沙丁胺醇在肉牛血浆及尿液中残留消除规律研究

【目的】研究沙丁胺醇在肉牛血浆、尿液中残留消除规律.【方法】选取3头中国西门塔尔杂交肉牛,连续饲喂沙丁胺醇21d,给药剂量0.45mg/(kg·d),使用UPLC-MS/MS法分别测定给药第1、7、14、21天和停药第3、7、14、28天酶解前、后的血浆和尿液样品中沙丁胺醇质量浓度.【结果】给药期内,酶解前、后血浆中沙丁胺醇质量浓度范围分别为0.23~0.32ng/mL、34.2~42.48ng/mL,停药后迅速消除,分别在停药第3天(未酶解血浆)和停药第14天(酶解后血浆)时低于LOQ(0.2ng/mL),而且酶解后血浆中沙丁胺醇质量浓度显著高于酶解前(P0.01);给药期内,酶解前、后肉牛尿液中沙丁胺醇含量分别在给药第21天(2 444.4ng/mL)和给药第14天(7 863.4ng/mL)达到峰值,随后逐渐消除,停药28d时尿液中沙丁胺醇浓度低于LOQ(0.5ng/mL),而且酶解后尿液中沙丁胺醇质量浓度显著高于酶解前(P0.01).【结论】与血浆相比,尿液中沙丁胺醇质量浓度较高,消除速率较慢,而且酶解样品中的沙丁胺醇质量浓度显著高于未酶解样品.     

猪肉组织及尿液中莱克多巴胺的快速检测

为实现猪肉组织中莱克多巴胺残留大量样本的快速检测,选用莱克多巴胺酶联免疫吸附(ELISA)、化学发光微粒子免疫(CMIA)检测试剂盒对猪肉、猪肝和尿液3种样品中莱克多巴胺残留量进行检测,并与国家标准检测气相色谱-质谱法(GC-MS)进行比较。结果表明:ELISA、CMIA这2种试剂盒对猪肉、猪肝、尿液样品在莱克多巴胺0.5μg/kg和1.0μg/kg 2个水平的平均回收率达90.4%~103.4%,变异系数均小于10%;对猪肉、猪肝和尿液3种样品的最低检测限分别为0.28μg/kg、0.33μg/kg和0.12μg/kg,0.45μg/kg、0.50μg/kg和0.20μg/kg;2种试剂盒与GC-MS检测实际样品的判断结果一致,且检测时间短,仅需少量仪器,检测准确度高,适合大批量样品检测。     

泌乳期小尾寒羊5种生殖激素的变化规律研究

【目的】研究泌乳期小尾寒羊血清中5种生殖激素(FSH、LH、PRL、P4、E2)质量浓度的变化规律。【方法】分别在春、秋季于小尾寒羊产羔0～60d内,每隔5d采血1次,共采13次,颈静脉采集试验羊全血10mL,离心后收集血清,再用放射免疫分析法(RIA)测定血清中FSH、LH、PRL、P4和E2的质量浓度。【结果】春、秋季小尾寒羊母羊在产后泌乳初期(0～5d),血清中FSH、LH、E2和P4的质量浓度均处于较低水平。春、秋季小尾寒羊产后第10天,外周血中FSH质量浓度开始上升,第40天分别达到各自平均水平,春季为(29.61±12.40)ng/mL,秋季为(32.60±12.59)ng/mL;LH质量浓度在产后5d开始上升;PRL浓度在产后前5d保持较高水平,之后缓慢下降直到试验结束(60d);E2质量浓度总体均呈波动上升趋势,在45d时均出现峰值,春季为(73.84±59.46)pg/mL,秋季为(65.33±35.09)pg/mL,之后维持在较高水平直到试验结束;P4质量浓度总体均呈现出波动上升的变化趋势,并分别在45和55d出现最高峰((0.55±0.31)和(0.70±0.43)ng/mL)。泌乳母羊产后血清中P4质量浓度变化在个体间的差异较大,产后60d内每个试验羊均有卵巢活动,最早出现卵巢活动的时间为产后第10天。【结论】小尾寒羊在产后40d内生殖器官的各项功能均已得到基本恢复,此时对小尾寒羊进行诱导发情可以得到较好的效果。     

