5'-腺苷磷酰硫酸激酶及其R68K突变体对5'-腺苷一磷酸3'羟基的磷酸化

硫作为生命活动的必需元素,主要以-2价和+6价发挥生物学功能。硫的同化代谢包括胞内活化、转移以及还原等反应。其活化是同化代谢的关键反应,包括ATP硫酸化酶(ATP sulfurylase,ATPS)催化硫酸盐与ATP反应生成腺苷-5'-磷酰硫酸(adenosine 5'-phosphosulfate,APS)和焦磷酸(pyrophosphate,PPi)以及腺苷-5'-磷酰硫酸激酶(adenosine 5'-phosphosulfate kinase,APSK)催化APS 3'羟基磷酸化生成3'-磷酸腺苷-5'-磷酰硫酸(3'-phosphoadenosine 5'-phosphosulfate,PAPS),APSK催化APS磷酸机理已经较为清楚。利用APSK对AMP的磷酸化进行了初步分析,发现AMP可作为APSK的底物,反应生成3,5'二磷酸腺苷(3'-phosphoadenosine 5'-phosphate,PAP);对APSK的三维结构进行分析发现,R68同时和APS的磷酸根和硫酸根形成氢键,稳定APS的结合,而K侧链基团比R短2.4魡,R68K突变将导致K不能和距离较远的硫酸根离子相互作用,从而减弱APS的亲和力,而增加与磷酸根离子的相互作用,可能提高AMP的亲和力。研究结果表明,R68K突变体的最适底物变为AMP,KmAMP是对照的0.2倍,而催化效率是对照的5倍。以R68K为偶联酶成功测定了具有较低KmPAP的酵母3,5二磷酸核苷酸酶(3',5'-bisphosphate nucleotidase,YND)动力学常数,为分析测定AMP底物的酶活提供了工具。     

应用离子对反相高效液相色谱法测定动物肝脏中APS和PAPS的含量

[目的]建立适于动物肝脏中APS和PAPS含量测定的离子对反相高效液相色谱法,测定几种动物肝脏中APS和PAPS的含量.[方法]色谱条件:Ultimate AQ-C18反相色谱柱;流动相100mM KH2PO4,1mM四丁基氢氧化铵和甲醇,用4M的氢氧化钾调节pH至7.4;流速1 mL/min,上样量为10 μL,柱温25℃,检测波长254 nm.[结果]动物肝脏中APS含量(nmol/g):羊:2.4·21.3;牛:0.9·1.1;马:1.4 ·3.5;猪:1.4 ·6.7;大鼠:9.5 ·21.1.动物肝脏中PAPS含量(nmol/g):羊:7.2·15.7;牛:4.7 ·28.5;马:14.1·20.8;猪:7.7 ·30.1;大鼠:23.5～74.5.[结论]该方法具有样品处理简单、待测成分分离度高(APS 27.7 min,PAPS 32.4min)、灵敏度高(APS 0.45 μg/mL,PAPS 0.48 μg/mL)的特点;测定的几种动物肝脏中APS和PAPS的含量具有种间差异性,牛、羊、猪、马等四种家畜中,猪肝脏中APS和PAPS的含量均最高.     

槲皮素单硫酸酯和5''''-氯-5''''-脱氧腺苷合用对凝血酶诱导兔血小板聚集的影响

槲皮素(quercetin)是一种天然存在的具有多种药理作用的黄酮类化合物,广泛存在于植物界,化学名为3,5,7,3',4'-五羟基黄酮,已报道槲皮素及其衍生物具有多方面的心血管药理作用.腺苷及其类似物具有多种生物活性,包括舒张冠脉、减缓心率、抗血小板活性等作用.但两类药物合用对血小板的作用尚未见报道.本文用比浊法研究了槲皮素单硫酸酯和5'-氯-5'脱氧腺苷合用对凝血酶诱导兔血小板聚集的影响.结果显示,槲皮素单硫酸酯和5'-氯-5'脱氧腺苷对凝血酶诱导的兔血小板聚集都有抑制作用;槲皮素单硫酸酯与5'-氯-5'脱氧腺苷联合用药,增强凝血酶诱导兔血小板聚集的抑制作用.结果提示,槲皮素单硫酸酯与5'-氯-5'脱氧腺苷在一定的浓度范围内具有协同抗血小板聚集的作用.     

