基于量子点的赭曲霉毒素AsFLISA检测技术研究

建立了基于量子点标记技术的赭曲霉毒素A(Ochratoxin A,OTA)双抗夹心荧光免疫检测(sandwich fluorescence-linked immunosorbent assay,sFLISA)体系,包含多克隆包被抗体、生物素标记的多克隆检测抗体、量子点标记的链霉亲和素等,获得了sFLISA的最佳操作参数:包被抗体浓度2.5μg/mL,检测抗体稀释500倍,量子点标记链霉亲和素稀释100倍。该方法在OTA浓度3.125~125μg/L之间时,相对荧光强度和OTA浓度呈线性关系,回归方程为y=0.0206x+0.2018,R2=0.9924;加标回收率在90.1%~110.0%之间,变异系数均小于10%,能较好地进行赭曲霉毒素A的定量检测。     

大肠埃希氏菌O157:H7的HDA检测方法的建立

采用自行建立和优化的依赖解旋酶DNA恒温扩增(HDA)检测体系,建立HDA检测方法对大肠埃希氏菌O157:H7进行检测。采用大肠埃希氏菌O157:H7的rfbE基因为目的片段设计特异性引物,建成可快速检测大肠埃希氏菌O157:H7的HDA检测法,进行了特异性和灵敏度试验,并与普通PCR方法进行了比较。结果表明:所建立起的检测法,灵敏度为4.3×103 cfu·mL-1,灵敏度与普通PCR方法相当。大肠埃希氏菌O157:H7的依赖解旋酶DNA恒温扩增检测方法具有普通PCR的特异、灵敏等特点,并且对仪器要求更低,用普通水浴槽即可进行反应。具有广阔的推广前景。     

基于量子点标记技术的鸡新城疫病毒sFLISA检测技术研究

本研究建立了基于量子点的鸡新城疫病毒(NDV)sFLISA检测方法。该方法以抗NDV多克隆抗体为捕捉抗体、以生物素标记抗NDV单克隆抗体为检测抗体、以量子点标记的链霉亲和素为荧光探针。该方法与其它有关禽类病毒(产蛋下降综合征病毒、鸡传染性法氏囊病病毒、禽白血病病毒)无交叉反应,比血凝试验灵敏,为临床早期快速检测NDV提供了行之有效的方法。     

纳升级反相液相色谱-串联质谱法分析麦氏弧菌蛋白质组

[目的]较系统地研究分析麦氏弧菌提取蛋白质.[方法]利用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和纳升级反相液相色谱-串联质谱(nano-RPLC-MS/MS)法系统分析了来源于美国龙虾的一株麦氏弧菌F5-1提取总蛋白和总蛋白直接酶解产物,并进行数据库检索鉴定蛋白质.纳升级反相液相色谱分析条件为:上样量为5ul,经C18预柱(200 μm ×0.5 mm,3μmn,120 A)脱盐10 min,再经过ChromXPC18-CL毛细管柱(75 μm×15 cm,3μ,m,120 A)分析,2％乙腈(0.1％甲酸)-98％乙腈(0.1％甲酸)梯度洗脱90 min,采用ESI-Q-TOF MS,在IDA采集模式下分析鉴定麦氏弧菌提取总蛋白酶解产物.[结果]直接酶解鉴定到1 538种蛋白质,通过Gene Ontolo-gy分析了麦氏弧菌F5-1提取总蛋白的分子功能、生物进程和细胞组分.提取的麦氏弧菌蛋白具有催化、结合、结构分子、转录调节因子等功能活性,其中催化活性的蛋白比例较大,且多为参与代谢进程的相关酶类.[结论]研究可为麦氏弧菌蛋白质组学的深入研究奠定基础.     

南极冰藻Chlamydomonas sp．ICE-L的抗盐性

以南极冰藻(ChlamydomonaS sp．)为材料对其抗盐性进行研究，结果表明，冰藻在盐度33下生长良好，在盐度66和99也有较大的生长量，盐度132下也能生存，可以维持原有的生物量，而盐度165对冰藻则是致命的，仅能存活8d；常温藻(Chlamydomonas monadina)仅能在盐度小于99时生存。     

试论章邯军构成的历史变迁

章邯军在秦末历史上具有重要地位。然而关于其构成情况,史书中记载不详。章邯军的构成经历了一个变迁的过程：它最初由刑徒和奴隶所组成;其后,由秦北方军团主力和咸阳附近军民所组成;而当章邯军成为秦王朝军事支柱时,它最终由秦北方军团和关中子弟所构成。     

南极冰藻Chlamyaomonas sp.ICE-L的抗盐性

以南极冰藻（Chlamydomonas sp．）为材料对其抗盐性进行研究，结果表明，冰藻在盐度33下生长良好，在盐度66和99也有较大的生长龟，盐度132下也能生存，可以维持原有的生物量，而盐度165对冰藻则是致命的，仅能存活8d；常温藻（Chlamyxlomonasmonadina）仅能在盐度小于99时生存。由此可以看出，南极藻类较常温藻可抗更高的盐度。同时测定了与盐度变化相关的膜系统变化，与常温藻相比，南极冰藻中的超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）和脯氨酸含量较高，而膜透性较低；经盐度99胁迫后，以上4种生化指标都升高。本研究初步结论为，超氧化物歧化酶、丙二醛、脯氨酸和膜透性对南极冰藻的抗盐性研究均有较好的指导意义。这项研究旨为南极冰藻抗盐机理研究提供基础依据。     

依赖于核酸序列恒温扩增技术快速检测副溶血性弧菌方法的建立

为建立副溶血性弧菌的快速检测方法,本研究采用依赖于核酸序列恒温扩增(NASBA)技术,以副溶血性弧菌的tlh基因为扩增的靶基因设计特异性引物和探针,建立可快速扩增副溶血性弧菌的NASBA方法.特异性和灵敏度试验结果表明:该NASBA方法对副溶血性弧菌的最小检出量为5.1×102 cfu/mL,高于普通PCR方法,而且与其他种属的菌无任何交叉反应.此外,本研究将副溶血弧菌扩增产物采用通用型核酸扩增物快速检测板进行检测,实现了特异性强的快速副溶血弧菌的检测.该方法对仪器要求低,具有良好的应用前景.     

应用Taqman荧光定量PCR快速检测宠物食品中的沙门氏菌

[目的]建立快速检测宠物食品中沙门氏菌(Salmonella)的荧光定量PCR方法。[方法]根据Genbank中登录的沙门氏菌吸附和侵袭上皮细胞表面蛋白invA基因序列设计合成引物和探针,检测该方法的特异性和敏感性。[结果]该方法具有良好的特异性,对沙门氏菌的检测灵敏度可达到17 CFU/反应(25μl/反应)。应用该方法检测人工污染宠物食品,样品经18 h增菌后,结果均为阳性。[结论]该研究建立的Taqman荧光定量PCR方法可以快速、准确地检测宠物食品中的沙门氏菌。     

量子点标记技术在食源性病原体检测中的研究进展

近年来,量子点标记技术得到较快发展,以其为基础开发的检测技术在食品安全检测方面已有广泛应用。为了解量子点标记技术在食源性病原体检测中的应用研究现状,为量子点标记技术在食品安全检测中进一步深入推广,简要综述了量子点的生物相容性及其在食源性病原体检测方面的研究进展和应用前景。