莱克多巴胺表面分子印迹材料的制备、表征及吸附性能

【目的】制备莱克多巴胺硅胶表面分子印迹材料。【方法】以3-（异丁烯酰氧）丙基三甲氧基硅烷为媒介,将聚甲基丙烯酸（PMAA）偶合接枝到硅胶微粒表面,形成接枝微粒PMAA/SiO2;以莱克多巴胺为模板分子,乙二醇二缩水甘油醚（EGDE）为交联剂,对接枝在硅胶表面的PMAA 大分子链进行分子印迹,制备莱克多巴胺表面分子印迹材料（MIP-PMAA/SiO2）。采用扫描电镜观察了分子印迹材料表面,用红外光谱对分子印迹材料的化学结构进行表征。静态法研究分子印迹材料对莱克多巴胺的结合性能与分子识别特性。【结果】莱克多巴胺分子印迹材料对莱克多巴胺的吸附能力明显强于克仑特罗和沙丁胺醇,吸附量为11.08 mg•g-1,特异性吸附容量为9.93 mg•g-1,印迹指数为9.63,吸附平衡时间为10 min,洗脱5 min,解吸附率为92.3%。【结论】分子印迹材料对莱克多巴胺具有特异的识别选择性、优良的结合亲和性及洗脱性。     

山羊血清中CD58间接竞争ELISA检测方法的建立

【目的】制备抗CD58单克隆抗体,在此基础上建立可用于定量检测山羊血清中CD58含量的间接竞争ELISA方法。【方法】以纯化的CD58蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤细胞融合技术制备抗CD58单抗,并对其特异性进行鉴定;在此基础上,建立CD58间接竞争ELISA检测方法,对不同生理时期山羊血清中CD58的含量进行检测。【结果】筛选出1株稳定分泌抗CD58单克隆抗体的杂交瘤细胞株G6;玫瑰花环抑制试验和Western-blotting试验表明,制备的细胞株能分泌针对CD58的特异性单克隆抗体;对间接竞争ELISA方法的反应条件进行优化后,建立了检测CD58的间接竞争ELISA方法,该方法最适可测范围为10~1000000 ng/mL,理论最低检测限为3.087 ng/mL,批内和批间平均变异系数分别为3.50%和5.22%;用建立的方法检测未发情和发情山羊血清中CD58含量分别为(32.160±3.69)和(35.929±3.08)μg/mL,怀孕山羊血清中CD58含量为(61.564±5.10)μg/mL。【结论】建立了山羊血清中CD58间接竞争ELISA检测方法,该方法敏感、特异,具有良好的重复性;对不同生理时期山羊血清中CD58含量的检测表明,怀孕山羊血清中CD58含量显著高于未发情和发情山羊。     

α-淀粉酶和糖化酶协同酶解马铃薯淀粉的工艺条件优化

【目的】探讨α-淀粉酶和糖化酶协同酶解马铃薯淀粉的工艺条件,为降低微藻生产生物柴油成本提供参考。【方法】采用α-淀粉酶和糖化酶协同酶解马铃薯淀粉,以葡萄糖含量为测定指标,选取反应温度、底物质量浓度、加酶量(m(α-淀粉酶)∶m(糖化酶)=3∶1)、反应时间4个影响因素,进行L25(54)正交试验,确定最佳酶解工艺条件;采用高效液相色谱法(HPLC)、电子扫描电镜(SEM)、X射线衍射(XRD)法对酶解产物的物理特性进行分析。【结果】最佳酶解工艺条件为:反应温度80℃、底物质量浓度0.1 g/mL、加酶量为干基底物淀粉质量的0.6%、反应时间4 h、反应pH 4.0,在此条件下,马铃薯淀粉水解液中葡萄糖含量最高,为802.9 g/L。HPLC、SEM、XRD测定结果表明,酶解产物中葡萄糖所占比例最高,酶解未破坏马铃薯淀粉晶型结构,酶解作用只在淀粉表面发生。【结论】得到了α-淀粉酶和糖化酶协同酶解马铃薯淀粉的最佳工艺条件,为微藻生产生物柴油提供了较好的碳源,节约了生产成本。     

