PRRS不同疫苗组合对仔猪血清抗体水平和CD3、CD4、CD8分子表达量的影响

为了探究猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)不同疫苗组合对仔猪血清抗体水平和CD3、CD4、CD8分子表达量的影响,试验于规模化猪场筛选健康未免疫的仔猪30头,随机分为3个组。其中试验Ⅰ组、试验Ⅱ组和对照组均在仔猪14日龄首次免疫经典猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)弱毒疫苗,试验Ⅰ组仔猪在35日龄加强免疫高致病性PRRSV灭活疫苗,试验Ⅱ组仔猪在35日龄加强免疫经典PRRSV弱毒疫苗,对照组在14,35日龄均注射0.9%Na Cl溶液,然后对各组仔猪在不同时间点通过前腔静脉采血,应用ELISA法检测血清中PRRSV抗体和CD3、CD4、CD8分子表达量。结果表明:除了CD8分子外,试验Ⅰ组和试验Ⅱ组抗体水平和CD3、CD4分子表达量在部分时间点显著或极显著(P0.05或P0.01)高于对照组,但两个试验组之间无统计学差异。说明在生产实践中PRRSV弱毒疫苗和灭活疫苗联合使用能产生一定的效果,从安全角度考虑,建议采用经典弱毒疫苗结合高致病性灭活疫苗进行免疫。     

表达H5亚型禽流感同义(Consensus)HA蛋白的重组质粒构建及体外表达

为研究禽流感病毒(AIV)H5亚型同义Consensus HA(Cons-HA5)基因的重组表达质粒在体外的表达情况,本研究通过对从NCBI流感数据库中获得的5000条H5亚型AIV的HA蛋白的序列比对、分析获得一条同义HA蛋白,将其相对应的核苷酸序列进行鸡体偏嗜性密码子优化,人工合成Cons-HA5基因并克隆于真核表达载体pCAGGS中构建重组表达质粒pCACons-HA5。将重组质粒转染293-T细胞,在激光共聚焦显微镜下观察转染后不同时间HA蛋白的表达情况,同时在转染后24 h、48 h后分别进行表达蛋白的western blot检测。结果表明,pCACons-HA5转染293-T细胞后,其表达的HA蛋白先分布于细胞质中,而后转移至细胞膜表面;westernblot鉴定结果表明,Cons-HA5重组蛋白可以与AIV多克隆血清反应分子量约为70 ku。该重组质粒的构建将为进一步Cons-HA5核酸免疫对H5亚型不同抗原群AIV的交叉保护免疫效力研究奠定基础。     

禽流感病毒H5亚型HA基因在杆状病毒系统中的表达及生物学活性鉴定

为研究禽流感病毒(AIV)HA蛋白抗原活性,本研究将A/Goose/Guangdong/1/96(H5N1)的HA基因片段克隆于pFastBacHTA中,构建重组质粒pFastBacHTA-HA,转化至DH10Bac感受态细胞,构建重组杆粒,在脂质体介导下转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒。采用间接免疫荧光、western blot和血凝试验对所表达的蛋白进行抗原性和生物学活性分析。结果表明,表达重组蛋白分子量约为64 ku;IFA和western blot试验证明重组HA蛋白能够与H5亚型禽流感阳性血清特异结合,具有良好的抗原性;血凝试验和淋巴细胞增殖试验显示重组蛋白具有良好生物学活性。重组蛋白的正确表达为进一步研究HA基因功能活性和制备禽流感HA基因亚单位疫苗奠定了基础。     

不同类型H5亚型禽流感疫苗的免疫保护效力比较研究

为比较以我国首个H5亚型禽流感病毒分离株A/Goose/Guangdong/1/1996(H5N1)\[GS/GD/96\]为基础构建的新型重组禽流感病毒灭活疫苗（H5N1亚型,Re\|1株）、禽流感重组鸡痘病毒载体活疫苗（H5亚型）、禽流感、新城疫重组二联活疫苗（rLH5\|1株）以及禽流感DNA疫苗（H5亚型,pH5\|GD）的免疫保护效力。分别将四种禽流感疫苗以2.8 μg HA/0.3 mL（肌肉注射）、103PFU/100 μL（刺种）、106EID50/100 μL（滴鼻、点眼）、15 μg/200 μL（肌肉注射）等不同剂量和方式免疫3周龄SPF鸡,首次免疫3周后再加强免疫一次,加强免疫2周后用106EID50的高致病力禽流感病毒（HPAIV） GS/GD/96鼻腔途径进行攻击,观察发病与死亡情况。分别于攻毒后第3 d、第5 d、第7 d采集喉头及泄殖腔拭子进行病毒分离、滴定检测排毒情况,同时检测免疫及攻毒后血清HI抗体的动态变化。所有疫苗均可对免疫鸡形成100%完全保护（不发病、不致死、不排毒）;在病毒攻击前,灭活疫苗（H5N1亚型,Re\|1株）、禽流感重组鸡痘病毒载体活疫苗（H5亚型）、禽流感、新城疫重组二联活疫苗（rLH5\|1株）以及禽流感DNA疫苗（H5亚型,pH5\|GD）所诱导的HI抗体平均水平分别为875log2、6.5log2、5.13log2和7.88log2。新型的基因工程疫苗具有良好的免疫保护性,已经或将在H5亚型HPAIV的防治实践中起到有益的补充作用。     

