樱桃谷肉鸭H5N1亚型禽流感(Re-6株)灭活疫苗母源抗体消长规律及免疫程序研究

选取1日龄健康无免疫的樱桃谷肉鸭480羽,随机分成A、B、C、D 4组,每组120羽。B、C和D组在10日龄分别免疫H5N1亚型禽流感(Re-6株)灭活疫苗0.5、0.8和1.0 m L/羽,A组为非免疫对照组。用HI方法检测其母源抗体和免疫抗体,根据母源抗体和免疫抗体消长规律,探讨樱桃谷鸭H5N1亚型禽流感(Re-6株)灭活疫苗的合理免疫程序。结果表明,樱桃谷鸭母源抗体效价和抗体合格率在1日龄最高,分别为6.6 log2和96.7%,14日龄下降至3.87 log2和56.7%,21日龄之后几乎没有保护力;3个试验组免疫抗体水平和抗体合格率在统计学上差异不显著(P0.05),建议免疫程序为:10日龄免疫,免疫剂量0.8 m L/羽。     

禽流感DNA疫苗(H5亚型Re-8株)对黄羽肉鸡免疫程序的优化

[目的]本试验旨在探索禽流感DNA疫苗(H5亚型Re-8株)对黄羽肉鸡的免疫效果及合理的免疫程序。[方法]选取1日龄健康未免疫禽流感疫苗的黄羽肉鸡210羽,随机分为7组,每组30羽,其中A、B、C 3组为单次免疫试验组,分别于1、10和14日龄免疫禽流感DNA疫苗,每羽30μg; D、E、F组为加强免疫试验组,D、E 2组分别于14和10日龄免疫禽流感DNA疫苗,每羽30μg, 3周后D组加强免疫同种疫苗,每羽30μg, E组加强免疫H5禽流感D7+rD8二价灭活疫苗,每羽0.3 mL;F组为灭活苗对照组,于10和31日龄分别免疫0.3 mL H5禽流感D7+rD8二价灭活疫苗;G组为空白对照组。各组受试鸡于免疫前和免疫后每周(后期每2周)采集血液并测定血清HI效价,研究受试鸡母源抗体和免疫期抗体的消长规律。[结果]黄羽肉鸡母源抗体HI效价至14日龄降至3.5,抗体合格率低于40%。单次免疫禽流感DNA疫苗时,14和10日龄免后1～2周HI抗体开始升高,1日龄免疫后3周抗体持续下降。禽流感DNA疫苗或二价灭活疫苗加强免疫后1周HI抗体效价均可达到5.0。[结论]黄羽肉鸡于10和14日龄免疫禽流感DNA疫苗,每羽30μg,免疫后3周,每羽0.3 mL H5禽流感D7+rD8二价灭活疫苗或每羽30μg禽流感DNA疫苗加强免疫后,可为鸡群提供长期的免疫保护。     

重组禽流感病毒H5亚型三价灭活疫苗(Re-6株+Re-7株+Re-8株)免疫SPF鸭免疫持续期试验

试验对重组禽流感病毒H5亚型三价灭活疫苗(Re-6株+Re-7株+Re-8株)免疫SPF鸭后的免疫持续期进行研究。选用14日龄SPF鸭20只,其中10只腿部肌肉免疫灭活疫苗0.5 mL·只~(-1),另10只不接种作为对照组。结果表明,免疫后14 d可以产生免疫力,Re-6株的抗体效价平均值为6.0 log2,Re-7株的抗体效价平均值为6.0 log2,Re-8株的抗体效价平均增值为6.7 log2。免疫后35 d产生的HI抗体效价平均值达到高峰,Re-6株的抗体效价平均值为9.3 log2,Re-7株的抗体效价平均值为9.1 log2,Re-8株的抗体效价平增值为9.3 log2。免疫后120 d,Re-6株的抗体效价平均值为7.0 log2,Re-7株的抗体效价平均增值为7.1 log2,Re-8株的抗体效价平均值为7.5 log2。根据此数据分析,首次免疫的免疫保护期约为120 d。     

