小春作物上冰核细菌种群动态研究

 采用平板稀释分离计数法,在小春作物蚕豆、小麦和油菜生长期间,连续两年定点定期对冰核细菌种群数量动态变化进行检测。结果表明,在云南省昆明地区自然条件下,冰核细菌的数量最大密度出现在2月中旬至3月中旬,可达9.2×10⁹ CFU／g。     

冰核活性细菌研究进展及其在防霜技术中的应用

冰核细菌是诱发和加重植物霜冻的重要因子，通过减少和控制冰核细菌，在霜冻防治研究方面取得了一定效果．细菌冰核是一类蛋白质，称冰蛋白，由细菌冰核基因编码，据报道已有11种冰核细菌的冰核基因被克隆并在大肠杆菌中得到表达．综述了冰核细菌生物学及分子生物学特性，以及冰核细菌在防霜技术中的应用，阐述了冰核细菌的种类、影响冰核活性的成冰因素及冰核细菌和霜冻害的关系．药剂和生防菌能够防除植物上的冰核细菌．减轻或控制霜冻危害，是防御植物霜冻的一条新途径．     

我国生物冰核研究进展

我国从1986年起开展了冰核活性细菌的研究,已取得一定的进展。查明了我国冰核细菌种类、分布规律、冰核活性强弱程度,明确了影响冰核细菌冰核活性的某些因素和提出了菌种保存方法;验证了冰核细菌是诱发和加重植物霜冻的重要因素,研究揭示冰核细菌、低温强度和植物霜冻害三者的关系,并进行了药剂和生物防霜新技术研究;利用冰核细菌研制成功了冰蛋白降水催化剂,开展了促冻杀虫、克隆了编码冰蛋白的冰核活性基因及有关冰核细菌分子生物学应用技术研究;首次报道了大麦黄矮病毒冰核活性,对揭示未知生物冰核种类有一定意义。     

遵义市冰核细菌分离鉴定及拮抗细菌筛选

为了解遵义市霜冻植物上冰核细菌的种类以及筛选对冰核细菌有拮抗作用的细菌,采用小液滴冻结法鉴定冰核细菌的冰核活性,并用双层平板法筛选冰核细菌的拮抗细菌;采用形态学特征、生理生化鉴定以及16S rDNA序列对比分析等方法确定冰核细菌和拮抗细菌种类。结果显示,从遵义市采集到35种植物冻害标本,共分离到4株冰核细菌Z-A、Z-B、Z-C、Z-QCH;从遵义市采集到23种土样,共分离出3株拮抗细菌XH、XM、XL。经鉴定,Z-A、Z-B是菠萝泛菌(Pantoea ananatis),Z-C是成团泛菌(Pantoea agglomerans),Z-QCH是绿黄假单胞(Pseudomonas viridiflava)。拮抗细菌XH、XM是解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens),XL是甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus)。初步了解了遵义市冰核细菌的种类,为遵义市霜冻植物生物防治奠定了一定基础。     

云南诱发霜冻害冰核活性细菌的鉴定

 1990年冬,从云南省宾川、大理、昆明、陆良等地采集受霜冻危害小麦、蚕豆、蕃茄上的33个标样,分离出12个冰核活性的细菌菌株.鉴定结果是Erwinia herbicola waranaanas及Pseudomonas syrindae.首次证明云南有冰核活性细菌.     

冰核细菌的研究、应用现状和前景

冰核细菌是诱发和加重植物霜冻的重要因子,通过减少和控制冰核细菌,在进行霜冻防治研究方面,取得了一定效果.目前世界上已发现4个属23个种或变种的细菌具有成冰活性.细菌冰核是一类蛋白质,称冰蛋白,由细菌冰核基因编码,报道已有11种冰核细菌的冰核基因被克隆并在大肠杆菌中得到表达.综述了冰核细菌生物学及分子生物学特性,以及冰核细菌在霜冻防除、人工降雨、食品冷藏保鲜、高敏检测和促冻杀虫等方面的研究进展和应用前景.     

冰核活性真菌的分离与鉴定

 1997～1998年,从蚕豆等植物霜冻害标本中分离到了12株具有冰核活性的真菌,在-5.5℃下具有较强的冰核活性.室温下保存1年转入冰箱中保存半年的菌丝体培养液仍保持原有的强烈成冰核活性,表明其成冰核活性物质与冰核活性细菌有所不同.经鉴定,这12株冰核活性真菌均为燕麦镰刀菌(Fusarium avenaceum Sac.),这是国内有关冰核活性真菌研究的首次报道.     

