马铃薯外植体再生植株的研究

以马铃薯(Solanum tuberosum L.)6个栽培品种的叶圆片和幼茎切段作外植体,以 MS 为基本培养基,添加不同配比的激素制成4种诱导和分化培养基,研究这些外植体的再生植株分化率。结果表明,来自上述外植体的愈伤组织,苗的分化率平均分别为60.1%和88.7%.如果选择适当的基因型和激素配比,可使叶圆片和幼茎切段愈伤组织的成菡率分别高达162.3%和143.8%。     

低频再生黄瓜离体培养体系的优化

【目的】优化低频再生黄瓜离体培养体系,为黄瓜遗传转化体系的进一步完善奠定基础。【方法】以低频再生黄瓜种质Q24和L66为材料,分别以黄瓜的子叶、子叶节和下胚轴为外植体,研究外植体类型对黄瓜再生频率的影响;在MS培养基中添加不同质量浓度6-苄基腺嘌呤(6-BA)和脱落酸(ABA),研究激素配比对黄瓜再生频率的影响;将获得的黄瓜子叶节外植体置于1/2 MS培养基上预培养0,1,2,3和4 d,研究预培养处理对黄瓜再生频率的影响。【结果】不同基因型黄瓜再生频率差异显著,其中Q24整体上具有相对较高的再生频率,其子叶节再生频率为54.8%,下胚轴再生频率为50.0%;L66的再生频率相对较低,其子叶节再生频率为36.9%,下胚轴再生频率为16.7%。激素配比显著影响黄瓜子叶节外植体的再生频率,其中1.00 mg/L ABA+1.00 mg/L 6-BA对Q24子叶节不定芽的诱导效果最好,再生频率达到60.7%;2.00 mg/L ABA+1.00 mg/L 6-BA对L66子叶节不定芽的诱导效果最好,再生频率达到42.9%。预培养处理可显著提高L66子叶节的再生频率,经过1～3 d预培养,其再生频率逐渐增加并达到最高(32.1%),4 d后再生频率开始降低;Q24子叶节经3 d预培养再生频率达到最高,为27.4%,但与对照相比差异不显著。【结论】Q24子叶节外植体最适激素配比为1.00 mg/L ABA+1.00 mg/L 6-BA,经3 d预培养后其再生频率可达60.7%;L66子叶节外植体最适激素配比为2.00 mg/L ABA+1.00 mg/L 6-BA,经3 d预培养后再生频率可达42.9%。     

新疆苜蓿愈伤组织再生体系建立的研究

以新牧1号、新疆大叶苜蓿和新疆野生黄花苜蓿无菌苗下胚轴为外植体,研究了两种诱导培养基对愈伤组织诱导、生长的影响,以及增殖培养基中附加GSH和ABA对愈伤组织增殖、分化及再生的影响.结果表明,MS+2,4-D 2mg/L+NAA 2mg/L+KT 1mg/L为较佳诱导培养基;增殖培养基中附加GSH 15mg/L有利于分化及植株再生;增殖培养基中附加GSH 15mg/L+ABA 3 mg/L有利于提高新牧1号和新疆大叶苜蓿体胚分化能力,附加GSH 15mg/L+ABA 6mg/L有利于新疆野生黄花苜蓿体胚分化频率;实验共筛选出新牧1号、新疆大叶苜蓿、新疆野生黄花苜蓿高分化能力基因型分别为5、6和5个.     

甜瓜叶片高效再生体系的建立

为了建立高效稳定的甜瓜植株再生体系,为甜瓜的转基因技术提供受体材料,以薄皮甜瓜品种"西甜一号"叶片为外植体,通过器官发生途径诱导形成不定芽,研究了不同的激素组合、外植体放置方式、暗培养时间等条件对其再生的影响。结果表明,以新梢顶端展开的第2~3片叶在MS 6-BA1.0 mg/L的诱导培养基上,外植体远轴面向下接触培养基,直接转入正常光周期下培养再生频率可达100%,平均每个外植体上可诱导出11株健壮植株。在MS 6-BA 0.05 mg/L不定芽伸长培养基上,分化的不定芽(丛)能够伸长。在1/2MS IAA 0.2 mg/L的生根培养基上无根苗生根,生根率可达100%。     