反刍动物β——受体激动剂代谢残留规律及监测技术新发现

<正>中国农业科学院北京畜牧兽医研究所张军民研究员的研究团队自2012年以来一直致力于β——受体激动剂(俗称"瘦肉精",为一类物质)在肉牛体内代谢残留规律的研究,目前已完成盐酸克洛特罗在肉牛体内代谢残留规律研究和莱克多巴胺肉牛药代动力学、残留及消除规律研究,并有了两个突破性的发现。(1)研究结构表明,停药早期盐酸克伦特罗在尿液和血液中的残留呈下降趋势,而毛发中的残留却     

核桃凋落叶对萝卜种子发芽和幼苗生长的影响

【目的】分析核桃(Juglans regia)凋落叶浸提液和腐解液对萝卜(Raphanus sativus)种子萌发及幼苗生长的影响,探讨核桃凋落叶潜在的化感效应。【方法】采用浸提和腐解(20和40d)两种方式处理核桃凋落叶,得到3种质量浓度(25mg/mL(低)、50mg/mL(中)、100mg/mL(高))核桃凋落叶浸提液和腐解液,以蒸馏水处理为对照(CK),分析不同质量浓度核桃凋落叶浸提液和腐解液处理下萝卜种子萌发、幼苗生长相关生理指标的变化。【结果】与对照相比,核桃凋落叶浸提液和腐解液均降低了萝卜种子的发芽率、发芽指数和发芽势,并对萝卜幼苗的苗高、根长、鲜质量表现出低促高抑的浓度效应;核桃凋落叶浸提液和20,40d腐解液均提高了萝卜种子内可溶性蛋白和可溶性糖含量,并明显增加了萝卜幼苗叶片丙二醛含量,对幼苗超氧化物歧化酶(SOD)活性具有促进作用,对过氧化氢酶(CAT)活性具有抑制作用,而对幼苗氧化物酶(POD)活性表现为低促高抑的浓度效应。幼苗可溶性蛋白和可溶性糖含量均随处理液质量浓度的增加而升高。核桃凋落叶腐解液对萝卜的化感效应强于浸提液,且40d腐解液的化感效应强于20d腐解液。【结论】在一定质量浓度范围内,核桃凋落叶浸提液和腐解液对萝卜种子萌发及幼苗生长具有较明显的抑制作用,且抑制作用随着处理液质量浓度的升高而增强,同时在一定的时间范围内随凋落叶腐解时间的延长而呈增强趋势。     

甘肃高山细毛母羊血浆中雌二醇和孕酮的含量变化

选用6只甘肃高山细毛周岁母羊,于5月30日～9月20日采集血样,用RIA方法进行血浆中雌二醇、孕酮激素含量的测定分析。结果表明:乏情期雌二醇的平均值为(7.42±4.69)pg/mL,7月17日达到第一个峰值(16.81±7.03)pg/mL,P<0.05,8月11日达到第二个峰值(9.82±1.37)pg/mL,P<0.05;孕酮的平均值为(0.26±0.08)ng/mL,7月9日达到峰值(0.5±0.3)ng/mL,P<0.05,波动周期在15d左右;发情后24h雌二醇的平均值为(9.76±2.4pg/mL),孕酮的平均值为(0.76±0.21)ng/mL。     