诱发枇杷霜冻害的冰核细菌拮抗菌分离与筛选

[目的]筛选出具有防除枇杷INA细菌的拮抗菌.[方法]从枇杷根际土壤中分离冰核细菌拮抗菌,对其进行抑菌圈、杀菌能力、破坏冰核活性蛋白能力测定.[结果]从不同海拔地区的根际土壤中共分离得到128个菌株,其中有拮抗效果的有55株,平皿拮抗效果强的有15株,再经拮抗系数比较得到9株强拮抗菌菌株,最后筛选出l株杀菌率达98％、破坏冰核蛋白能力达100％的拮抗菌BL-36.[结论] BL-36既有杀菌效果又有破坏冰核蛋白能力,是具有较好利用前景的防除诱发枇杷霜冻害冰核细菌、减轻枇杷霜冻害的生物防治材料.     

杏树上冰核细菌种类及其冰核活性与杏花霜冻关系的研究

 近年从我国河北省仁用杏树上采集了 60个标样 ,从中分离到 1 9株冰核细菌菌株 ,经细菌学鉴定确认是 2个属中的 2个种 :Pseudomonas syringaepv.syringae Van Hall1 92 0 ,有 9株 ,占 47.3% ;Erwinia uredovora (Pon et al.) Dye 1 963,有 1 0株 ,占 52 .6% ,前者冰核活性高于后者。按 - 3℃产生一个冰核所需细菌数量差异来划分冰核活性等级 ,测定结果表明 ,强菌株有 4株 ,占 2 1 .1 % ;中等菌株有 3株 ,占 1 5.8% ;弱菌株有 1 2株 ,占 63.1 % ;总体冰核活性属于中等。研究 INA细菌与花瓣霜冻关系结果表明 ,在低温胁迫下 ,INA细菌能大幅度提高花瓣相对电导率值 ,增大细胞原生质膜渗透性 ,提高过冷却点 2～ 3℃ ,能在 - 3～ - 4℃引起花瓣结冰而发生严重霜冻 ,比未接 INA细菌的对照提高结冰温度 2℃左右。该结果证明了 INA细菌是诱发和加重杏树花期霜冻的重要因素     

稻瘟病菌致病突变株的分离

 利用4个分属宗亲群4,7,17 和44的菌株连续接种在C039的单基因近等基因系和基因累加系上, 以获得突变抗病基因新菌株。经13轮接种循环, 共分离到9个新菌株。其中8个针对C101LAC(Pi－1) 突变 , 另1个针对C101PKT (Pi－4a)和F128 (Pi－ta²) 的双位点突变。4个原始菌株, P06－6, 9248－6, 9239－4和101－7－2的突变频率分别为: 0, 2.82×10^－5, 2.05×10^－5 和9.09×10^－5。菌株针对不同抗病基因的突变频率不同,由Av－1变到Av－1^＋和由Avir－4a(t)突变到Av－4a^＋的频率分别为7.51×10^－5和6.14×10^－5。没有针对Pi－2突变体出现。     

利用转座子Tn5诱变冰核细菌获得无冰核活性菌株

 以云南省冰核细菌的优势种类丁香假单胞菌Pseudomonas syringae和菠萝泛菌Pantoea ananas为重组基因工程菌的受体菌,采用Tn5转座子诱变技术,以大肠杆菌Escherichia coli S17／pZJ25∶∶Tn5作为转座子诱变的供体菌,使Tn5插入并整合到冰核细菌基因组中,使冰核基因的线性连续性被破坏,失去冰核活性。大量筛选接合子,获得157株丧失冰核活性的菌株。     

雷公藤甲素SD大鼠睾丸毒性体外试验研究

 探讨雷公藤甲素（Triptolide, TL）对体外原代培养SD大鼠睾丸支持细胞（sertoli cell）和生精细胞（spermatogenic cells）增殖的影响及其广谱钙粘附蛋白（Pan-cadherin）的表达。MTT法检测雷公藤甲素8种不同浓度（0,0.1,1,10,1.0×10²,1.0×10³,1.0×10⁴,1.0×10⁵ μg／L）对SD大鼠睾丸原代培养细胞增殖的影响;免疫细胞化学方法探讨在雷公藤甲素对单纯培养支持细胞的最小有毒浓度（0.1,1,10,1.0×10² μg／L）水平,培养细胞 pan -cadherin 的表达。结果表明：雷公藤甲素浓度≥10 μg／L时对混合培养细胞（主要为生精细胞）,≥1.0×10³ μg/L时对单纯培养支持细胞的增殖有明显抑制作用,均呈剂量依赖性。细胞半数抑制浓度（IC₅₀）分别为1.22 mg／L和28.15 mg／L。与溶剂对照组相比混合培养细胞在雷公藤甲素低浓度时（0.1和1 μg／L ）表达上调。雷公藤甲素低浓度即可抑制生精细胞增殖,而高浓度才能抑制支持细胞增殖,其细胞毒耐受性二者差异很大。睾丸毒性产生的原因可能与生精细胞的pan-cadherin表达上调有关。     