新疆大叶紫花苜蓿(Medicago sativa.L)子叶、下胚轴、根的植株再生

随着植物抗逆性研究和植物转基因技术的发展,通过异源目的基因转化培育耐盐碱苜蓿品种的研究已引起人们的关注,植物受体高频再生体系的建立是异源转化高效的基础。选取新疆大叶紫花苜蓿种子萌发5～7d无菌苗的子叶、下胚轴及根为外植体,诱导愈伤培养基为MS 2,4-D0.1～3.0mg/L(8种不同水平)或MS 2,4-D2.0mg/L KT0.01～0.5mg/L(10种不同水平),诱导芽培养基为MS 6-BA0.5mg/L NAA0.05mg/L,生根培养基为MS。结果表明,外植体在MS 2,4-D2.0mg/L KT0.2mg/L培养基中能够产生状态较好可再分化的愈伤组织,子叶、下胚轴、根的平均出愈率分别为93.1%、100%、100%。愈伤组织在MS 6-BA0.5mg/L NAA0.05mg/L培养基中培养40～80d中均可分化芽,子叶、下胚轴、根的芽平均分化率为50%、78%、50%,将2cm以上的芽转入MS培养基中诱导生根,14d后,生根的小植株炼苗移入花土中,成活率达90%以上。子叶、下胚轴、根在该体系中均能获得再生植株,根也是一种较好的植株再生材料,以根为外植体进行植株再生的研究报道还较少。     

黄花蒿离体再生体系优化研究

为优化黄花蒿(Artemisia annua Linn)离体再生体系,并建立黄花蒿遗传转化途径,选用黄花蒿常规品种428-A为材料,以子叶、幼嫩叶片、顶芽作为外植体,设计不同植物生长调节剂组合的培养基配方。结果表明,黄花蒿子叶适宜作为组织培养的外植体,MS+1.5 mg/L 6-BA+0.05 mg/L NAA培养基有利于诱导愈伤组织形成和分化,其出愈率及出芽率分别高达89.0%、85.7%,1/2MS+0.05 mg/L NAA+0.05mg/L IAA培养基有利于再生植株不定根的诱导,生根诱导率达94.0%。     

萝卜高频再生体系的建立

通过基因型筛选,选出具有较高再生潜力的萝卜品种,并对其进行了外植体类型、琼脂浓度、激素配比等试验,比较了不同浓度的AgNO3、ABA、TDZ和抗生素对萝卜再生的影响,在改良MS+6-BA 5 mg/L+NAA 0.1 mg/L+蔗糖20 g/L+琼脂9%+AgNO35 mg/L+ABA 0.3 mg/L+TDZ 0.2 mg/L培养基上,建立了再生率达80.2%的萝卜再生体系。     

影响芝麻子叶离体培养植株再生频率的研究

芝麻品种橡芝5号成熟种子的子叶切段，培养在MS附加不同成分的培养基上，子叶外植体的培养效果不同。以6—BA5mg／L与IAAlmg／L，的激素组合分化效果最好，培养基中单独添加AgNO_3或ABA均能促进植株再生，且AgNO_3作用优于ABA。AgNO_35mg／L和ABA1．0mg／L，配合获得了更高的植株再生频率，分化频率为83％。同时，不同状态下来源的外植体及暗培养处理对子叶外植体的培养效果不同。在本实验条件下芝麻离体培养分化途径为子叶直接分化成芽。     

毕克齐山药离体培养诱导再生植株的研究

分别以毕克齐山药零余子、带节茎段为外植体,通过离体培养研究不同激素、不同浓度MS培养基对诱导再生植株的影响。结果表明:以零余子做外植体时,无附加激素的1/4MS培养基效果最好,再生植株诱导率达到40%。以节间为外植体时,MS+NAA2.0mg/L+KT0.5mg/L培养基再生植株诱导率达到95%。     

