?Cl2，起始pH值7.0，接种12h种龄的种子4％，20℃、250r/min的条件下在旋转摇床中培养36h，菌株产酶活性最高。     

一株斜生栅藻的筛选及生长条件的优化

从内蒙古本地淡水湖泊中筛选得到一株含油相对较高、长势较好的藻种,经初步确定为斜生栅藻(Scenedesmus obliquus),以BG11为基础培养基对其生长条件进行了优化.斜生栅藻的最适生长条件为:接种量为20%;培养基初始pH值为6.5;N、P、Fe、Mg四种营养盐的质量浓度分别为NaNO3 0.5 g/L,K2HPO4·3H2O 0.10 g/L.FeCl3·6H2O 0.008 g/L,MgSO4·7H2O 0.10 g/L,富油斜生栅藻在优化后的培养基中生长状况良好,稳定期最大生物量(A680)可达1.905.     

一株海洋红酵母的鉴定及其培养基的优化

通过菌落形态、培养特征和生理生化特征的测定,初步确定海洋红酵母HN-3为红酵母属的胶红酵母。比较不同的碳源、氮源、酵母膏质量分数和海水盐度对该酵母生长的影响,优化其培养基。试验结果表明,最佳培养基为2%葡萄糖、1.5%蛋白胨、1%酵母膏,盐度30。在该培养条件下,酵母菌HN-3的产菌量达到4.80×107cfu/mL,比初始发酵条件下的产菌量(4.20×107cfu/mL)提高了14.3%。     

翼茧形藻的培养条件

在实验室条件下通过单因子和正交试验,研究了温度、光照、盐度、pH值和氮、磷、铁、硅等营养盐对翼茧形藻(Amphiprora alata)生长繁殖的影响。结果表明:翼茧形藻生长的适宜温度为10～38℃,最适温度为30℃;适宜光照为500～10 000 lx,最适光照为5 000～10 000 lx;适宜盐度为2～80,最适盐度为60;适宜pH值为4～9,最适pH为7.5。经方差实验,在天然海水中添加10 mg.L-1NaNO3-N、2 mg.L-1NaH2PO4-P、0.2mg.L-1FeC6H5O7-Fe、40 mg.L-1Na2SiO3-Si,培养效果最佳。     

管角螺稚贝对亚硝酸盐耐受力研究

水温29℃时研究了管角螺（Hem ifusus tuba）稚贝[壳高（1.22±0.14）mm]在不同盐度和pH下对亚硝酸盐毒性的耐受力。试验结果表明,pH和盐度越低,亚硝酸盐对稚贝的毒害作用越大。水体pH为6.7、7.3、8.0和8.8时,亚硝酸盐对管角螺稚贝的96 h半数致死质量浓度（LC50）（95%可信区间）分别为188 mg.L-1（167～213 m.gL-1）、213 m.gL-1（195～231 m.gL-1）、254 m.gL-1（231～271 m.gL-1）和304 m.gL-1（284～321 m.gL-1）,相对应的安全质量浓度（SC）为18.8 mg.L-1、21.3 m.gL-1、25.4 mg.L-1和30.4 m.gL-1,pH8.8时亚硝酸盐对稚贝的SC是pH 6.7时的1.6倍;盐度在16、19、23和28时,亚硝酸盐对管角螺稚贝的96 hLC50（95%可信区间）分别为151 m.gL-1（138～178 m.gL-1）、171 mg.L-1（159～192 mg.L-1）、265 mg.L-1（246～282 m.gL-1）和296 m.gL-1（278～323 m.gL-1）,相对应的SC分别为15.1 m.gL-1、17.1 m.gL-1、26.5mg.L-1和29.6 m.gL-1,盐度28时亚硝酸盐对稚贝的SC是盐度16时的近2倍。     

