主要分子标记技术比较

主要分子标记技术比较周秀艳在过去的１０年中，分子标记技术得到突飞猛进的发展，至今已有十几种分子标记技术相继出现，并在各个领域得到了应用。本文系统地比较了植物中广泛应用的ＲＦＬＰ，ＲＡＰＤ和ＳＳＲ技术，以供参考。分子标记ＲＦＬＰＲＡＰＤＳＳＲ全称限制性...     

甘蓝显性雄性不育基因的延长随机引物扩增DNA(ERPAD)标记

获得了一个与甘蓝显性雄性不育基因连锁的延长随机引物扩增ＤＮＡ（ＥｘｔｅｎｄｅｄＲａｎｄｏｍＰｒｉｍｅｒＡｍｐｌｉｆｉｅｄＤＮＡ，ＥＲＰＡＤ）标记ＥＰＴ１１９００。ＥＰＴ１１９００是在与甘蓝显性雄性不育基因连锁的ＲＡＰＤ标记ＯＴ１１９００的基础上，通过逐步筛选３’端延长的随机引物的方法转化而成的稳定性和特异性都得到增强的新标记。这种标记的稳定性和特异性接近ＳＣＡＲ标记，但不需要克隆和测序。该方法首先根据ＯＰＴ１１的序列合成３’端添加Ａ、Ｔ、Ｃ、Ｇ４种碱基的４个引物，组成１０个引物对。以不育池为模板筛选出ＯＴ１１Ｃ＋ＯＴ１１Ｇ为唯一能够扩增长度与ＯＴ１１９００相同的一个片段的引物对。在此引物对基础上，又添加４种碱基得到８个新的引物，相互组合成１６个引物对。进一步以不育池为模板筛选出ＯＴ１１ＣＴ＋ＯＴ１１ＧＡ，在严格条件下，它可特异扩增长度与ＯＴ１１９００相同的一个片段ＥＰＴ１１９００。通过分离群体分析证实这一片段与ＯＴ１１９００处于同一位点。     

RFLP,RAPD技术在食用菌研究中的应用

随着分子生物学的发展,多种在分子水平上研究生命现象的技术与方法业已建立,尤其是利用分子标记去研究生物的系统进化、遗传变异、基因定位与克隆等已成为近年来的研究热点。目前,在食用菌研究领域中应用最为广泛的分子标记主要是ＲＦＬＰ和ＲＡＰＤ,它们在食用菌的系统进化、遗传变异、菌株及杂种鉴定等方面都已得到了较好的应用。本文主要对ＲＦＬＰ与ＲＡＰＤ技术在食用菌研究中的应用作一概要介绍。1　ＲＦＬＰ技术在食用菌研究中的应用ＲＦＬＰ(Ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎｆｒａｇｍｅｎｔｌｅｎｇｔｈｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ)即限制性…     

信息快递

我国首次授予外国植物新品种权 日前，国家林业局按照《中华人民共和国植物新品种保护条例》的有关规定，首次授予了外国申请的５个月季新品种权，它们是法国ＭＥＩＬＬＡＮＤ公司申请的玫康馥（ＭＥＩＣＯＦＵＭ）、芳碧莎（ＦＥＢＥＳＡ）、玫卡丽（ＭＥＩＱＵＡＬＩＳ），德国 Ｗ．ＫＯＲＤＥＳ， ＳＯＨＮＥＲＯＳＥＮ－ＳＣＨＵＬＥＮ公司申请的卡罗吉罗（ＫＯＲＲＯＧＩＬＯ）和荷兰ＯＬＵＲＯＺＥＮＶ．Ｏ．Ｆ公司申请的奥丽帕拉姆（ＯＬＵＰＬＡＭ）。从此，这５个品种在中国境内就受到法律保护，任何单位或个人未经品种权人的许可…     

分子标记技术概述*(下)