马铃薯‘华颂66号’遗传转化体系的建立

为探究马铃薯的最佳遗传转化体系,以紫色马铃薯‘华颂66号’无菌组培苗茎段为外植体,用农杆菌介导法将含有植物沉默载体质粒pBWA(V)KS-miR8019转化马铃薯外植体,测定不同预培养时间、不同激素组合及抗生素对马铃薯愈伤再生转化体系的影响。结果表明：1)茎段预培养时间为2 d时,愈伤组织诱导率最高;2)最适的外植体愈伤组织诱导的培养基配方为：MS干粉式培养基+2.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L 2,4-D,愈伤组织的诱导率为96.7%。最适愈伤组织分化的培养基为：MS干粉式培养基+4.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+1.0 mg/L GA₃;3)植株再生及生根的抗生素最适筛选浓度为75 mg/L的卡那霉素;4)农杆菌抑制剂的最适浓度为300 mg/L的特美汀,且在愈伤组织诱导、分化及生根阶段都需要加入。综上,通过对农杆菌介导的愈伤再生转化过程中各个影响因素进行试验,初步建立了马铃薯‘华颂66号’的遗传转化体系。     

影响草莓叶片植株再生因素的研究

目前建立草莓的再生体系大多采用TDZ作为主要激素，本研究以广泛栽培的四个草莓品种为材料，系统地研究了不同基因型、叶龄、褐化、暗培养、基本培养基、不同激素组合、Ag^ 等诸多因素对叶片再生的影响，建立了不依赖于TDZ的弗吉尼亚草莓叶片外植体的不定芽再生体系。研究结果表明Ag^ 并不能促进草莓弗吉尼亚植株的再生，反而起到了抑制作用。以顶部充分伸展的18～21d叶龄的无菌苗叶片为外植体，再生效果最好，将此类叶片放在以MS为基本培养基、附加1．6～1．8mg/L6-BA，0．1mg／L NAA，0．4-0．5mg／L KT，O．1mg/L2，4-D的分化培养基上，14d后便可见到不定芽，经过愈伤组织阶段从叶片上分化产生，出现的高峰期在接种后的20—30d，芽分化率高达60％以上。该再生体系可作为基因转化的受体系统。     

菜薹组织培养和植株再生研究

对6个菜薹品种的4种不同外植体进行了组织培养和植株再生研究，结果表明，子叶与茎尖中以分化不定芽，而下胚轴和幼根只能形成愈伤组织及不定根；在MS BA2mg/L NAA1mg/L ABA0.5mg/L AgNO34mg/L培养基上，子叶的不定芽分化频率最高（23．3％），而在MS＋BA1mg/L KT1mg/L NAA0.2mg/L培养基上，茎尖繁殖系统为1．66，快速繁殖效果较为理想，结果还表明，菜薹不同品种间的组织培养能力存在明显差异。     

大白菜组织培养与植株再生研究

以大白菜3个结球类型的不同品种（自交系）为试材,研究了不同基因型、不同外植体及不同培养基附加成分对植株再生的影响。结果表明：大白菜不同基因型间不定芽分化率有明显差异,以叠抱类型的“秋白19号”和合抱类型的“福山包头”再生率较高,直筒类型大白菜不定芽分化率低;带柄子叶是离体培养较理想的外植体,分化培养的最佳培养基为Ms＋6-BA2mg／L＋NAA0．5mg／L＋AgNO3 4mg／L＋ABA0．3mg／L＋蔗糖3．0％＋琼脂1．0％。建立了大白菜带柄子叶的高频再生系统,从接种到获得再生植株只需55—60d。     

白菜类作物子叶高频再生体系的建立

以大白菜品种北京80号、油青矮脚45天菜心、四季菜心王的带柄子叶为外植体,研究不同基因型、苗龄、激素组合、预处理条件及琼脂质量浓度对不定芽再生的影响。结果表明,北京80号的最佳培养基为MS+5mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA+2mg/L AgNO3,再生频率为83.6%;油青矮脚45天菜心和四季菜心王的最佳培养基为MS+0.2 mg/L TDZ+1 mg/L NAA+2 mg/L AgNO3,再生频率分别为73.1%和83.2%。3个基因型的带柄子叶在0.5～1mg/L 2,4-D中预处理3d,再生频率达84%以上。4～5d苗龄的外植体诱导不定芽效果较好。琼脂的质量浓度以12g/L为宜。通过不定芽继代培养和生根驯化建立白菜类作物较高再生频率的再生体系。     