泰地罗新注射液在猪体内的药动学及生物利用度研究

【目的】以健康猪为研究对象,开展泰地罗新注射液在猪体内的药动学特征及生物利用度的研究,从而为泰地罗新的临床应用提供科学依据。【方法】选取20头健康猪,随机分为2组,按4 mg·kg~(-1)进行单次静注、肌注泰地罗新注射液,于注射后5 min、10 min、15 min、0.5 h、1 h、2 h、4 h、8 h、12 h、1 d、2 d、3 d、4 d、5 d、6 d、7 d、8 d、9 d、10 d、11 d、12 d、13 d、14 d、15 d进行前腔静脉采血,采用Phenomenex Luna C18(150 mm×2 mm,5μm)。以乙腈-0.1%甲酸水溶液为流动相,梯度洗脱程序洗脱,流速0.25 mL·min~(-1),柱温为30℃,进样量5.0μL。样品自然解冻,准确吸取0.5 mL血浆于5 mL离心管内,加入2 mL乙腈,涡旋混匀,震荡10 min,8 000 r/min离心10 min,取上清液35℃下氮气吹干,1 mL复溶液复溶,过0.22μm微孔滤膜,LC-MS/MS检测分析。泰地罗新在4—1 000 ng·mL~(-1)的浓度范围内呈现良好的线性关系,相关系数为0.994—0.998,检测限为2 ng·mL~(-1),定量限为4 ng·mL~(-1),该方法的相对回收率为87.91%—104.93%,呈良好的线性关系,相关系数为0.994—0.998。批内变异系数为2.12%—12.09%,批间变异系数3.92%—10.65%。该方法灵敏度高,操作简便,可以用于泰地罗新在猪体内的药代动力学研究。泰地罗新采用电喷雾离子源(ESI)离子化;正离子模式扫描;多反应监测模式(MRM),电喷雾电压(IS)为5500V;雾化气压力(GS1)为50psi;辅助气流速(GS2)为50 L·min~(-1),气帘气压力(CUR)为25 psi;离子源温度(TEM)为550℃;碰撞室压力(CAD)为6 psi。m/z→734.6/98.1和m/z→734.6/174.4。HPLC-MS/MS法检测猪血浆中泰地罗新的浓度。采用药动学软件Winnonlin5.2.1的非房室模型分析方法,计算有关药物动力学参数。【结果】猪静脉注射给药后,AUC_(last)和AUC_(inf(pred))分别为(18030.30±7560.75)h·ng·mL~(-1)和(18795.31±7455.23)h·ng·mL~(-1)。t_(1/2)为(99.42±22.25)h,MRT为(81.71±12.15)h。肌肉注射给药后,C_(max)为(886.00±155.63)ng·mL~(-1),T_(max)为(0.51±0.30)h,AUC_(last)和AUC_(inf(pred))分别为(19702.05±6442.36)h·ng·mL~(-1)和(20840.08±6849.76)h·ng·mL~(-1)。t_(1/2)为(100.83±20.23)h,MRT为(81.80±9.44)h。绝对生物利用度为109.27%。【结论】泰地罗新肌注后在猪体内具有吸收迅速,分布广泛,达峰迅速,消除较慢,生物利用度高等特点,可在兽医临床上安全使用。     

添加不同比例番茄渣青贮对肉牛育肥效果的影响

[目的]为番茄渣在肉牛养殖中的推广和应用提供科学依据。[方法]以番茄渣青贮代替部分全株玉米青贮,探讨番茄渣对肉牛育肥效果的影响。[结果]经青贮后番茄渣ADF和NDF分别比干渣低2.68%和3.49%,粗蛋白含量高1.27%。经过90 d饲养试验,试验Ⅰ组(添加20%番茄渣青贮)和Ⅱ组(添加10%番茄渣青贮)的累计增重分别比对照组高10.9和6.0 kg(P<0.05),而平均日增重分别比对照组高121和66 g(P<0.05)。试验Ⅰ和Ⅱ组经济效益分别比对照组高289.40和156.90元。[结论]在育肥肉牛日粮中添加番茄渣青贮代替部分全株玉米青贮,可以促进肉牛生长,提高增重效果,降低饲养成本,增加经济效益。     

