人红细胞胞浆液中腺苷脱氨酶的分离

腺苷脱氨酶是机体重要腺苷代谢酶之一,能催化腺苷嘌呤环上6-位氨基脱氨,从而生成肌苷的氨解反应,与腺苷激酶、5′-核苷酸酶及 S-腺苷同型半胱氨酸水解酶共同使机体腺苷水平保持相对稳定。文献报道人体组织中的腺苷脱氨酶分子有多种形式,其表观分子量分别为36000、114000、200000和298000。本文报告一种用亲和层析法,从人红细胞胞浆液中分离腺苷脱氨酶的新的简便快速方法。所采用的亲和层析胶,为 N~6-(6-氨己基)腺苷-Sepharose4 B 凝胶,是由N~6-(6-氨己基)腺苷与经溴化氰活化的 Sepharose4 B 胶偶联而成。人红细胞胞浆液中的腺苷脱氨酶,经两次亲和层析分离后,比活性提高了197倍,酶活性回收率为49%。高效液相凝胶排阻层析分析的结果表明,分离出的酶蛋白制剂含有表观分子量分别为36000、72000、114000和64000的四种蛋白质组分。其中前三种组分的表观分子量与文献报道基本相符。     

牛脑细胞膜上腺苷结合蛋白质的分离

本文采用改良的梁念慈腺苷亲和层析凝胶合成法，合成了 Ｎ６－（ ６－ 氨己基）腺苷Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析凝胶。并以这种凝胶作为工具，从脑细 胞膜上分离出几种腺苷结合蛋白质。其中亚基分子量为６４，０００和４５，０００Ｄａｌ的蛋 白质经初步的分析鉴定，分别为膜上腺苷载体和磷脂酰肌醇激酶。分离出膜上腺苷 载体和磷脂酰队醇激酶，对腺苷细胞内外转运机理的研究及腺苷与肌醇脂质信使系 统间的相互关系具有重要的意义。     

大豆多肽

大豆多肽是将大豆蛋白质水解作用后，再经过分离、精制等过程得到的低聚肽混合物，其中还含有少量游离氨基酸、糖类和无机盐等成分。大豆多肽通常由3～6个氨基酸组成，液相色谱显示其分子量在1000Dal以下。主要出峰位置在分子量300～700的范围内。大豆多肽的蛋白质含量为85％左右，其氨基酸组成与大夏蛋白质完全相同，必需氨基酸丰富且平衡，并具有促进机体脂肪代谢、降血压和血清胆固醇、消除疲劳、促进微生物发酵的作用。[第一段]     

分离LDH和酯酶同工酶的聚丙烯酰胺凝胶制备和LDH活性与反应时间关系的探讨

用正交试验方法,考察了聚丙烯酰胺凝胶电泳分离乳酸脱氢酶同工酶和酯酶同工酶的分离胶制备的三因素(丙烯酰胺浓度、丙烯酰胺/甲叉双丙烯酰胺、缓冲液PH)、三水平,即L_9(3~3),采用综合评分法衡量电泳结果,经方差分析选出分离胶制备的最佳条件:乳酸脱氢同工酶,Acr=7.5％、C=2.6％,Acr/Bis=37.5、分离胶缓冲液PH8.9;酯酶同工酶,Acr=7.0％、C=2.3％。Acr/Bis=42.5分离胶缓冲液PH8.9。乳酸脱氢酶同工酶的活性与反应时间呈“S”型曲线关系。     

小花棘豆溶血毒素对兔脑神经细胞线粒体的影响

本研究首次证明小花棘豆(Oxytropis glabra DC)溶血毒素对兔脑神经细胞线粒体的结构和功能有显著影响,即:抑制线粒体细胞色素氧化酶和琥珀酸脱氢酶活力,降低氧化磷酸化效率(ADP/O)、呼吸控制率(RCR),使呼吸激活迟缓,并引起线粒体超微结构的异常变化。该毒素还引起线粒体中至少两种分子量不同的蛋白质(MW=63000和55000)的裂解,其性质尚待进一步查明。     

橡胶树魏克汉种质分子量与非胶组分含量的比较分析

天然橡胶分子量与非胶组分的含量对其品质影响巨大,为探究不同橡胶树种质分子量与非胶组分的差异,选取目前大面积种植的3份橡胶树魏克汉种质‘RRIM600’、‘热研73397’、‘热研879’为研究材料,种植7年后收集胶乳,制成干胶,分别检测分子量与蛋白质、糖、脂肪、金属离子等4种非胶组分,并对其进行分析。结果表明, 3份种质差异显著,‘热研879’干胶分子量、糖、脂肪和金属离子含量显著高于其它两份种质;‘热研73397’干胶蛋白质含量最高;‘RRIM600’干胶分子量最低,非胶组分总体最少。     