INA细菌对杂柑‘不知火’果实膜脂过氧化和保护酶活性的影响

以杂柑‘不知火’果实为材料,人工接种INA细菌,在模拟自然降温条件下,研究INA细菌对果实霜冻害的影响。结果表明:接种INA细菌能提高果皮相对电导率,破坏果皮膜保护酶SOD、POD、CAT的活性,使细胞积累大量自由基,并增强膜脂过氧化作用,加剧MDA含量的积累,使果实在较高低温下受冻。因此,INA细菌可诱发和加剧‘不知火’果实霜冻害。     

云南植物上冰核细菌的种类与分布

 1990～1997年,从云南省24个县市的54种植物上分离到了197株冰核细菌,并进行了鉴定.其中菠萝欧文氏菌83株,占42.1%,草生欧文氏菌9株,占4.6%,流黑欧文氏菌3株,占1.5%,边缘假单胞菌10株,占5.0%,丁香假单胞菌71株,占36.0%,菜豆荚斑假单胞菌19株,占9.6%,草莓黄单胞菌1株,占0.5%,野油菜黄单胞菌1株,占0.5%.冰核细菌的种群和生态学在云南省植物上呈丰富的多样性.云南省植物上冰核活性细菌的优势种类是菠萝欧文氏菌,其次是丁香假单胞菌类.     

仔猪源罗伊氏乳酸杆菌生物学特性的研究

 研究了罗伊氏乳酸杆菌的生物学特性包括生长曲线、耐热存活率、耐酸存活率、贮藏存活率以及发酵参数。采用均匀设计的试验设计对影响乳酸杆菌发酵较大的6个因素如碳源、氮源和时间进行优化。试验结果表明,罗伊氏乳酸杆菌的浓度在开始时有所下降,经过2 h之后从1.0×10³数量级迅速上升,到第22 h接近1.0×10¹⁰数量级,到40 h细菌的数量级开始缓慢下降。75 ℃处理15 min之后存活率为31.3%,经过1个月贮藏存活率为85.5%,pH 2.0处理6 h的存活率为72%. 优化的发酵参数为:时间20 h;葡萄糖10 g/L;蔗糖60 g/L;胰蛋白胨30 g/L;酵母浸粉5 g/L;柠檬酸铵12 g/L. 试验表明了罗伊氏乳酸杆菌具有良好的抗逆性,生长繁殖迅速,可以用作益生菌生产菌种。     

山东省植物上冰核活性细菌种类与分布研究

从山东省25种植物上分离到60株冰核活性细菌，鉴定结果为：假单胞菌属有37株，其中非荧光假单胞菌10株，占16.7%；丁香假单胞菌11株，占18.3%；荧光假单胞菌2株，占3.3%；菜豆荚斑假单胞菌14株，占23.3%。欧文氏菌属有23株，其中菠萝欧文氏菌21株，占355；草生欧文氏菌2株，占3.3%。INA细菌的种类和分布受季节、环境、地域和植物种类等多种因素的影响，这是山东省关于冰核细菌研究的首次报道。     

冰核活性细菌的分子生物学及防霜技术的研究进展

 从冰核活性细菌的分子生物学基础上,研究冰核细菌的基因遗传背景。并提出了冰核细菌的研究方法,防霜新技术的开发应用及冰核细菌在不同领域的应用等方面阐述冰核活性细菌的研究进展。     

Species of Ice Nucleation Active Bacteria on the Apricot and the Relationship Between Their Activity and Flower Frost

During 1996- 1997, sixty samples were collected from apricot in Hebei Province, from which nineteen ice nucleation active bacterial strains were isolated. Nine stains were identified as Pseudomonas syringae pv. syringae by bacteriological determination, while the others were Erwinia uredovora. Assay of ice nucleation activity (INA) showed the activity of the Pseudomonas strains was higher than that of the Erwinia.According to the number of bacterial cells required to produce one ice nucleus active at - 3℃, four stains was classified as strong ones, three as medium-strong, the remainder as weak. In general, the INA of these strains were regarded as medium-strong. Under stress of Iow temperatures, treatment of INA bacteria can greatly raised relative electric conductivity of petals and permeability of cell membrane. The treated petals showed symptoms of serious frost at - 3 - - 4℃ and had supercooling points of 2 - 3℃ higher than controls. Our results demon strated that INA bacteria are one major factor to incite frost damage to apricot flowers. We may reduce frost injury to apricot during flowering phage through control of INA bacteria.