重组禽流感病毒(H5+H7)二价灭活疫苗免疫SPF鸭免疫持续期试验

试验对重组禽流感病毒(H5+H7)二价灭活疫苗免疫SPF鸭后的免疫持续期进行了研究。选用14日龄SPF鸭20只,其中10只鸭的腿部肌肉接种免疫灭活疫苗,剂量为0.5 m L·只-1,另10只不接种的鸭作为对照组。结果表明,免疫后14 d可以产生较高的免疫力,H5N1 Re-8株的抗体效价平均增值为5.6 log2,H7N9 H7-Re-1株的抗体效价平均增值为6.6 log2。到35 d产生的HI抗体效价平均值达到高峰,H5N1 Re-8株的抗体效价平均增值为8.6 log2,H7N9 H7-Re-1株的抗体效价平均增值为9.5 log2。第120天H5N1 Re-8株抗体效价平均值为4 log2,H7N9 H7-Re-1株的抗体效价平均值均为5 log2,为抗体的保护临界值。根据此数据分析,一次免疫的免疫保护期约为120 d。     

不同疫苗接种对鸡免疫学功能的影响试验

为验证不同疫苗免疫对鸡免疫学功能的影响,采用两批市售的鸡新城疫-传染性支气管炎-禽流感（H9亚型）三联灭活疫苗注射14日龄鸡,同时按0.3 mL·只-1注射重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗（细胞源,Re-6株+Re-8株）,并同时设单独注射重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗（细胞源,Re-6株+Re-8株）组和健康对照组,每组鸡各10只,分别于疫苗注射后14、21和28 d,对各组鸡采血,分离血清,进行H5亚型禽流感HI抗体效价测定。结果表明：注射后14、21和28 d,第1组（新支流三联180010900批）组鸡血清中H5亚型禽流感HI抗体效价分别为1:68.6、1:207.9和1:415.6,第2组（新支流三联180020900批）组鸡血清中H5亚型禽流感HI抗体效价分别为1:68.6、1:207.9和1:445.7;第三组单独注射重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗（细胞源,Re-6株+Re-8株）组鸡血清中H5亚型禽流感抗体效价分别为1:64.0、1:194.0和1:388.0,健康对照组鸡血清中H5亚型禽流感HI抗体效价均不高于1:24.3。说明接种2种疫苗试验鸡血清H5亚型...     

山东省2011年春季中标禽流感灭活疫苗质量检测及抗体消长规律分析

为了摸清山东省高致病性禽流感疫苗的质量情况,对2011年春季山东省3个中标厂家生产的重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗(H5N1,Re-5株+Re-4株)进行了质量检验和疫苗的抗体消长规律的跟踪。试验结果显示:除L厂家的2011010批次、G厂家的2011012批次有菌外,3个厂家的其余33批次灭活疫苗的物理性状、灭活检验和无菌检验均全部合格。免疫SPF鸡3周后,除Q厂家2011005批次疫苗外,其余34批疫苗HI抗体效价均≥6.0log2,产品达到质量标准要求。抗体消长规律实验表明,3个厂家的疫苗免疫SPF鸡4周即可达到高峰值,Re-4 HI抗体水平≥9.5log2,Re-5 HI抗体水平≥8.0log2,至25周时,仍维持在高抗体水平:Re-4 HI抗体水平≥9.0log2,Re-5 HI抗体水平≥7.8log2。从总的趋势看,L厂家的疫苗免疫抗体效价好于Q厂家和G厂家。     