SDS-PAGE法分析不同加工方法对鸡蛋蛋白质组成的影响

采用SDS-PAGE法比较了生鲜鸡蛋、煮鸡蛋、茶叶蛋、咸鸡蛋、盐焗鸡蛋、卤鸡蛋中的主要蛋白质的组成,结果表明:在8%和12%分离胶中生鲜鸡蛋均存在多种分子量不同的蛋白质。在8%分离胶中煮鸡蛋和茶叶蛋中大分子量蛋白质基本消失,只在85~40ku范围内存在蛋白质条带,而在咸鸡蛋、盐焗鸡蛋、卤鸡蛋中只在85~50ku范围内存在蛋白质条带。同样,在12%分离胶中煮鸡蛋和茶叶蛋中大分子量蛋白质基本消失,只在85~40ku范围内存在蛋白质条带,然而在20ku以下能观察到1条明显的蛋白质条带。在12%分离胶中,咸鸡蛋、盐焗鸡蛋、卤鸡蛋在20ku以下也能观察到1条明显的蛋白质条带。     

油棕仁贮藏蛋白质亚基组成和含量分析

[目的]为油棕仁中蛋白质的进一步研究与开发利用提供指导。[方法]采用非变性聚丙稀酰胺凝胶电泳(Native-PAGE)和十二烷基硫酸钠-聚丙稀酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对油棕仁中贮藏蛋白质亚基进行研究,分析油棕仁蛋白主要亚基的组成、分子量、含量、二硫键的位置及种间差异。[结果]油棕仁中贮藏蛋白质在浓缩胶浓度为7.5%、分离胶浓度为12%的SDS-PAGE凝胶系统中可以得到很好的分离。在油棕仁贮藏蛋白中含有6条主要亚基,分子量范围为18.8~51.5 k Da,主要是中、小分子量亚基;各亚基之间含一定量的二硫键。非变性凝胶电泳分析表明,油棕仁贮藏蛋白中含有4个不同分子量、不同电荷的组分。[结论]该研究所选的不同油棕品种之间亚基的组成和含量没有显著性差异。     

SEC-MALLS-RI体系测定魔芋胶分子结构特性的研究

[目的]用SEC—MAILS—RI系统测定魔芋胶的分子结构。[方法]采用凝胶渗透色谱（SEC）、多角度激光光散射（MALLS）与示差折光检测仪（RI）联用技术系统测定魔芋胶的分子量、分子量分布、分子旋转半径（RMS）及其构象。[结果]魔芋胶的分子结构特性是：重均分子量（Mω）=1．040×10^6g／mol,数均分子量（Mω）=9．395×10^6g／mol,z-均分子量（Mω）=1．329×10^6g／mol;数均旋转半径（Rn）=11O．5nm,重均旋转半径（Rω）=115．9nm,z-均旋转半径（Rz）=129．6nm;分散度分别是Mω／Mn．=1．107和Mz／Mn=1．414。分子旋转半径RMS与分子摩尔数之间的关系曲线斜率为0．40±0．00,表明魔芋胶是一个高度紧密且具有分支结构的聚合物。[结论]建立了测定聚魔芋胶分子量及其分布的激光光散射法,结合凝胶渗透色谱,能在较大范围内准确测量聚合物的绝对分子量,且试验误差较小,重现性好。     

甜瓜幼苗根系总蛋白提取方法的筛选及其电泳条件的建立

以‘西域1号,甜瓜苗期根系为材料,分别采用改进的TCA/丙酮沉淀法、Tris/酚提取-甲醇/醋酸铵沉淀法及SDS/酚提取法提取总蛋白,进行SDS电泳和双向电泳分离,扫描后的胶图利用Image Master 2D Elite 6.01软件进行分析,重点分析胶图总点数、匹配点数和差异蛋白点数.结果表明:Tris/酚提取-甲醇/醋酸铵沉淀法得到的总蛋白含量最高;TCA/丙酮沉淀法分离得到的蛋白条带和蛋白点数最少,且对分子量较高的偏碱性区域的蛋白提取效果差,与其他2种方法相比明显丢失了较多的蛋白.因此,进行甜瓜幼苗根系总蛋白质组分析时,可采用后2种方法,其中Tris/酚抽提法更简单易行.     

