灰盖鬼伞漆酶在毕赤酵母中表达及条件优化

根据灰盖鬼伞漆酶基因LCC1的蛋白序列和毕赤酵母的密码子偏爱性设计并合成CCLCC1I基因片段,将其连接到经过改造的pPIC9K质粒上构建分泌表达载体pYN2395;构建好的载体经BglⅡ酶切线性化后电激转化到毕赤酵母GS115中,通过ABTS底物显色反应筛选获得阳性转化子。从培养基、发酵温度、铜离子浓度和甲醇添加量等方面对重组酵母的发酵条件进行了研究。结果显示:添加0.6%的丙氨酸能极大地提高灰盖鬼伞漆酶的表达量,并确定最终优化组合为:培养基使用MMA,发酵温度为20℃,铜离子体积浓度为0.5mmol/L,甲醇添加量为1.0%/24 h。     

达乌里胡枝子没食子酸提取条件的优化

以达乌里胡枝子为对象,研究其没食子酸的最优提取条件,旨在为达乌里胡枝子没食子酸的提取提供依据。结果表明,通过正交试验,达乌里胡枝子没食子酸最佳提取条件为:溶剂浓度60%甲醇,固液比1∶40,超声时间45 min,超声温度60℃;在该条件下,采用高效液相色谱法(HPLC)测定没食子酸的含量(HPLC条件为WaterXBridge C18(250 mm×4.6 mm,5μm),乙腈-0.15%三氟乙酸梯度洗脱,流量为1 m L/min,检测波长为280 nm,柱温30℃),没食子酸在4.91～30.64μg/m L范围内呈现良好的线性关系,平均加样回收率为99.58%,RSD为0.30%;并且利用该方法,测得达乌里胡枝子没食子酸含量为7.57 mg/g。     

纤维素分解菌系WSD-5常温产酶高温糖化小麦秸秆研究

将木质纤维素原料转化为燃料乙醇,受到全世界的期待。本研究探讨了利用复合菌系直接分解糖化的新途径。结果显示,该复合菌系优化的产酶活条件是转速为0r/min,底物添加量为3%,第6天酶活达到峰值,主要酶活为木聚糖酶活、CMC酶活和滤纸酶活,分别为15.18、3.43和0.79IU/mL。在第15天培养结束后,WSD-5对小麦秸秆中纤维素、半纤维素以及木质素的分解率分别达到71.3%、90.6%和51.7%。在酶活高峰期,在添加底物的同时升温至55℃保温糖化,结果发现还原糖的浓度显著提高。酶解小麦秸杆产生的总还原糖达到125mg/g以上,两次糖化总还原糖浓度为常温发酵时的15倍以上。当底物浓度为6%时的转化率最高,达到150.73mg/g。在糖化的过程中,产生了少量的甲酸、乙酸等可溶性小分子化合物,可以作为甲烷发酵的底物,具有一定的利用意义。试验扩大到3m3规模的中试试验。本研究为木质纤维素的低成本分解糖化提供了新的思路和途径。     

Rhodococcus ruber TCCC28001产丙烯腈水合酶过程调节及转化条件研究

对分离自土样中的产腈水合酶的菌株Rhodococcussp. TCCC28001进行16S rDNA序列测定及系统发育分析,可鉴定为Rhodococcus ruber.通过对其培养过程中pH的调控,尿素的加入时间的研究,使Rhodococcus ruber TCCC28001培养72 h后丙烯腈水合酶比活力达到4628 U/mL,比调控前提高了441%.考察了底物对腈水合酶活性及丙烯腈转化的影响,底物浓度≤20%对腈水合酶活性无抑制作用,丙烯腈转化率达100%,表明Rhodococcus ruber TCCC28001对底物有较强的耐受性.     