悬浮MDCK细胞的驯化与H5亚型禽流感病毒的培养

【目的】为评估细胞源重组禽流感病毒H5亚型灭活疫苗的有效性提供数据支持。【方法】选取一株来源清楚的贴壁MDCK细胞,通过逐步降低培养基中血清含量及不断调整无血清培养基配方,将其驯化为悬浮MDCK细胞,并以此为基质增殖重组禽流感病毒H5N1 Re-6株、H5N1 Re-7株和H5N1 Re-8株;比较不同毒株在贴壁和悬浮MDCK细胞中增殖的差异。分别将经悬浮MDCK细胞增殖的病毒与经SPF鸡胚增殖的病毒制备成重组禽流感病毒(H5亚型)三价灭活疫苗,免疫商品蛋鸡和商品鸭,通过血清学方法比较细胞源与鸡胚源禽流感灭活疫苗的免疫效果。海兰褐商品蛋鸡:6 050只,分为3组,2组为免疫组,每组3 000只,28日龄免疫0.5 mL/只,80日龄免疫0.5 mL/只;不免疫对照组1组,50只,同等条件下隔离饲养。分别于蛋鸡日龄49、110、210 d(即首免后21 d、82 d、6个月)时采血分离血清,测定禽流感H5亚型Re-6株、Re-7株、Re-8株的HI抗体效价,监测抗体消长。长白飞鸭:220只,分为3组,2组为免疫组,每组100只,10日龄免疫0.5 mL/只,24日龄免疫1.0 mL/只,不免疫对照组20只,同等条件下隔离饲养。分别于鸭日龄24、38、52 d(即首免后14、28、42 d)时采血分离血清,测定禽流感H5亚型Re-6株、Re-7株、Re-8株的HI抗体效价,监测抗体消长。【结果】获得一株可在无血清培养基中悬浮生长的MDCK细胞,摇瓶、5L生物反应器中的培养数据及细胞状态显示,该细胞株适合放大生产。此悬浮MDCK细胞培养48 h细胞密度可由1.5×10~6 cells/mL左右增殖到1.0×10~7 cells/mL左右,状态良好、活率高、单个悬浮于培养基中。以此悬浮MDCK细胞为基质增殖重组禽流感病毒,H5N1 Re-6株的HA效价达1﹕512,TCID_(50) 10~(7.67)/mL,EID_(50) 10~(7.83)/0.1 mL;H5N1 Re-7株的HA效价达1﹕256,TCID_(50)达10~(7.33)/mL,EID_(50)10~(7.17)/0.1 mL;H5N1 Re-8株的HA效价达1﹕1024,TCID_(50) 10~(8.5)/mL,EID_(50) 10~(8.38)/0.1 mL,与经贴壁MDCK细胞增殖的病毒毒价相当。细胞源三价灭活疫苗免疫海兰褐商品蛋鸡,首免后21 d时,禽流感H5亚型Re-6株、Re-7株、Re-8株HI抗体效价几何平均值(GMT)分别为1﹕446、1﹕111、1﹕416,二免后30 d时三者HI抗体效价几何平均值(GMT)分别为1﹕588、1﹕362、1﹕776,6个月时分别为1﹕239、1﹕128、1﹕223,维持了较高的抗体水平;免疫长白飞鸭,首免后14 d时,禽流感H5亚型Re-6株、Re-7株、Re-8株HI抗体效价几何平均值(GMT)分别为1﹕30、1﹕17、1﹕64,28 d时三者HI抗体效价几何平均值(GMT)分别为1﹕194、1﹕91、1﹕137,42 d时分别为1﹕416、1﹕128、1﹕239;以上两组的试验结果与鸡胚源重组禽流感灭活疫苗免疫后诱导产生的HI抗体效价相当。【结论】经驯化获得的可在无血清培养基中悬浮生长的MDCK细胞株,其增殖重组禽流感病毒H5N1 Re-6株、H5N1 Re-7株、H5N1 Re-8株能力强,且病毒被制备成灭活疫苗免疫海兰褐商品蛋鸡和长白飞鸭可产生较高水平的抗体。为大规模工业化生产禽流感疫苗提供技术支持。     

H5亚型禽流感灭活疫苗的研制

以H5N1亚型禽流感病毒接种鸡胚，收取鸡胚液为抗原研制了禽流感灭活疫苗，并对制苗抗原以及疫苗的物理性状、安全性、免疫效力、免疫剂量和保护期等进行了试验。结果表明，获得了较高效价的制苗抗原．灭活前后HA分别为2^10.0-11.0和2^9.0-10.0。试制疫苗物理性状符合要求，安全性良好。试验鸡在免疫14d后血清抗体达到2^7.5，210d血清HI抗体仍维持在2^5.0左右；免疫后18d使用高致病性H5亚型禽流感病毒攻毒，获得100％的保护。分别使用0．1，0．3和0．5mL免疫鸡，发现0．3～0．5mL剂量组免疫后血清抗体达到2^7.4-8.0。疫苗在2～8℃保存540d，疫苗物理性状没有改变，免疫后血清HI抗体可以达到2^7.5。这提示研制的疫苗可以有效控制禽流感H5亚型的流行。     

禽流感H5、H9亚型灭活油乳剂疫苗的免疫效果评价

对采自成都市牧星蛋鸡场免疫鸡群的2943份血清样品进行了H5、H9亚型禽流感抗体免疫接种试验。结果表明,在2943份血清样品中,tt5、H9亚型HI效价≥410g2的样品数量分别为2455、2738份,免疫合格率分别为83-4％、93．1％,免疫后抗体高峰维持7log2以上的时间达63d以上。超过蛋鸡场免疫合格标准,可...     