２．５ ＳＴＳ技术 ＳＴＳ技术是基于ＲＦＬＰ发展起来的一类ＰＣＲ标记技术。Ｏｌｓｏｎ等（１９８９）首先在人类基因组的物理图谱研究中使用ＳＴＳ技术。ＳＴＳ技术的基本原理是通过对ＲＦＬＰ标记使用的cＤＮＡ克隆进行测序，然后根据其序列设计一对引物，利用这对引物对基因组ＤＮＡ进行特异扩增。由于在cＤＮＡ中内部存在着插入、缺失等非表达区域，从而使得与两引物配对的区域形成多个不同扩增子，并表现出扩增片段的多态性。ＳＴＳ技术是利用ＰＣＲ对ＲＦＬＰ标记的转化，具有ＲＦＬＰ标记无法比拟的实用上的可行性。但并不是所有Ｒ…     

分子标记在植物上的应用

综述分子标记技术ＲＦＬＰ、ＲＡＰＤ、ＡＦＬＰ的基本原理、优缺点及其在植物研究中的应用情况。     

大白菜和紫菜薹自交系染色体组DNA的RAPD分析

用８个随机引物（１０ｂｐ）对２个紫菜薹自交系的３个单株和４个大白菜自交系的４个单株的染色体组ＤＮＡ进行ＰＣＲ扩增，共有４０条带分离清晰、明亮，其中引条带在７个单株中表现出差异，可作为遗传标记（ＲＡＰＤ标记）。４个大白菜自交系之间的平均差异条带数为１２．３，２个紫菜薹自交系之间为９．５，大白菜与紫菜薹之间平均有１５．５条带的差异。用７个引物在９３Ｗ０５－７（紫菜薹）和９３Ｗ５８－５（大白菜）之间检测出对个ＲＡＰＤ标记。从同一自交系的不同单株抽提的染色体组ＤＮＡ扩增出较一致的ＤＮＡ谱带，而不同自交系间扩增出的ＤＮＡ谱带差异很大，这表明此方法也可以象ＲＦＬＰ一样，用于大白菜和紫菜薹的分子标记。     

一个用于甘蓝显性雄性不育基因转育辅助选择的SCAR标记

一个与甘蓝显性雄性不育基因连锁的ＲＡＰＤ标记ＯＴＩＩ９００被转化为显性的ＳＣＡＲ（Ｓequence Characterized Amplified Region) 标记STII900,它可用于甘薯显性雄性不育基因转育辅助选择。     

西藏的腹菌纲真菌资源

西藏的腹菌纲真菌资源ＴＨＥＲＥＳＯＵＲＣＥＳＯＦＦＵＮＧＩＯＦＧＡＳＴＥＲＯＭＹＣＥＴＥＳＩＮＸＩＺＡＮＧ徐阿生（西藏高原生态研究所八一８６００００）ＸｕＡｓｈｅｎｇ（ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＰｌａｔｅａｕＥｃｏｌｏｇｙ，ｔｉｂｅｔ，Ｂａｙｉ８６０００...     

温度预处理对柑橘果实活性氧代谢相关酶的影响

以尾张温州蜜柑（Ｃｉｔｒｕｓ　ｕｎｓｈｉｕ　Ｍａｒｃ．）和哈姆林甜橙（Ｃｉｔｒｕｓ　ｓｉｎｅｎｓｉｓ　Ｏｓｂｅｃｋ．）为试材，研究了不同温度预处理对果实呼吸速率、超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性、过氧化氢酶（ＣＡＴ）活性、过氧化物酶（ＰＯＤ）活性、丙二醛（ＭＤＡ）含量、果皮相对电导率（ＲＥＣ）和木质素含量的影响。结果表明，２０℃预处理 ３ｄ的果实，在贮藏至 １００ ｄ时，呼吸速率、ＭＤＡ含量。果皮 ＲＥＣ均为最低。２０℃预处理果实在贮藏后期 ＳＯＤ与 ＣＡＴ能较好地协同作用清除 Ｏ２－·，果实受自由基伤害程度最小，果实衰老得以延缓。温度预处理引起的ＰＯＤ活性的上升可能与提高果皮木质素含量、加速受损伤油胞的迅速愈合有关，而贮藏后期 ＰＯＤ活性的上升可能与果实的衰老有关。     