几种化学物质对稻草秸秆酶解糖化的影响

在木质纤维素酶解研究领域,高浓度还原糖的获得是实现其能源转化的基础。以稀硫酸预处理后的稻草秸秆为原料,初始酶解物料条件为20%(重量/体积),木聚糖酶220U.g-(1底物),纤维素酶6FPU.g-(1底物),果胶酶50U.g-(1底物),选取吐温80(Tween80)、MgSO4、FeSO4、聚乙二醇(PEG)和牛血清白蛋白(BSA)作为酶解体系添加物,分别考察了其添加量对还原糖浓度的影响。试验结果表明:在稻草秸秆酶解体系中,Tween80、MgSO4、FeSO4、PEG和BSA5种化学物质各自最佳添加量分别为0.05、0.0005、0.02、0.01g和0.0005g.g-(1底物);助催化作用强度依次为MgSO4>Tween80>BSA>FeSO4>PEG。添加MgSO40.0005g.g-(1底物),48h糖化后,还原糖浓度达到72.45g.L-1,比对照提高了7.98%。试验结果表明添加适量化学物质可以有效提高还原糖浓度。     

梅花鹿茸蛋白质酶法水解研究

目的研究梅花鹿茸蛋白质酶法水解条件。方法用胰酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶在相同条件下水解梅花鹿茸蛋白质,比较氨基氮生成率,选择适宜酶类。用所选定的酶在不同温度(T)、不同底物浓度(S)、不同酶与底物浓度比(E/S)和不同水解时间(t),水解梅花鹿茸蛋白质,以氨基氮生成率为指标确定最佳水解条件。结果胰蛋白酶为适宜酶,最佳水解条件为:温度45℃、pH8.0、底物浓度7.5%、酶与底物浓度比6000u/g、时间6h。结论胰蛋白酶是水解梅花鹿茸蛋白质较适宜的酶,在上述最佳条件下,水解梅花鹿茸蛋白质,氨基氮生成率达43.52%,氮溶解指数达93%,水解液中蛋白质绝大多数为低肽分子,更有利于机体消化吸收。     

宁夏水稻高效再生体系的建立

【目的】建立宁夏水稻高效转化再生系统,为利用基因工程技术定向改良宁夏水稻品种奠定基础。【方法】以8个宁夏主栽水稻品种成熟胚为外植体,利用组织培养法,研究了基因型、外源激素、头孢霉素(Cef)对外植体培养及再生的影响。【结果】在愈伤组织诱导培养基中添加ABA 2 mg/L及在分化培养基中添加6-BA 3 mg/L+NAA 0.5 mg/L,对愈伤组织诱导、分化及出苗有显著的促进作用;在此优化条件下,秋田小町再生情况最好,其诱导率和出苗率分别达100.00%和300%;优育27号次之,分别达95.00%和286.7%。此外,初步确定转化时Cef的质量浓度上限为500 mg/L。【结论】明确了外源激素、基因型及Cef对宁夏水稻成熟胚离体培养的影响效果,初步建立了宁夏水稻高效转化再生系统。     

鹿角盘蛋白质酶法水解作用研究

研究鹿角盘中蛋白质酶法水解条件。用胰酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶在相同条件下水解鹿角盘蛋白质,比较氨基氮生成率,选择适宜酶类。用所选定的酶在不同温度(T)、不同底物浓度比(E/S)和不同水解时间(t)水解鹿角盘蛋白质,以氨基氮生成率为指标确定最佳水解条件。胰蛋白酶为适宜酶,最佳水解条件为:温度45℃,pH 8.0,底物浓度7.5%,酶与底物浓度比6 000μ/g,时间6h。胰蛋白酶是水解鹿角盘蛋白质较适宜的酶,在上述最佳条件下,水解鹿角盘蛋白质,氨基氮生成率达42%,氮溶解指数达93%,水解液中蛋白质绝大多数为低肽分子,更有利于机体消化吸收。     

响应面法优化超声波辅助提取珙桐叶没食子酸的工艺条件研究

在单因素试验的基础上,选取提取温度、盐酸浓度、料液比3个主要因素,以没食子酸得率为响应值,对超声波辅助提取珙桐叶中没食子酸的工艺条件进行了优化。结果表明：没食子酸的最佳提取工艺为盐酸浓度2.0 mol/L、提取温度65.6℃、料液比40 m L/g、超声时间30 s,在此条件下没食子酸得率为10.26%。采用超声波辅助法提取珙桐叶中的没食子酸,提取时间短、得率高,具有广阔的应用前景。     