马铃薯组培条件快速优化方法的研究

本研究以马铃薯栽培品种鲁马一号为实验材料，应用正交试验设计方法，以最少量的典型试验资料研究了再生系统主要因子对马铃薯外植体（叶园片）再生率的影响，并且利用改进的单纯形法对再生系统进行优化，得到了良好的组织培养条件和优化的再生系统。试验结果表明：此方法能大大缩短优化再生条件的筛选周期，可靠性高，具有很高的实用价值     

黄瓜组织培养研究

对黄瓜组织培养的条件作了探讨。结果表明,苗龄1－2d的子叶,在附加1.0mg/L BA,2.0mg/L AgNO3和1.0mg/L ABAr MS的固体培养基上,最适于不定芽分化,1个月内的再生率达50％左右,其中苗龄和ABA的影响最为显著,加入适量的AgNO3可改善黄瓜愈伤组织的质地、促进芽的形成。     

野生梭梭的离体培养和植株再生

以野生梭梭带腋芽茎段为外植体进行离体再生研究,探讨不同植物生长调节剂、硝酸银和蔗糖的质量浓度对其愈伤组织诱导、不定芽分化和生根的影响。结果表明,野生梭梭带腋芽茎段愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+2,4-D 2.0 mg/L+6-BA 0.5 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂6.0 g/L,诱导率为100%;不定芽分化的最佳培养基为MS+NAA 0.5 mg/L+TDZ 1.0 mg/L+AgNO33.5 mg/L+蔗糖26 g/L+琼脂6.5 g/L,不定芽分化率为97.8%;影响野生梭梭再生的最主要因素是NAA,其次是TDZ和AgNO3,蔗糖影响最小。     

黄灯笼辣椒子叶离体培养与植株再生

以黄灯笼辣椒无菌苗子叶为外植体,研究激素对不定芽分化及植株再生的影响。结果表明:6-BA对子叶不定芽的诱导效果最好;IAA与6-BA配合能明显提高子叶不定芽的分化率;在分化培养基中添加4mg/LGA3,有利于不定芽的伸长。不定芽分化的最适培养基为MS 6-BA5mg/L IAA1mg/L AgNO36mg/L,平均诱导率达75%;不定芽伸长的最适培养基为MS 6-BA3mg/L IAA1mg/L AgNO36mg/L GA34mg/L,平均伸长率可达90%;最佳生根培养基为MS IAA0.5mg/L,生根率达95%;建立了辣椒子叶植株再生体系。     

黄瓜(Cucumis sativus L.)离体再生和转化体系的优化

以黄瓜4d苗龄子叶节和农杆菌GV3101为实验材料,对再生体系和转化体系条件进行优化。再生部分,将培养基中的6-BA和ABA设立浓度梯度,并添加适量的AgNO3,进行再生情况对比,得最佳配方MS+1.5mg/L 6-BA+1.0mg/L ABA+2.0mg/L AgNO3,可直接诱导出芽,最短45d获得完整植株。转化部分,根据敏感性试验确定选择培养卡那霉素(kan)筛选压,并运用gus瞬时表达法对预培养时间、侵染时间、共培养时间和抗氧化剂的添加等影响转化效率的因素进行优化。结果表明,50mg/L kan筛选压即可筛选出阳性株;预培养时间1～2d,侵染时间20～30min,共培养3d时转化效率较高;抗氧化剂的加入可显著提高转化效率。对该转化体系进行验证,PCR结果初步表明外源基因成功整合入黄瓜基因组中。     

“晶瑶”草莓叶片再生体系的建立

以草莓"晶瑶"为试材,研究了暗培养时间、培养温度、激素配比、硝酸银浓度、不同植物凝胶等对不定芽再生的影响,建立了"晶瑶"草莓叶片的离体再生体系。结果表明:硝酸银对"晶瑶"草莓叶片再生有抑制作用;暗培养15 d、28℃的培养温度、以Phytagel为凝固剂有利于"晶瑶"草莓叶片再生;TDZ 1.5 mg/L+IBA 0.3 mg/L是较好的诱导培养基激素配比,此时不定芽的再生率达到76.77%,平均再生芽数达到4.3个。