硫苷生物合成过程中硫来源的研究进展

硫苷是十字花科Cruciferae植物中一类富含氮硫的次生代谢物,硫苷合成途径,特别是硫与硫苷合成关系的研究取得了很多进展。从硫苷核心结构形成过程中还原硫供体来源、活化硫酸盐来源以及半胱氨酸（Cys）、谷胱甘肽（GSH）和高能硫供体3'磷酸腺苷5'磷酰硫酸（PAPS）等初生硫代谢产物与硫苷合成间的关系等方面对硫苷合成过程中硫来源的研究进展进行了综述,提出GSH等初生硫代谢调控因子、氮硫等营养元素之间的平衡以及葡萄糖等信号分子对硫苷生物合成的调控机制将成为新的研究热点,以期为硫苷的生物合成调控研究提供理论依据。     

硫酸化黄芪多糖对CEF生长及抵抗IBDV感染的影响

采取一步醇沉和分步醇沉法提取4种黄芪多糖APS,、APS10、APS50和APS50,用氯磺酸-吡啶法进行硫酸化修饰,得到4种硫酸化黄芪多糖(sAPS) sAPSt、sAPS40、sAPS50和sAPS60,用MTT法比较了4种硫酸化黄芪多糖对鸩胚成纤维细胞(CEF) 的生长及抵抗鸡传染性法氏囊病毒(IBDV) 感染的影响,以末修饰的APSt为对照.结果显示,APS1显著促进CEF生长,细胞毒性较低,但抵抗鸡传染性法氏囊病毒感染细胞的作用较弱;sAPS抵抗鸡传染性法氏囊病毒感染的作用显著增强,显效浓度降低,但安全浓度也降低.表明通过硫酸化修饰可以提高黄芪多糖的抗病毒活性,但高浓度sAPS的细胞毒性增强.     

硫酸化黄芪多糖对雏鸡十二指肠黏膜组织形态和免疫细胞的影响

【目的】制备硫酸化黄芪多糖(Sulfated astragalus polysaccharide,sAPS),研究其对雏鸡十二指肠组织发育及黏膜免疫相关细胞分布的影响。【方法】采用氯磺酸-吡啶法对黄芪多糖(Astragalus polysaccharid,APS)进行硫酸化修饰,制备sAPS,氯化钡-明胶浊度法测定sAPS中硫含量,并计算sAPS的硫酸基取代度。运用组织学制片技术和染色方法分别观察APS及sAPS干预后7d和14d鸡十二指肠的组织学特点,对肠壁黏膜层上皮内淋巴细胞(Intraepithelial lymphocytes,IEL)、柱状上皮细胞间杯状细胞(Goblet cells,GC)和肠壁内肥大细胞(Mast cells,MC)数量进行统计分析。【结果】制得的sAPS中硫含量为14.3%,计算得到sAPS的硫酸基取代度为1.325。给予APS和sAPS干预后,sAPS组雏鸡十二指肠的绒毛高度及绒毛高度/隐窝深度比值均明显高于对照组和APS组,隐窝深度明显低于对照组和APS组,sAPS组黏膜上皮内淋巴细胞、杯状细胞及肠壁肥大细胞的数量也明显高于对照组和APS组。【结论】sAPS对雏鸡十二指肠组织发育及肠道黏膜免疫的促进作用较APS强。     

黄芪多糖提高鸡抗氧化作用对免疫功能的影响

本实验观察了黄芪多糖 (APS)对正常雏鸡血清中GSH -Px、SOD活性及MDA含量的影响。在不同日龄 (5d、 14d、 2 5d)、不同APS剂量 (0、 2 5、 5、 10mg/只 )水平下 ,以点眼滴鼻、皮下注射、肌肉注射的不同给药方式使用APS后 ,各试验组血清GSH -Px、SOD活性均表现显著升高 (p <0 0 5 ) ,MDA含量均表现显著降低 (p <0 0 5 )。表明APS可提高鸡的抗氧化作用 ,提示APS可通过增强免疫器官中GSH -Px、SOD活性提高免疫防御和免疫监视。     

血小板激活中PKC与PKA、TPK、MLCK的关系

本实验以洗涤血小板为材料,研究蛋白激酶C蛋白激酶A(PKA)酪氨酸蛋白激酶(TPK)肌球蛋白轻链激酶(MLCK).(1)腺苷环化酶激活剂PGE1不能使50nMPMA诱导的血小板聚集受抑制。(2)腺苷及其类似     

人红细胞胞浆液中腺苷脱氨酶的分离

腺苷脱氨酶是机体重要腺苷代谢酶之一,能催化腺苷嘌呤环上6-位氨基脱氨,从而生成肌苷的氨解反应,与腺苷激酶、5′-核苷酸酶及 S-腺苷同型半胱氨酸水解酶共同使机体腺苷水平保持相对稳定。文献报道人体组织中的腺苷脱氨酶分子有多种形式,其表观分子量分别为36000、114000、200000和298000。本文报告一种用亲和层析法,从人红细胞胞浆液中分离腺苷脱氨酶的新的简便快速方法。所采用的亲和层析胶,为 N~6-(6-氨己基)腺苷-Sepharose4 B 凝胶,是由N~6-(6-氨己基)腺苷与经溴化氰活化的 Sepharose4 B 胶偶联而成。人红细胞胞浆液中的腺苷脱氨酶,经两次亲和层析分离后,比活性提高了197倍,酶活性回收率为49%。高效液相凝胶排阻层析分析的结果表明,分离出的酶蛋白制剂含有表观分子量分别为36000、72000、114000和64000的四种蛋白质组分。其中前三种组分的表观分子量与文献报道基本相符。     