屎肠球菌HS3细胞转化法生物合成γ-氨基丁酸的研究

在发酵食品中分离了1株产γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)的乳酸菌HS3,用vitek32鉴定系统进行生化鉴定,鉴定HS3为屎肠球菌(Enterococcus faecium)。采用菌株HS3细胞转化L-谷氨酸制备γ-氨基丁酸,通过对转化反应温度、pH、金属离子、底物浓度和菌体浓度的影响进行考察,确立了最优转化条件:湿菌体25g/L,Zn2+5mmol/L、L-谷氨酸钠20g/L、L谷氨酸40g/L,在40℃、pH4.8,120r/min搅拌下反应40h,转化液GABA的浓度达38.02(±1.09)g/L,摩尔转化率为94.50(±2.71)%。     

枯草芽孢杆菌产脂肽的发酵条件优化

[目的]优化枯草芽孢杆菌产脂肽的发酵条件,提高枯草芽孢杆菌ATCC21332脂肽产量。[方法]利用较低成本的底物对枯草芽孢杆菌ATCC21332进行发酵优化。[结果]枯草芽孢杆菌在葡萄糖浓度9 g/L、豆粕浓度40 g/L、接种量5%、装液量120 mL(500 mL容量瓶)、温度30°C、转速150 r/min、发酵时间120 h时,脂肽产量最高,为4 885.1 mg/L,比添加活性炭载体的最高产量3 600.0 mg/L增加了35.70%。通过测定发酵过程中不同时间段发酵液中氨基酸含量,发现在81 h时谷氨酸含量急剧增大,添加谷氨酸可使脂肽产量达954.0 mg/L,相比不添加谷氨酸的培养基可使脂肽产量增加近6倍。[结论]该研究为工业化生产提供新思路。     

响应面法优化鼠李糖乳杆菌产共轭亚油酸的转化条件

以鼠李糖乳杆菌UV3-4为出发菌株,进行鼠李糖乳杆菌转化亚油酸生产共轭亚油酸转化条件的优化研究。通过单因素试验考察发酵温度、发酵时间、发酵pH和底物亚油酸(LA)添加量对CLA产量的影响,采用响应面法建立CLA产量与各影响因子之间的二次回归方程模型,获得最佳转化条件:发酵温度38℃,发酵时间23.4 h,pH 6.5,底物LA添加量为0.76 mg/m L,此条件下CLA的产量为37.28μg/m L。     

农杆菌介导黄瓜Tril基因转化及体系优化

采用农杆菌介导法将黄瓜表皮毛基因Tril转入黄瓜‘新泰密刺’品种,并研究了6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)和卡那霉素(Kan)分别对再生和转化苗筛选效果的影响。结果表明,在黄瓜‘新泰密刺’转化中,Kan抗性苗出芽率为9.67%,生根率为3.67%,转化株阳性率为0.33%;分化培养基中6-BA适宜浓度为0.5 mg/L,出芽率最高(76.33%),平均出芽天数最短(19.66 d);生根培养基中Kan浓度为60 mg/L时筛选效果最好。3种筛选方式的研究表明,仅在生根培养基中添加Kan(60 mg/L)筛选,其转化周期最短(45 d),阳性率最高(达4.0%)。     

应用α-淀粉酶水解城市生活垃圾的研究

摘要用α-淀粉酶水解城市生活垃圾,研究了水解过程中α-淀粉酶添加量、水解温度、水解时间和底物浓度对水解度的影响。结果表明,α-淀粉酶水解城市生活垃圾的适宜条件为：α-淀粉酶添加量80IU／g,水解时间60min,水解温度80℃,底物浓度10％．     

嘉宝果叶片多酚提取物的微生物转化及其对抗氧化活性的影响

对嘉宝果叶片多酚提取物进行微生物转化,以期获得一种提高其抗氧化能力的方法.以总抗氧化能力(total antioxidant capacity,简称T-AOC)提高率为指标,研究菌种类型、底物浓度和转化时间对微生物转化的影响,并用高效液相色谱法(HPLC)分析底物的变化情况.结果表明,嘉宝果叶片多酚提取物经过黑曲霉转化后,T-AOC提高最明显,底物浓度、转化时间对转化效果的影响显著,最佳底物浓度为1.0 mg/mL,最佳转化时间为2 d.在最佳转化条件下,嘉宝果叶片多酚提取物的T-AOC由0.506 mmol/L提高至0.818 mmol/L,而多酚含量由0.686 mg/mL下降至0.463 mg/mL.HPLC分析发现,黑曲霉转化嘉宝果叶片多酚提取物后产生了新的强极性物质.     