大白菜永久高密度分子遗传图谱的构建

 以大白菜高抗TuMV白心株系91-112和高感TuMV桔红心株系T12-19为亲本建立的小孢子培养DH系作为图谱构建群体, 构建了包含10 个连锁群、406 个标记位点的分子连锁图谱, 图谱总长度826.3 cM, 标记间的平均图距为2.0 cM, 连锁群数目和染色体数相等。每个连锁群上的标记数在7～111个之间, 连锁群的长度在26.4～156.1 cM的范围内, 平均图距在1.0～3.8 cM之间。该连锁图谱包括246个AFLP标记、135个RAPD标记、11个SSR标记和12个同工酶标记、1个SCAR标记和1个形态标记。     

西瓜遗传图谱构建及其强雌性状定位研究

以雌花率稳定在80%以上的强雌性品系BG1(Citrullus lanatus var.lanatus)和普通花性型非洲野生西瓜900134(C.lanatus var.citroides)为亲本杂交自交获得F2群体,通过AFLP、RAPD及SSR技术对该群体进行扩增,建立了一个包括4个RAPD标记、140个AFLP标记、6个SSR标记和1个强雌性位点(subgy)的遗传图谱。该图谱包含17个连锁群,覆盖基因组1073.1cM,标记间平均图距为7.2cM。subgy定位在第5连锁群中,与s1454-1100、GT-CTA270两个标记连锁,距离分别为5.8cM和14.3cM。将特异条带s1454-1100回收、克隆、测序,设计特异SCAR引物,再对F2单株基因组DNA扩增,只在大部分的纯合强雌性单株和杂合普通花性型单株中扩增出一条375bp的特异带,以JoinMap3.0软件分析,该标记与与强雌性状位点的连锁距离为6.1cM,连锁较为紧密,表明已成功地将与西瓜强雌性连锁的标记转化为操作简便、表现稳定的SCAR标记,命名为SR375。     

SSR与AFLP标记在甜瓜连锁图谱上的分布

利用3-2-2×TopMark杂交组合,得到152株重组自交系群体,构建甜瓜分子遗传图谱。该图谱包括71个SSR标记和94个AFLP标记,由17个连锁群构成,覆盖基因组总长度1 222.9 cM,标记之间平均距离为7.41 cM。筛选了428对SSR分子标记（其中360对为EST-SSR引物,68对为g-SSR引物）,得到94对具有多态性的SSR标记,其片段大小在150～300 bp之间,多态性比例占21.29 %;筛选了256对EcorI/MseI AFLP引物组合,得到22对AFLP多态性引物,共含有146个AFLP多态性位点,其片段大小在100～600 bp之间。SSR标记较平均的分布在染色体上,AFLP标记在LG1、LG12及LG14上出现聚集现象。     

ISSR标记在芋遗传多样性研究中的应用前景

ISSR是在SSR基础上发展起来的一种分子标记技术,兼具SSR、RAPD、RFLP、AFLP等分子标记的优点。对运用形态学和分子生物学手段研究芋的遗传多样性进展进行了综述,并对ISSR分子标记技术在芋种质资源遗传多样性和亲缘关系、种质资源鉴定和指纹图谱构建、基因定位和分子标记辅助选择等方面的应用前景做出了分析和展望。     

辣椒分子连锁遗传图谱的构建及抗疫病QTL定位

以抗疫病材料perennial和感疫病材料83-60杂交得到的F2群体144个单株为试材,利用AFLP、RAPD、SSR等分子标记,采用JoinMap3.0构建辣椒分子连锁遗传图谱,该图谱包括12个连锁群,70个标记位点,其中AFLP标记54个,RAPD标记15个,SSR标记1个,覆盖长度为429.02cM,平均图距为6.13cM,连锁群长度在4.30～85.85cM之间。对F2群体进行辣椒疫病的室内人工接种,利用Windows QTL Cartographer2.0软件进行QTL分析,在第4连锁群上检测到两个QTL,解释表型差异的贡献率分别为9.5%和16.4%。     