脂肪酸钙对放牧肉牛超数排卵效果及雌二醇和孕酮水平的影响

以探讨添加脂肪酸钙对放牧肉牛(婆罗门和BMY)超数排卵效果及血中雌二醇(E2)和孕酮(P4)水平的影响为目的。将48头供体分为Ⅰ(放牧或对照组)、Ⅱ(放牧 浓缩饲料500 g/d)和Ⅲ(放牧 浓缩饲料500 g/d 脂肪酸钙100 g/d)3组,从同期发情处理开始到冲胚结束试验期32 d,并对供体牛在8个处理时段进行采血,用放射免疫分析法(R IA)分析E2和P4水平。试验结果表明:Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ组供体牛超数排卵的排卵率分别为75.4%,74.4%和81.7%(P>0.05),受精率分别为81.4%,55.6%和93.2%(P>0.05);获胚(卵)数分别为7.0枚,6.3枚和7.3枚(P>0.05),可用胚数分别为3.9枚,2.6枚和4.7枚,Ⅲ组显著高于Ⅱ组(P<0.05);E2平均水平分别为0.57 pg/mL,0.47 pg/mL和0.63 pg/mL(P>0.05),P4平均水平分别为3.53 ng/mL,5.03 ng/mL和3.74 ng/mL,Ⅱ组高于Ⅰ,Ⅲ组(P<0.01)。表明适量添加脂肪酸钙能改善全放牧肉牛的营养、增强体质,促进排卵与受精,增加超数排卵的可用胚数;能使供体牛的E2和P4水平比对照组有所提高;添加效果冬、春季优于夏、秋季。     

脂肪酸钙对放牧肉牛超数排卵效果及雌二醇和孕酮水平的影响*

 以探讨添加脂肪酸钙对放牧肉牛(婆罗门和BMY)超数排卵效果及血中雌二醇(E₂)和孕酮(P₄)水平的影响为目的。将48头供体分为Ⅰ(放牧或对照组)、Ⅱ(放牧＋浓缩饲料500 g/d)和Ⅲ(放牧＋浓缩饲料500 g/d＋脂肪酸钙100 g/d)3组,从同期发情处理开始到冲胚结束试验期32 d,并对供体牛在8个处理时段进行采血,用放射免疫分析法(RIA)分析E₂和P₄水平。试验结果表明：Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ组供体牛超数排卵的排卵率分别为75.4%,74.4%和81.7%(P＞0.05),受精率分别为81.4%,55.6%和93.2%(P＞0.05);获胚(卵)数分别为7.0枚,6.3枚和7.3枚(P＞0.05),可用胚数分别为3.9枚,2.6枚和4.7枚,Ⅲ组显著高于Ⅱ组(P＜0.05);E₂平均水平分别为0.57 pg/mL,0.47 pg/mL和0.63 pg/mL(P＞0.05),P₄平均水平分别为3.53 ng/mL,5.03 ng/mL和3.74 ng/mL,Ⅱ组高于Ⅰ,Ⅲ组(P＜0.01)。表明适量添加脂肪酸钙能改善全放牧肉牛的营养、增强体质,促进排卵与受精,增加超数排卵的可用胚数;能使供体牛的E₂和P₄水平比对照组有所提高;添加效果冬、春季优于夏、秋季。     

吉林地方特色肉牛发情周期内生殖激素变化规律研究

[目的]研究吉林地方特色肉牛发情周期体内生殖激素的变化规律,为提高国产特色肉牛繁殖效率提供理论依据。[方法]以吉林地区优质的草原红牛和延边黄牛,以及西门塔尔为试验对象,对发情周期内3个品种牛的血清与尿样中的孕酮、雌二醇,促卵泡素、促黄体素的变化进行测定和对比。[结果]发情第21天已孕与未孕肉牛的孕酮和雌二醇含量均存在极显著差异（P〈0.01）,促黄体素含量在发情当天与其他天相比有显著差异（P〈0.05）。[结论]通过检测肉牛发情早期血液中孕酮含量对发情鉴定及早期妊娠的诊断是切实可行的。     

不同肉牛品种间杂种优势预测

[目的]预测西门塔尔杂交牛（西杂牛）与不同品种牛之间的杂种优势。[方法]以西杂牛为母本,利木赞牛、红安格斯牛、夏洛莱牛、德国黄牛为父本,利用微卫星标记对不同牛种间的遗传距离进行分析,并预测杂种优势。[结果]西杂牛与德国黄牛的遗传距离最大,为1.2598,其次是利木赞牛（1.0546）、红安格斯牛（0.8867）和夏洛莱牛（0.5997）。[结论]西杂牛与其他品种牛之间的杂种优势依次为德国黄牛〉利木赞牛〉红安格斯牛〉夏洛莱牛。     

