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改良Chelex-100法和CTAB法用于转基因抗草甘膦大豆检测效果的比较 总被引:2,自引:0,他引:2
以转基因抗草甘膦大豆为研究材料,分别采用改良Chelex-100法和常规CTAB法提取基因组DNA,以提取DNA的浓度和纯度,同时以PCR扩增大豆的内源基因(lectin)及外源特异性序列(CaMV35S,nos,Cp4-epsps)的效果对两种方法进行比较和评价.结果表明:虽然改良Chelex-100法DNA提取纯度不高,但是提取效率与常规CTAB法相当,而且改良Chelex-100法能够快速在1 h之内从大豆中提取DNA,所提取的DNA可以直接用于PCR扩增反应,PCR扩增产物电泳条带清晰.因此,改良Chelex-100法可以替代CTAB法提取DNA用于转基因检测,该方法具有经济、简便、快速的特点. 相似文献
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为了优化小麦高通量TILLING突变体扫描所需基因组DNA提取的方法,对利用SDS法、改良SDS法、CTAB法、改良CTAB法、AxyPrep DNA提取试剂盒、Qiagen DNeasy Plant Mini Kit试剂盒以及再生Qiagen硅胶柱方法提取的小麦基因组DNA进行了系统比较。结果表明,尽管7种方法所提取DNA的纯度及琼脂糖凝胶电泳检测结果均良好,但再生Qiagen硅胶柱方法、CTAB法和改良SDS法的DNA浓度显著高于其他方法。根据小麦细胞分裂素氧化酶基因1(TaCKX1)的DNA序列设计引物,以新鲜DNA样品用于PCR扩增大于1 000bp的片段时,后4种方法扩增效果优于前3种方法;DNA在-20℃下保存100d后重新进行PCR扩增时,则只有Qiagen试剂盒和再生Qiagen硅胶柱2种方法提取的DNA能扩增出大于1 000bp的片段。采用本实验室与新西兰坎特伯雷大学合作建立的再生硅胶柱与自配提取液提取小麦基因组DNA,既保证了DNA的高质量,又降低了使用试剂盒的成本,为小麦TILLING库的构建及其他相关试验提供了一种经济有效的DNA提取方法。 相似文献
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以大麻的幼嫩叶片和风干叶片为材料,分别采用优化的SDS法、CTAB法、高盐低pH法和碱裂解法这4种不同方法提取基因组DNA,并比较提取质量和效率.结果表明,采用4种提取方法,大麻干样叶和鲜样叶均可获得清晰DNA目的条带,鲜样叶基因组DNA纯度和得率的顺序为:SDS法>CTAB法>高盐低pH法>碱裂解法,干样叶基因组DNA纯度和得率的顺序为:高盐低pH法>SDS法>CTAB法>碱裂解法,优化的SDS法适用于大麻鲜样叶基因组DNA提取,而大麻干样叶基因组DNA的提取选用优化的高盐低pH法最适宜. 相似文献
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花生不同部位对提取DNA的影响 总被引:8,自引:1,他引:8
采用CTAB法和SDS法,分别从花生的根尖、下胚轴、种子、幼叶中提取基因组DNA,所提DNA片段长度都在21 kb以上;同种方法中部位之间的DNA纯度没有差异,产率差异极其显著,从种子、根尖、下胚轴到幼叶产率依次升高,CTAB法中产率从128.5~498.5ng/mg,SDS法中产率从225.O~542.6ng/mg;两种方法中,相同部位之间只有叶片在纯度上差异显著,产率上相同部位之间的差异极其显著。用CTAB法从叶片中提取DNA,采用RAPD方法,对19个花生品种的基因组进行扩增,结果显示所提DNA满足分子分析的要求。RAPD可用于亲本和品种的鉴定。 相似文献
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一种适用于甜菜大规模快速提取DNA的方法 总被引:1,自引:0,他引:1
《中国糖料》2018,(6)
目前甜菜DNA提取通常使用CTAB法,大多数人仍采取研钵研磨的方法,但是在大批量提取DNA的时候,该方法耗时费力,提取效率较低。为了提高提取DNA的效率以适应大规模PCR的需求,我们创新了使用CTAB提取DNA的方法。该方法为先在离心管放入钢珠,然后把样品放入离心管中,放入到液氮中冷冻后直接使用震荡研磨机研磨后,再利用CTAB法进行提取,结果表明,该法点提取的DNA浓度和纯度均表现较好,并且将提取的DNA用于SSR引物的扩增,所得条带清晰,实验结果较好,可提高效率30%。 相似文献
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大豆叶片DNA提取方法的比较研究 总被引:3,自引:1,他引:3