牛脑细胞膜上腺苷结合蛋白质的分离

本文采用改良的梁念慈腺苷亲和层析凝胶合成法，合成了 Ｎ６－（ ６－ 氨己基）腺苷Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析凝胶。并以这种凝胶作为工具，从脑细 胞膜上分离出几种腺苷结合蛋白质。其中亚基分子量为６４，０００和４５，０００Ｄａｌ的蛋 白质经初步的分析鉴定，分别为膜上腺苷载体和磷脂酰肌醇激酶。分离出膜上腺苷 载体和磷脂酰队醇激酶，对腺苷细胞内外转运机理的研究及腺苷与肌醇脂质信使系 统间的相互关系具有重要的意义。     

亲和层析法分离腺苷结合蛋白质

本文报告一种新的腺苷亲和层疑胶的合成方法。利用这种疑胶可从大鼠心脏、肝脏及小牛主动脉平滑肌的水溶部份分离出几种腺苷结合蛋白质,其亚基分子量(据 SDS-PAGE)分别为35,000,37,00、46,000,43,000及15,300Dal.现已证明,35,000Dal 蛋白质是乳酸脱氢酶及苹果酸脱氢酶,43,000Dal 蛋白质是腺苷激酶,46,000Dal 蛋白质可能是 S-腺苷同型半胱氨酸水解酶。15,300 Dal 蛋白质前人未有报道。它对腺苷具有高度特异性和亲和力,推测是腺苷的细胞内受体和/或载体。测定了这种低分子量腺苷结合蛋白质的氨基酸组成及莱些物理常数:pI=6.5;沉降系数2.42S,微分比容0.727cm~3/g,与腺苷复合物的解离常数 K=2.3uM。     

鸡骨草化学成分的研究

利用色谱等方法从鸡骨草(Abrus cantoniensis)地上部分分离得到了5个化合物,通过波谱手段分别鉴定为邻羟基苯甲酸(Ⅰ)、β-谷甾醇(Ⅱ)、熊果酸(Ⅲ)、4'-甲氧基-2'-羟基查尔酮(Ⅳ)、2',4'-二羟基查尔酮(Ⅴ).其中化合物Ⅳ和Ⅴ首次从该种植物中分出.     

黄芪多糖脂质体对鸡淋巴细胞增殖的影响

为了观察黄芪多糖(APS)被制备成黄芪多糖脂质体后是否能够提高其生物活性,用MTT法测定了其对鸡T、B淋巴细胞增殖的影响,以APS溶液和空白脂质体作为对照。结果显示:APS脂质体在125～15.625μg.mL-1时无论是单独作用还是协同植物血凝素(PHA)作用均能显著促进鸡T淋巴细胞的增殖,并且在125～31.25μg.mL-1时,效果显著优于APS溶液和空白脂质体(P<0.05);APS脂质体在125～15.625μg.mL-1时无论是单独作用还是协同脂多糖(LPS)作用均能显著促进鸡B淋巴细胞的增殖,并且在31.25μg.mL-1的效果显著优于APS溶液和空白脂质体(P<0.05)。表明:APS脂质体能够提高APS促进鸡淋巴细胞增殖的能力,因此,脂质体作为APS的载体是切实可行的。     

4个鸡品种TPK1基因的PCR-SSCP分析

以鸡硫胺焦磷酸激酶(TPK1)基因为候选基因,隐性白羽鸡、泰和乌骨鸡、萧山鸡、白耳鸡为试验材料,采用PCR-SSCP方法对TPK1所有外显子及3'-调控区进行单核苷酸多态性(SNP)筛查,探讨不同基因型与不同鸡品种肌肉硫胺素含量的关系.结果表明:在3'-调控区发现了1个SNP位点,其纯合子AA型与BB型相比有一个C2132T的单碱基突变,CC型与BB型相比有一个C2132A的单碱基突变.等位基因A和B的频率极显著高于等位基因C的频率,且泰和乌骨鸡与白耳鸡差异显著,故推测所检测到的基因座与肌肉硫胺索含量相关.     