大白菜SSR锚定标记分子遗传图谱的构建

为了将已有的大白菜分子遗传图谱和国际上A基因组参考图谱对应起来,利用国际上发表的大白菜和甘蓝型油菜A基因组特异SSR标记作为锚定标记,以100个DH株系组成的群体为作图群体进行了分子遗传图谱的构建研究。利用双亲和F1对230个SSR标记和8个STS标记进行了筛选,共获得67个多态性分子标记。在此基础上整合了已有的263个AFLP标记、150个RAPD标记、17个SSR标记、3个SCAR标记、14个同工酶标记和1个形态标记,最终构建了一张由10个连锁群组成,包含了497个标记的大白菜高密度分子遗传图谱。该图谱覆盖基因组长度1 086.7 cM,标记间平均图距2.19 cM。此图谱上包含了已在A基因组参考图谱上定位的34个SSR标记和2个STS标记,分布于10个连锁群上,由此可将该图谱按A基因组参考图谱的连锁群进行命名,即A1~A10,并与10条染色体对应起来,A1~A10分别对应3、6、2、8、5、4、7、9、1、10号染色体。     

分子标记技术在西瓜甜瓜上的应用

近十几年来,AFLP、RAPD和SSR等分子标记技术的应用,加速了瓜类作物遗传和育种的步伐。根据有关文献介绍了分子标记技术在西瓜甜瓜遗传图谱构建、遗传多样性和物种亲缘关系、分子标记辅助选择、品种(系)指纹图谱构建及杂种纯度鉴定等研究领域的应用进展,其中,RAPD技术是一种高效的基因组DNA多态性分析技术,有快速、简便、高效等优点,主要综述了RAPD技术在西瓜、甜瓜遗传育种研究中的广泛应用,并探讨了该技术在使用中存在的问题及应用前景。     

SSR技术及其在果树上的应用

SSR(Simple sequence repeat)技术以其丰富的多态性、共显性遗传、重复性好和操作简便等优点日益受到重视,已成为植物遗传和育种研究中不可缺少的分子标记。对SSR技术的原理和特点作了简要的介绍,较详细地分析了如何获得SSR引物,特别是综述了果树上SSR引物的研究现状,同时将其与其它几种主要的分子标记进行了比较分析,认为SSR标记检测的位点多态性水平明显高于RFLP,而且重复性优于RAPD;着重介绍了SSR技术在果树种质资源和构建果树遗传图谱及基因定位等研究中的应用现状;指出SSR技术将在果树科研上起到重要的作用。     

大蒜分子生物学研究进展

综述了大蒜（Allium sativum L.）分子生物学的研究进展,主要包括5个方面：（1）大蒜遗传多样性分析、遗传图谱构建和资源评价中基因组7种分子标记（RAPD、AFLP、ISSR、SSR、SRAP、InDel和SNP）的开发和利用;（2）大蒜基因组学、表观遗传分析、转录组学和蛋白组学的研究;（3）农杆菌介导法和基因枪法的大蒜遗传转化体系构建;（4）大蒜蒜氨酸酶基因、蒜薹和鳞茎发育基因（gaLFY、AsPI、AsFT1、AsFT2和AsFT4）及抗逆相关基因（AsPCSl、AsMT2a、ASAL和AsNF-YC8）的克隆和表达分析;（5）大蒜分子生物学试验技术（RNA提取、RT-qPCR的内参基因筛选和BAC文库构建）优化。最后指出了当前研究的不足,展望了大蒜分子生物学研究的方向。     

南瓜作物分子标记辅助育种研究进展

现代分子育种中,利用分子辅助育种改良植物品种的重要经济性状已成为主要途径。综述了RFLP、RAPD、AFLP、SSR、ISSR等分子标记在南瓜种质亲缘关系及种质资源遗传多样性、遗传图谱构建、杂交种纯度鉴定及优势分析和QTL定位等方面的研究进展,并展望了南瓜分子标记辅助育种的前景。