高致病性禽流感抗体水平监测及免疫程序制定

采用血凝抑制试验对贵阳市家禽高致病性禽流感免疫状况及试验鸡母源抗体和首免后免疫抗体的消长动态进行了检测，结果表明，贵阳市高致病性禽流感抗体几何平均效价为3．38210g2；试验鸡母源抗体群体几何平均效价及免疫保护率11、16日龄分别为2^4.3、2^3.41及45％、20％；免疫抗体群体几何平均效价及免疫保护率51、58日龄分别为2^5、2^2.25及66．7％、0％。该地区应及时加强免疫，首免时间和二免时间分别定为15、51日龄。     

水禽专用高致病性禽流感疫苗临床免疫效果初探

本研究通过对试验组水禽(鸭)免疫禽流感灭活疫苗(H_5N_2亚型D7株)、对照组免疫重组禽流感病毒(H_5N_1亚型)细胞灭活疫苗(Re-6株),在免疫前及免疫后15d、21d、36d、51d和66d分别进行免疫抗体监测及病毒核酸监测,结果显示:免疫后各试验组动物的抗体水平均显著性高于对照组(P0.05),且试验组之间差异不显著(P0.05)。试验组和对照组的免疫抗体合格率均为100%,达到合格标准。通过比较分析,禽流感灭活疫苗(H_5N_2亚型D7株)对水禽的免疫效果要优于重组禽流感病毒(H_5N_1亚型)细胞灭活疫苗(Re-6株)。     

不同类型H5亚型禽流感疫苗的免疫保护效力比较研究

为比较以我国首个H5亚型禽流感病毒分离株A/Goose/Guangdong/1/1996(H5N1)\[GS/GD/96\]为基础构建的新型重组禽流感病毒灭活疫苗（H5N1亚型,Re\|1株）、禽流感重组鸡痘病毒载体活疫苗（H5亚型）、禽流感、新城疫重组二联活疫苗（rLH5\|1株）以及禽流感DNA疫苗（H5亚型,pH5\|GD）的免疫保护效力。分别将四种禽流感疫苗以2.8 μg HA/0.3 mL（肌肉注射）、103PFU/100 μL（刺种）、106EID50/100 μL（滴鼻、点眼）、15 μg/200 μL（肌肉注射）等不同剂量和方式免疫3周龄SPF鸡,首次免疫3周后再加强免疫一次,加强免疫2周后用106EID50的高致病力禽流感病毒（HPAIV） GS/GD/96鼻腔途径进行攻击,观察发病与死亡情况。分别于攻毒后第3 d、第5 d、第7 d采集喉头及泄殖腔拭子进行病毒分离、滴定检测排毒情况,同时检测免疫及攻毒后血清HI抗体的动态变化。所有疫苗均可对免疫鸡形成100%完全保护（不发病、不致死、不排毒）;在病毒攻击前,灭活疫苗（H5N1亚型,Re\|1株）、禽流感重组鸡痘病毒载体活疫苗（H5亚型）、禽流感、新城疫重组二联活疫苗（rLH5\|1株）以及禽流感DNA疫苗（H5亚型,pH5\|GD）所诱导的HI抗体平均水平分别为875log2、6.5log2、5.13log2和7.88log2。新型的基因工程疫苗具有良好的免疫保护性,已经或将在H5亚型HPAIV的防治实践中起到有益的补充作用。     