牛日本血吸虫病5种血清学诊断技术比较

为找寻特异性强、敏感性高,且操作简便、费用低廉,并能大规模应用于临床的日本血吸虫病血清学诊断方法,以疫区黄牛为研究对象,应用环卵沉淀试验(COPT)、血清法间接血凝试验(sIHA)和血纸法间接血凝试验(bpIHA)、胶乳凝集试验(PAPS)、三联斑点酶联免疫吸附试验(三联Dot-ELISA)5种血清学诊断方法与粪检方法检测牛日本血吸虫病,并对5种血清学检测结果进行评价.检测分析结果表明,用血清学方法COPT,sIHA,三联Dot-ELISA对疫区黄牛进行血吸虫病检测,与三粪九检结果符合率高,具有灵敏度高、特异性好、简捷方便、费用低等特点,特别适用于疫区家畜血吸虫病的诊断、普查,是比较理想的现场检测方法,值得推广.血清学方法bpIHA和PAPS检测血吸虫病,尽管方法简便、费用低廉,但其灵敏度、特异性与三粪九检结果符合率低于血清学方法COPT,sIHA,三联Dot-ELISA,易造成漏检,假阳性,故在普查时,不建议采用.     

环磷酸腺苷(cAMP)对绿豆种子萌发及幼苗生长的影响

试验以绿豆种子为试材,研究环磷酸腺苷对其萌发及幼苗生长的影响。试验设置5个环磷酸腺苷浓度处理(20,40,60,80,100 mg·L~(-1)),以清水、15 mg·L~(-1)多效唑和2 mg·L~(-1)油菜素内酯作为3个对照组,测定各处理对绿豆种子萌发和幼苗生长的影响。结果表明:与清水对照组相比,环磷酸腺苷浸种后,提高了绿豆种子发芽势;除80 mg·L~(-1)浓度外,其他环磷酸腺苷处理均可提高绿豆种子发芽率;随着环磷酸腺苷溶液浓度的增加,绿豆幼苗的叶长、叶宽、鲜质量、干质量、胚轴和根长呈先上升后下降趋势。综合考虑绿豆种子萌发和幼苗生长,5个环磷酸腺苷浓度中以60 mg·L~(-1)处理的种苗效果最佳。     

中药多糖对体外培养猪脾脏淋巴细胞转化功能的影响

为选择具有免疫增强活性的中药多糖及其最佳作用剂量,用淋巴细胞转化试验测定了不同浓度的紫锥菊多糖(EPPS)、板蓝根多糖(IRPS)、黄芪多糖(APS)、山药多糖(CYPS)和牛膝多糖(ABPS)等5种中药多糖对体外培养猪脾脏淋巴细胞增殖功能的影响.结果表明,EPPS,IRPS,APS,CYPS,ABPS均能显著地直接或协同LPS,ConA诱导的猪脾脏淋巴细胞增殖(P<0.05);5种多糖促进猪脾脏淋巴细胞增殖的作用与多糖浓度密切相关,且不同多糖促进淋巴细胞增殖的最佳剂量不同.     

2，3，4，5-双-（邻-1，10-亚癸基）-呋喃的合成

目的 对文献报道的两个合成1,1'-双环十二-2,2'-二酮方法进行了再研究.方法 以环十二酮的烯胺和卤代酮反应制备标题化合物.结果合成了1,1'-双环十二-2,2'-二酮的脱水关环产物2, 3, 4, 5-双-(邻-1, 10-亚癸基)-呋喃.结论 反应产物非常复杂,从中意外的获得了其关环产物.     

微生物硫酸盐的同化途径及其与重金属抗性的关系

综述了微生物硫酸盐的吸收与同化途径。对其涉及的关键酶ATP硫酸化酶、APS还原酶、亚硫酸盐还原酶和半胱氨酸合成酶的研究进展进行了介绍;同时阐述了硫酸盐的同化途径与重金属抗性之间的关系,并对其在重金属存在的条件下与硫酸盐同化途径相关酶的基因表达情况进行了综述。     

3,3'-二氯联苯胺盐酸盐生产废母液的资源化研究

3,3'-二氯联苯胺(DCB)盐酸盐生产过程中排放的大量废母液对环境造成了严重危害.本文采用蒸馏分离,活性炭脱色,低温结晶组合技术对该废母液进行了处理,探索了工艺条件.通过真空蒸馏分离出废母液中的盐酸;在浓缩的废硫酸中加入2.5%的粉末活性炭,60 ℃搅拌脱色50 min,色度去除率达到95%;脱色液降温析出邻氯苯胺盐酸盐,过滤得到净化的硫酸.蒸出的盐酸和净化的硫酸可用于生产,回收的邻氯苯胺盐酸盐作为副产品具有一定的经济价值.该处理技术实现了废母液的资源化,最大限度地消除了污染.