不同饲喂方式对肉牛育肥效果影响

[目的]比较不同饲喂方法对肉牛育肥的影响,为肉牛育肥方法的选取提供参考依据。[方法]选用40头体重相近的育肥公牛,随机分成试验组和对照组,在试验组使用TMR饲喂方式,对照组使用先粗料后精料的饲喂方法,进行两种饲喂方法对育肥牛产肉性能、饲料报酬和经济效益的分析比较。[结果]对照组试验全期增重和日增重极显著高于试验组(P<0.01),试验组每增重1 kg消耗干物质10.76 kg,对照组仅为8.35 kg,对照组头均多收益为383.24元。[结论〗采用先粗料后精料的饲喂方式对肉牛育肥更合适。     

延边肉牛产业的比较优势与专业化生产分析

[目的]为延边黄牛产业发展提供理论指导。[方法]主要运用综合比较优势指数和集中度对延边肉牛产业与吉林省肉牛产业进行比较分析。[结果]转边肉牛产业具有综合比较优势，集中度有逐年上升的趋势。[结论]延边肉牛产业具有明显的比较优势和发展潜力。     

苹果渣与玉米秸秆混贮饲料应用于肉牛育肥的研究

[目的]分析苹果渣与玉米秸秆混贮饲料对育肥肉牛增重效果、产肉性能及经济效益的影响。[方法]采用随机抽样的方法,从体重（455±10）kg、年龄相近的西门塔尔杂交品种育肥牛中抽取7头组成随机样本,饲喂以苹果渣与玉米秸秆混贮饲料为主要粗饲料配合成的全混合日粮,试验期153d。[结果]①头均日增重为1078.5g/d;②7头牛鲜物质与干物质的采食量为2.2021与1.0220kg/min;③屠宰率为60.45%、净肉率为47.79%、胴体产肉率为79.06%、肉骨比值为5.53、眼肌面积为101cm2、优质高档肉占净肉重68.7%;④育肥结束后,从出售活牛产生的经济效益角度分析,头均盈利182.4元,若从屠宰后出售牛肉（无等级区分）及牛副产品角度分析,头均盈利值增至803.6元。[结论]在肉牛养殖中推广应用苹果渣与玉米秸秆混贮饲料,能在一定程度上达到降低饲养成本、扩大饲料来源、提高养殖业经济效益的目的。     

敌百虫在乌鳢体内和水环境中的代谢动力学及残留研究

[目的]明确敌百虫在水产养殖中的安全性。[方法]全池泼洒0.5 mg/L敌百虫,采用气相色谱法测定敌百虫在乌鳢体内的代谢动力学和残留消除规律。[结果]乌鳢组织和水样中敌百虫的最低检测限为0.02μg/m L。随着时间的延长,敌百虫在乌鳢血液中的浓度逐渐升高,120 h达最高,为0.072 mg/kg,至360 h时未检出。肌肉中12 h内未检出,24 h浓度为0.023 mg/kg,120 h检出最大浓度0.051 mg/kg,至288 h未检出。肝脏8 h未检出,12 h检出浓度为0.026 mg/kg。使用敌百虫后,乌鳢体内的药物残留量均低于我国的兽药最高残留限量要求,但在养殖水体中的残留时间较长,降解半衰期为35.19 h。[结论]为确保敌百虫使用后对水生态环境及食品安全,建议敌百虫使用后的休药期为150℃·d。     

烟管菌T1原生质体制备及菌丝再生条件优化

[目的]研究烟管菌T1(Bjerkandera adusta)原生质体制备及菌丝再生的最佳条件。[方法]研究菌龄、渗透压稳定剂种类和浓度、pH、酶浓度及酶解时间对原生质体得率的影响,并研究再生培养基种类对菌丝再生的影响。[结果]在PDA液体培养基中,以28℃摇床培养3 d的菌丝最适于该菌原生质体制备;用0.5 mol/L KCl配制的含有15 mg/m L的溶壁酶于30℃下酶解3 h,获得原产量最高,达1.18×10~6个/m L;RM1培养基再生率最高,达1.22%。[结论]该研究优化了原生质体制备及菌丝再生条件,为进一步研究烟管菌噬藻分子机制提供理论依据。