一株南海柳珊瑚共附生细菌的鉴定及其产活性物质的培养条件优化

对一株南海柳珊瑚共附生微生物菌株(中科院南海海洋研究所,菌种编号00856)进行了分类,并对其所产的生物活性物质特性进行了研究。依据形态及16SrRNA基因序列分析,海洋细菌00856归于芽孢杆菌属(SCSIO 00856)。利用所选择的细菌培养基,在一定的培养条件(28℃,pH 7.0)下,该菌株的次级代谢产物对酿酒酵母、金黄色葡萄球菌有一定程度的抑制活性。同时,在培养6d时,该菌产生的生物活性物质对酿酒酵母抑菌效果最好。利用滤纸片法测定产物活性,以抑菌物质高产为目标,利用正交试验的方法优化了培养基的配比。结果表明,用酿酒酵母作为指示菌,以海盐素26.25g/L、葡萄糖12g/L、酵母浸粉3g/L、磷酸二氢钾3g/L、麦芽浸粉5g/L为培养基发酵培养6d,海洋细菌00856产抑菌活性物质最多。     

盐度对中华绒螯蟹雌性亲蟹代谢的影响

测定了不同盐度(0,6,12,18,24)条件下,中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)雌性亲蟹的耗氧率、CO2排出率及NH3 N排泄率,并研究了其呼吸熵、氧氮比、代谢率及能源物质供能比随盐度的变化情况。结果表明,体质量为(55.59±6.24)g的中华绒螯蟹雌性亲蟹,在水温(16±1)℃条件下,盐度对其耗氧率及NH3 N排泄率影响显著(P<0.05)。在实验盐度范围内(0~24),其耗氧率及NH3 N排泄率均随盐度的升高而下降,CO2排出率及代谢率的变化趋势与耗氧率一致,且盐度为6的实验组亲蟹CO2排出率及代谢率均与对照组差异不显著(P>0.05),在盐度12~24范围内,亲蟹CO2排出率及代谢率均显著低于对照组(P<0.05);呼吸熵及氧氮比均变化不显著(P>0.05);能源物质以脂肪的供能比例最大,其次是碳水化合物,蛋白质的供能比例最小。分析认为,中华绒螯蟹雌性亲蟹在生殖洄游过程中主要以脂肪作为供能物质,代谢率与能量消耗逐渐降低。     

统计优化硝化菌发酵培养基

为提高硝化菌的亚硝酸盐氧化能力，利用统计试验设计（Plackett-Burman和Box-Behnken设计）优化得到一最佳培养基：NaHCO3 2．0g·L^-1；NaNO2 2．36g·L^-1；Na2C030．37g·L^-1；NaCl 0．34g·L^-1；KH2P040．05g·L^-1；MgSO4·7H2O 0．05g·L^-1；FeSO4·7H2O 0．03g·L^-1。在此条件下，硝化菌的最大亚硝酸盐氧化速率达到905．0mgNO2-N·（gMLSS·d）^-1（mixed liquor suspended solids，MLSS，混合液悬浮固体）。将50L降解速率为850mgNO2-N·（gMLSS·d）^-1的硝化菌（浓度为1．99gVSS·L^-1）（volatile solid，VSS，挥发性固体）投加至0．6hm^2的养殖水体中，7d内试验水体中的亚硝酸盐浓度即降至安全浓度以下。     

Digestibility of feed ingredients in Florida pompano,Trachinotus carolinus adapted to either sea water or low salinity

Seven potential feed ingredients were evaluated for digestibility with Florida pompano Trachinotus carolinus using extruded diets. Ingredients included Special Select^? menhaden meal, fishery processing by‐product (Montlake meal), NuPro^® yeast extract, canola protein concentrate, corn protein concentrate, barley protein concentrate and Spirulina. Digestibility values were determined when fish were held at 3 and 28 g L^?1 salinity to determine the effect of salinity on digestibility. With the exception of the canola protein concentrate, the coefficients were numerically higher in pompano held at 28 g L^?1. No significant differences were detected for apparent crude protein or apparent energy digestibility between the two salinities. Amino acids were highly available from the two marine‐based ingredients and the barley and canola concentrates. The availability of alanine, leucine, isoleucine and phenylalanine was significantly higher (P < 0.05) from the barley protein concentrate at 28 g L^?1 than 3 g L^?1 salinity. Methionine and phenylalanine were highly available from all the ingredients except the yeast protein. Conversely, glycine was not well utilised from any of the ingredients. The apparent digestibility coefficients provided here allow for more precise formulation of diets for Florida pompano reared in both seawater and low‐salinity environments.