高致病性禽流感免疫程序

一、种鸡、蛋鸡免疫雏鸡7～14日龄时,用H5N1亚型禽流感灭活疫苗进行初免,3～4周可再进行1次加强免疫。开产前再用H5N1亚型禽流感灭活疫苗进行强化免疫,以后根据免疫抗体检测结果,每隔4～6个月用H5N1亚型禽流感灭活苗免疫1次。二、商品代肉鸡免疫(推荐程序)7～14日龄时,用H5N1亚型禽流感灭活疫苗免疫1次。三、种鸭、蛋鸭、种鹅、蛋鹅免疫雏鸭或雏鹅14～21日龄时,用H5N1亚型禽流感灭活疫苗进行初免。间隔3～4周,再用H5N1亚型禽流感灭活疫苗进行1次加强免疫。以后根据     

蛋鸡禽流感（H5）免疫效果的跟踪调查

自2004年以来,邹城市对禽流感（H5）实行强制免疫,并且免疫率100%,使用疫苗是重组禽流感病毒H5亚型灭活疫苗（H5N1,Re-5＋Re-4）。为了追踪H5亚型禽流感疫苗的免疫效果及其免疫抗体（HI）消长规律,探索本辖区H5亚型禽流感灭活疫苗（H5N1,Re-5＋Re-4）的免疫程序,     

禽流感免疫抗体消长规律研究

用禽流感(AI)灭活疫苗免疫120日龄蛋鸡后,分别于30,50,70,90,110,130d检测AI-HI抗体。检测结果表明,30dAI抗体为5.0log2;70d为7.11log2,抗体效价达到最高值;到90d,AI抗体效价为6.12log2,开始下降;110dAI抗体效价降至4.65log2;120dAI抗体效价已降到临界值以下,为3.2log2。AI灭活疫苗免疫期在120d以内。     

中药复方多糖对不同MHC B-LβⅡ基因型蛋鸡禽流感抗体效价的影响

【目的】研究肌注中药复方多糖对不同MHC B-LβⅡ基因型蛋鸡血清中禽流感抗体效价的影响。【方法】试验采用PCR-SSCP方法将500羽京红1号蛋鸡按不同基因型分组,再将各基因型组分成高、中、低剂量中药复方多糖组和空白对照组。各组试验鸡分别于8日龄肌注50、25和12.5 mg/mL中药复方多糖和生理盐水,0.2 mL/只,连续7 d,于27、35、42、49日龄从各组随机抽取5只试验鸡,翅下静脉采血并分离血清,用微量血凝抑制试验(HI)检测血清中H5与H9亚型禽流感抗体效价。【结果】免疫前,各剂量中药复方多糖组H5N1 Re-6和H9N2母源抗体平均效价高于对照组,且高剂量AA和BC基因型鸡血清中H5N1母源抗体效价显著高于对照组(P0.05);免疫后7 d,AA基因型鸡高、中、低剂量组的H5亚型禽流感抗体效价均显著高于对照组(P0.05),BC基因型鸡高剂量组H5亚型禽流感抗体效价显著高于对照组(P0.05),BC基因型鸡高、中、低剂量组H9亚型禽流感抗体效价显著高于对照组(P0.05);免疫后14 d,AA基因型鸡高、中剂量组H5亚型禽流感抗体效价显著高于对照组(P0.05),BB基因型鸡中剂量组显著高于对照组(P0.05),BC基因型鸡中剂量组H9亚型禽流感显著高于对照组(P0.05);免疫后21 d,BC基因型鸡高、中剂量组H5亚型禽流感显著高于对照组(P0.05),BC基因型鸡高剂量组显著高于对照组(P0.05)。【结论】不同剂量中药复方多糖均能不同程度的提高各基因型蛋鸡血清中H5和H9亚型禽流感抗体效价,且以中剂量和高剂量效果好。     