以大豆叶片为材料,对大豆基因组DNA提取方法中若干影响因子如提取液、提取液的浓度、蛋白质去除次数、提取步骤等进行比较研究,试图寻找大豆叶片DNA提取的最佳方法.结果表明,碱裂解法提取速度快,但提取的DNA量少,在SSR分析中,银染效果较CTAB、SDS提取液差,CTAB、SDS提取液均能得到较高质量的DNA;在1%~4%CTAB、SDS提取液浓度下,4%CTAB易使DNA产生降解,但不同浓度提取液提取DNA均可用于SSR分析;提取叶片重量在一定范围内时,随抽提次数减少,DNA浓度增加,纯度下降,但即使用氯仿/异戊醇抽提一次,也能够满足SSR分析的需要;不同提取步骤下,使用氯仿/异戊醇抽提2次后使DNA沉出后再溶解抽提2次和直接抽体4次相比,A260/A280值偏大,但A260/A230值较好. 相似文献
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基因组DNA的提取是DNA分子水平研究和检测的重要环节。为补充完善现场检测方法,根据硅膜吸附
DNA的特性,结合过滤膜和注射器,开发一种现场快速提取植物基因组DNA的方法。选取大豆、棉花、油菜、玉米、
水稻5种主要作物的叶片和种子为样品提取DNA,利用PCR和普通重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase am⁃
plification, RPA)对快速提取和QIAGNE试剂盒提取的DNA进行内源基因的扩增。结果显示,快速方法不需要离心
机,现场3分钟完成DNA提取;在DNA得率上要高于QIAGEN方法,但在DNA纯度上低于QIAGEN方法。不过两种
方法提取的DNA都能满足PCR和RPA的需要。利用DNA快速提取方法结合普通PCR、荧光RPA和荧光定量PCR
对转基因大豆SHZD32-1进行实际检测,3种方法的检测结果一致,均能准确检出大豆SHZD32-1的转基因成分。 相似文献
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对玉米子粒DNA提取、SSR扩增片段检测方法等进行了研究,并以4个利用常规种子贮藏蛋白质电泳技术难以鉴定纯度的玉米杂交种及相应自交系和9对玉米SSR位点引物为材料,分别筛选出适合这些不同杂交种纯度鉴定的SSR位点引物,建立了一套利用SSR标记进行玉米杂交种纯度鉴定的技术规程.该程序包括从粉碎干种子提取DNA和利用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离SSR扩增片段,对仪器设备要求较低、简单、快速,易于推广。 相似文献
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Qiu Fu-lin WANG He-he CHEN Jie ZHUANG Jie-yun Hei LEUNG CHENG Shi-hua Wu Jian-li 《水稻科学》2006,13(4):299-302
With the completion of whole genome sequence, focus on rice research has been apparently shifted from sequence analysis (genomics) to identifying and understanding the functions (functional genomics) of nearly 40 000 genes presented in rice genome [1-3]. Gene functional identification requires new materials and methods. Mutant is considered as one of the most important sources of starting materials. In mutant detection, a new reverse genetics strategy termed TILLING (Targeting Induced Loca… 相似文献
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刺激割胶制度对广东植胶区胶园土壤养分的影响 总被引:4,自引:0,他引:4
对实施刺激割胶制度后广东植胶区胶园的土壤养分状况进行分析,并与实施刺激割胶制度前胶园的土壤养分的状况进行比较。结果表明:在实施刺激割制14a后,胶园的土壤养分总体水平比较低,其中花岗岩赤红壤和砂页岩赤红壤中的有机质、全氮、有效磷和有效钾的含量均低于正常值的下限;玄武岩砖红壤中的有机质、全氮和有效磷的含量在正常值范围内,而有效钾的含量低于正常值下限。说明现行胶园培肥等管理措施已不能满足刺激割胶制度下的橡胶树正常生长、生产的需求。在刺激割胶制度下,胶园土壤中的有机质、全氮、有效磷、有效钾、速效氮和pH等6种指标是影响橡胶树产量的主要因素。胶园土壤pH在下降,胶园土壤有呈酸化的趋势。 相似文献