复合蛋白酶和风味蛋白酶双酶水解羊骨粉的研究

为了进一步提高水解程度,以复合蛋白酶和风味蛋白酶双酶水解羊骨粉,比较同步水解和顺序水解效果,确定较优水解方式和条件。结果表明两种酶的顺序水解效果不及同步水解。双酶同步水解整体上优于单酶水解,且底物浓度9%、pH7.5时各指标均高于底物浓度12%、pH6时的水解效果。本研究确定的这两种酶水解羊骨粉的方式为同步水解,条件为:骨粉添加量9%、复合蛋白酶添加量5%(E/S)、风味蛋白酶添加量为4.25%(E/S)、调节起始pH值为7.5,50℃水解315min,此时的水解度为29.21%、氨基态氮含量为27.29%、多肽生成量为87.13mg·g-1、短肽得率为57.24%,其中多肽生成量和短肽得率极显著地高于单酶水解的67.75mg·g-1和43.39%(p0.01)。     

添加外源儿茶素制备高茶黄素红茶的工艺优化

为高茶黄素红茶的开发提供理论基础，以福鼎大白茶为材料，以红茶产品中茶黄素的生成量为考察指标，在红茶加工过程中，通过添加儿茶素提取物为底物，研究儿茶素提取物浓度及添加量、发酵温度、发酵时间等单因子对茶黄素生成量影响的基础上，设计正交试验，优化筛选合成高茶黄素红茶的工艺参数。结果表明：高茶黄素红茶的最佳工艺参数为儿茶素提取物的浓度50 %，添加量2.5 % (重量比)，发酵时间2 h，发酵温度24 ℃，该条件下的茶黄素生成量为6.75 mg/g。     

海藻酸钠法固定化酪氨酸酶的研究

为了确定海藻酸钠法固定化酪氨酸酶的最适条件,以海藻酸钠为栽体,研究了海藻酸钠浓度、CaCl2浓度、固定化时间和固定化酶的最适pH、最适温度、最适底物浓度及反复利用的稳定性.结果表明,最适固定化条件如下:3%海藻酸钠、2%CaCl2、固定化时间2 h.固定化酶的最适pH 7.0、最适温度30℃、最适底物浓度0.01 mol/L,反应进行5次后一半酶活损失.研究证明海藻酸钠法固定化酪氨酸酶转化邻苯二酚效果好,实用潜力大.     

溶氧浓度对微生物谷氨酰胺转胺酶发酵的影响

研究了不同溶氧(DO)浓度对微生物谷氨酰胺转胺酶(M TG)发酵的影响。结果表明,当溶氧浓度为2.88 m g/L时,M TG活性和菌体干重最高,分别达到4.32 U/mL和23.5 g/L,底物利用率为81.6%;当溶氧浓度继续升高时,发酵后期M TG活性下降显著。为此采用了分阶段溶氧控制策略,即在0~34 h控制溶氧浓度为2.88m g/L,34 h后控制溶氧浓度为0.96 m g/L,最终M TG活性达到4.72 U/mL,菌体干重达到27.32 g/L,较恒定2.88 m g/L溶氧浓度时分别提高了9.26%和16.26%,其底物利用率达83.2%。     

表达KsdD重组大肠杆菌的构建及转化工艺优化

3-甾酮-△1-脱氢酶(KsdD)是催化甾体化合物C1,2位脱氢反应的关键酶,在甾体药物的生产中起着重要作用。本研究首先通过对红球菌、分枝杆菌及简单节杆菌来源的KsdD蛋白进行氨基酸序列分析,并进一步通过酶活比较及底物催化能力的验证,最终筛选获得具有较高C1,2位脱氢活力的脱氢酶KsdDR2。研究了过表达KsdDR2蛋白重组大肠杆菌的转化条件对底物雄甾-4-烯-3,17-二酮(AD)转化的影响,结果表明,在30℃转化条件下,当AD:羟丙基-β-环糊精(HP-β-CD)的摩尔比为1:1.5时,可使底物AD的转化率达99%以上。本研究为利用工程菌株高效生产C1,2位脱氢甾体化合物的研究奠定了理论基础。