人工合成禽流感M2e/HA0多肽的免疫原性分析

为了解流感病毒M2及HA保守肽段的免疫原性,参照流感病毒M2及HA的氨基酸序列分别设计合成多肽并免疫SPF鸡,设H5和H9亚型禽流感灭活疫苗及空白组作对照。对免疫后2、4、6和8周的血清进行HI和ELISA抗体、MDCK细胞的病毒血清法中和抗体效价和间接免疫荧光抗体检测,8周采血结束后用H9病毒进行攻毒检测。结果表明两种多肽疫苗均不产生HI抗体,针对各自多肽的ELISA抗体效价均显著高于H5/H9常规灭活疫苗对照组。M2e/HA0多肽苗免疫血清最高中和抗体效价为1∶16,远低于H9血清中和效价(1∶256)。间接免疫荧光检测结果显示多肽苗(M2e/HA0)组含荧光颗粒的MDCK细胞比例约20%左右,低于H5和H9灭活疫苗组含荧光颗粒细胞数(分别为50%和70%)。H9亚型禽流感病毒攻毒结果表明,两组多肽免疫后都可以有效抑制排毒,其中M2e免疫组抑制效果略好于HA0免疫组。以上结果提示M2e/HA0多肽具有较好的免疫原性,但其免疫原性弱于常规疫苗。     

鸡新城疫、禽流感(H9亚型)、禽腺病毒(Ⅰ群,4型)三联灭活疫苗(La Sota株+TJ株+HY株)子代通过母源疫苗获得被动免疫力的效力和免疫期试验

种鸡接种鸡新城疫、禽流感(H9亚型)、禽腺病毒(Ⅰ群,4型)(La Sota株+TJ株+HY株)三联灭活疫苗后,会经卵把母源抗体传递给子代鸡。子代鸡母源抗体的高低直接关系到子代鸡首次免疫的日龄及免疫程序。为了明确种鸡接种三联灭活疫苗后,子代鸡母源抗体的消长规律,进行了NDV、AIV(H9亚型)和FAV-4母源抗体对子代鸡的被动免疫试验。试验结果表明,子代鸡的母源抗体随着日龄的增大逐渐消退;并且随着免疫时间的延长,所产的种蛋孵化的子代鸡的母源抗体也逐渐降低。因此,在进行子代鸡的免疫时,应该根据种鸡免疫的时间进行灵活确定,在接种前应该进行母源抗体效价测定,确定在4 log2才能进行免疫接种;如果没有条件检测母源抗体效价,建议在10日龄以后接种,以避免母源抗体干扰免疫效果。     

Growth and Decline Laws of Maternal Antibody of Newcastle Disease in Commercial Meat Goose and Its Optimal First - immunization

[目的]探讨商品肉鹅新城疫母源抗体消长规律及最佳首免日龄.[方法]通过血凝(HA)试验和血凝抑制(HI)试验,对商品肉雏鹅在不同时间首次接种鹅源新城疫油乳剂灭活疫苗后的免疫效果进行监测,以确定最佳首免日龄,并对ND母源抗体进行动态分析.[结果]霍尔多巴吉肉鹅的母源抗体由1日龄的10 log2下降到25日龄的0.6 log2.母源抗体水平4l0g2作为免疫接种的临界点.7日龄免疫组HI抗体水平20日龄后一直维持在临界点以下,不能达到疫苗保护水平;11日龄免疫组HI抗体水平在免疫后16 d达到临界点,到出栏前仍维持较高水平;14日龄免疫组HI抗体水平在免疫后约22d达到临界点.[结论]霍尔多巴吉肉鹅母源抗体半衰期约为2.7d,11日龄为霍尔多巴吉商品肉鹅新城疫的最佳首免日龄.     

商品肉鹅新城疫母源抗体的消长规律及其最佳首免日龄

[目的]探讨商品肉鹅新城疫母源抗体消长规律及最佳首免日龄。[方法]通过血凝(HA)试验和血凝抑制(HI)试验,对商品肉雏鹅在不同时间首次接种鹅源新城疫油乳剂灭活疫苗后的免疫效果进行监测,以确定最佳首免日龄,并对ND母源抗体进行动态分析。[结果]霍尔多巴吉肉鹅的母源抗体由1日龄的10 log2下降到25日龄的0.6 log2。母源抗体水平4 log2作为免疫接种的临界点。7日龄免疫组HI抗体水平20日龄后一直维持在临界点以下,不能达到疫苗保护水平;11日龄免疫组HI抗体水平在免疫后16 d达到临界点,到出栏前仍维持较高水平;14日龄免疫组HI抗体水平在免疫后约22 d达到临界点。[结论]霍尔多巴吉肉鹅母源抗体半衰期约为2.7d,11日龄为霍尔多巴吉商品肉鹅新城疫的最佳首免日龄。