不同提取方法对佛手多糖性质和乙醇脱氢酶活性的影响

[目的]研究不同提取方法对佛手多糖理化性质及乙醇脱氢酶活性的影响,为改进佛手多糖生产方式和佛手多糖解酒研究提供依据。[方法]分别采用传统水提法、超声辅助法、微波辅助法、超声-微波协同提取法和复合酶法提取佛手多糖,探讨5种提取方法对多糖得率、糖醛酸含量、分子量、单糖组成、红外光谱和乙醇脱氢酶活性的影响。[结果]水提法和超声-微波协同提取多糖得率最高,分别为(4.26±0.21)%和(4.15±0.14)%。不同方法提取的佛手多糖分子量大小存在差异,其中复合酶法提取多糖平均分子量为617.85 k D,约是水提多糖分子量的4倍。5种多糖均呈现出典型的吡喃型多糖和α型糖苷键吸收,单糖组成均以阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖为主。超声-微波协同提取多糖对乙醇脱氢酶激活能力最强,可达(46.58±1.76)%,而传统水提多糖抑制乙醇脱氢酶活性。[结论]超声-微波协同提取佛手多糖得率高且所需时间短,对乙醇脱氢酶激活能力强,推测乙醇脱氢酶激活能力与多糖分子量大小、半乳糖醛酸连接方式有关。     

鹅掌楸愈伤蛋白质组的样品比较

为建立适合鹅掌楸胚性愈伤大规模蛋白质组研究,比较分析4种蛋白质提取方案:Mg/NP-40-三氯乙酸(简称TCA)/丙酮、TCA/丙酮、裂解液-Clean-up、裂解液-TCA/丙酮,并进行蛋白质的聚丙烯酰腚凝胶电泳(简称SDS-PAGE)和双向电泳分析。SDS-PAGE图谱显示:裂解液-Clean-up、裂解液-TCA/丙酮法分离高分子量蛋白质条带相对于Mg/NP-40-TCA/丙酮、TCA/丙酮法少;Mg/NP-40-TCA/丙酮法和裂解液-Clean up法低分子量提取、分离效果较差。在SDS-PAGE基础上对Mg/NP-40-TCA/丙酮、TCA/丙酮法提取蛋白质样品进行双向电泳,结果表明:TCA/丙酮法得到的凝胶图蛋白质点分布均匀、背景清晰且纵横条纹较少,且TCA/丙酮法相对于Mg/NP-40-TCA/丙酮法来说在小分子量蛋白质、碱性蛋白质分离方面有优势。同时随机选取双向电泳分离的蛋白质进行质谱分析,结果显示,TCA/丙酮法较适合鹅掌楸胚性愈伤蛋白质组的大规模分析。     

水稻根部蛋白质组样品制备的方法研究

为了选择适用于水稻根部蛋白质组分析的样品制备方法,以水稻苗期幼嫩根尖为材料,采用TCA/丙酮沉淀法、Tris法、尿素/硫脲法对水稻根部总蛋白质进行提取并比对,通过Bradford法、SDS PAGE电泳技术对蛋白质含量和种类进行分析。结果显示,Tris法提取出的水稻根部蛋白质含量和种类明显少于其他2种方法;尿素/硫脲法和TCA/丙酮沉淀法提取的蛋白质种类和含量都较多,其中,尿素/硫脲法的蛋白质图谱中蛋白条带多,染色深而且很清晰,尤其适用于较低分子量蛋白质的提取,TCA/丙酮沉淀法则适于高分子量蛋白质的提取。因此,进行水稻根部总蛋白质组分析时,可选用尿素/硫脲法。     

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱检测蛋白质分子量的优化研究

【目的】研究采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）技术检测蛋白质分子量的优化条件。【方法】选择3种不同的基质检测牛血清白蛋白（BSA）的分子量,在选定最佳基质化合物的基础上,通过改变样品蛋白质的浓度,以获得高质量的质谱峰图,确定蛋白质样品的最小和最优检测量。【结果】1 μg蛋白质样品与10 mg/mL含0.1%乙酸（TFA）和50%乙腈（ACN）的芥子酸（SA）基质水溶液混合检测分子量,可产生最高质量的MALDI-TOF-MS峰图,同时蛋白质样品最小检测量应不少于500 ng。【结论】MALDI-TOF-MS技术操作简单、分析快速、灵敏度高,是一种检测蛋白质分子量的可靠方法;研究结果确定了获得最优化质谱峰的最佳组合,这是从高度复杂的蛋白质样品测定准确分子量的必备条件。     

辐照对黄原胶分子量、结构及流变性能的影响

 【目的】探讨辐照剂量对黄原胶分子量、分子量分布、结构、流变性能的影响,为辐照技术在黄原胶及其它多糖分子修饰上的应用提供理论依据。【方法】以60Co-γ射线对固态黄原胶进行不同剂量 (0—400 kGy) 的辐照,采用凝胶渗透色谱（GPC）、X-射线衍射(XRD)、红外扫描(FTIR)、紫外-可见光扫描(UV-vis)以及流变仪等对样品的分子量、分子量分布、结构以及流变性能进行表征和测定。【结果】低于10 kGy剂量的辐照使黄原胶分子量增大,分子量分布变窄;辐照剂量高于10 kGy后,分子量随剂量增大而降低,而分子量分布先变宽,在50 kGy时达到最大后,又趋于变窄。X-射线衍射、红外及紫外分析表明,辐照造成黄原胶分子上的部分糖苷键发生断裂,引起结晶度的变化,并在链端产生少量羰基,但其基本化学结构和晶体结构保持稳定。辐照处理后,黄原胶溶液的表观黏度与剪切速率、剪切时间和温度之间的关系均发生了显著变化。【结论】γ射线可同时作用于黄原胶的结晶区和无定形区,引发聚合和降解两种辐照效应,并对其分子量、分子量分布造成显著影响,进而使其流变性能发生改变。     

基于高光谱的稻米品质估测模型的构建

通过测试不同试验条件下稻米品质及其高光谱数据,研究稻米中淀粉、蛋白质和胶稠度与高光谱数据特征之间的相关关系。结果表明:在不同施肥条件下,通过构建归一化指数(NDI,x)与稻米品质指标(y)的多种关系模型,比较模型预测的显著性,得出的多项式模型对稻米品质指标具有较高预测性,通用模型y=ax2+bx+c中的构成系数a、b、c因肥料水平差异取值不同;在不同品种条件下,通过比较波段比值指数(RI,x)与稻米品质指标(y)的相关系数,得出的最佳波段组合分别为x直链淀粉=R783nm/R634nm、x蛋白质=R829nm/R646nm和x胶稠度=R900nm/R670nm,推算出预测稻米品质指标的线性回归方程通用模型y=ax+b中的构成系数a、b因品种差异取值不同。这表明,运用高光谱方法估算稻米中的直链淀粉、蛋白质含量和胶稠度切实可行,可为稻米品质遥感监测提供依据。     

微波辅助酸水解褐藻糖胶的研究

[目的]研究微波辅助酸解在低分子量海带褐藻糖胶制备中的可行性。[方法]采用酸提取法制备海带褐藻糖胶，测定在不同HCl浓度(0、1、2 mol/L)、不同降解时间(40、50、60 min)、不同降解温度(70、80、90℃)条件下微波辅助酸解得到的褐藻糖胶的分子量，分析不同降解条件对褐藻糖胶分子量的影响，并与水浴辅助酸解的结果进行对比分析。[结果]随着HCl浓度、降解时间、降解温度的升高，酸解产物的分子量降低，且温度对降解产物分子量的影响最大。与水浴加热相比，微波辅助酸解降解产物的分子量更低。在80℃,HCl浓度为1 mol/L,降解40 min以上，比较容易制备低分子量褐藻糖胶。微波比水浴加热更容易对褐藻糖胶的硫酸基造成破坏。在2 mol/L HCl条件下，微波和水浴辅助酸解60 min,分别在70和90℃观察到明显的硫酸基脱除现象。[结论]采用微波辅助酸解法制备低分子量褐藻糖胶时，要注意硫酸基脱除的问题。     

马铃薯NF-YA转录因子基因的克隆及生物信息学分析

NF-Y类转录因子是真核生物中普遍存在的一种转录因子复合物,通过与特异性的于启动子区原件结合来调节目的基因的表达。本研究在马铃薯中克隆得到NF-YA基因的全长c DNA序列,其全长c DNA序列为1 076 bp,591 bp的开放阅读框编码一个196个氨基酸的蛋白质,分子量为22.06 k Da,等电点为10.06;该基因序列的分子量、等电点及预测的蛋白质的长度与已报道拟南芥、水稻、玉米和番茄中NF-YA转录因子家族成员极为相似。     

适用于毛白杨芽双向电泳分析的蛋白质提取方法

本实验以毛白杨芽为实验材料,采用Tris鄄酚法、三氯乙酸/ 丙酮法和三氯乙酸/ 丙酮+ Tris鄄酚法对其蛋白质提 取方法进行比较,采用双向电泳分离蛋白质,通过PDQuest 软件和质谱对这3 种提取方法得到的双向电泳胶进行分 析。结果显示,三氯乙酸/ 丙酮法得到的蛋白点数量为231 ±4,得到的鲜样中的总蛋白质含量为(3.57 ±0.618) mg/ g,均高于其他两种提取方法,并且所得到的双向电泳胶更清晰,为毛白杨芽蛋白质提取的最适方法。      

退化蛹虫草生物学特性的变化特征研究

以 5 个蛹虫草菌种的正常菌株和退化菌株为研究对象,研究正常与退化菌株的过氧化氢酶活性、脱氢酶活性、脱色能力、虫草素和腺苷含量的变化。结果表明,与正常菌株相比,退化菌株过氧化氢酶活性、脱氢酶活性、脱色能力以及虫草素、腺苷含量均明显下降。