一点式猪场的生物安全状态及其与生产、管理特征的相关性(续完)

正(上接5期32页)4统计分析通过方差分析和Scheffé方法进行数据比较分析,评估国家在总体、内部和外部生物安全评分差异以及生物安全和农场特征的12个子类别之间的差异。如果数据不满足正态分布和齐性方差,则进行非参数双侧独立样本KruskallWallis检验。通过双向Pearson相关系数显示内部生物安全评分与外部生物安全评分之间的相关性。为了分析生物安全评分与猪群特     

猪一次接种口蹄疫二价疫苗的最佳时期

正2010年11月至2011年4月期间,韩国暴发口蹄疫(FMD),并引起广泛传播,造成了严重的经济损失,因此,韩国开始实施疫苗接种政策。从2015年3月起,韩国政府开始对猪接种由O1 Manisa和O 3039组成的二价疫苗,并将此作为常规疫苗接种。本研究意在确定,目前使用的由O1 Manisa和O 3039病毒毒株组成的FMD疫苗1次接种的最佳时期。     

一点式猪场的生物安全状态及其与生产、管理特征的相关性

通过生物安全措施预防疾病被认为是改善动物生产整体健康状况的重要因素。本研究旨在评估4个欧盟国家猪生产中生物安全措施的实施水平,并描述生物安全水平与猪场以及生产特征之间的可能关联。2012年12月至2013年12月在比利时、法国、德国和瑞典进行了232个一点式猪场的横断面研究,通过基于风险评分工具Biocheck.UGent~(TM)(www.biocheck.ugent.be)描述和量化每个猪场的生物安全状况。通过猪场管理系统以及与猪场主面谈获得猪场的生产和管理特征,并分析其与生物安全水平的相关性,通过设计的—个因果关系路径来研究其统计学关联。结果显示许多猪场的生物安全状况都有很大改善空间。4个国家之间在内部和外部生物安全水平上均有显着差异(P0.01)。外部生物安全(即采取所有措施以防止疾病引入猪群)评分结果为:德国最高,法国最低。内部生物安全(即采取所有措施防止畜群疾病传播出去)评分结果显示瑞典最高,比利时最低,差异较大。与内部生物安全评分相比,外部生物安全评分普遍较高。疫苗防控所针对的病原体数量与内部生物安全状况显著相关,提示对疾病传播风险应采取更全面的预防性方法。较高的外部生物安全水平与每头母猪每年断奶仔猪数量增加有关。此外,断奶日龄和至断奶时仔猪死亡率与每头母猪每年提供的断奶仔猪数量高度相关。生物安全水平与对某些疾病临床症状治疗的估计频率(代表该疾病发病率)负相关,该结果与生物安全水平较高则动物越健康的假设一致。这些发现促进了猪场生物安全状况的改善,并有助于讨论通过减少抗生素需求量来保护动物健康的其他替代方法。预防胜于治疗!     

H5亚型禽流感DNA疫苗pCAGGoptiHA5对鸭免疫保护效力的研究

为评价H5亚型禽流感病毒(AIV)DNA疫苗pCAGGoptiHA5对鸭的免疫保护效力,本研究将pCAGGoptiHA5以20μg、30μg和50μg剂量免疫3周龄SPF鸭,首次免疫后3周加强免疫一次。2周后以105EID50的鸭源高致病力AIV由鼻腔攻毒,观察SPF鸭发病和死亡情况。分别于攻毒后3d、5d和7d采集喉头及泄殖腔拭子进行病毒分离,检测鸭排毒情况及免疫和攻毒后血凝抑制(HI)抗体、中和(NT)抗体的动态变化。结果表明:30μg和50μg免疫组均可对免疫鸭产生100%保护,而20μg剂量组则可对免疫鸭提供80%保护。     

表达H5亚型禽流感病毒HA蛋白的重组禽痘病毒的构建

为构建表达H5亚型禽流感病毒(AIV)A/Duck/Anhui/1/06(H5N1)(简称AH/06)HA蛋白的重组禽痘病毒,本研究利用感染-转染的方法通过转移载体pSY681-gfp-gpt将AIV株AH/06的HA基因同源重组到禽痘病毒(FPV)中,并利用gfp和gpt双重筛选标记在鸡胚成纤维细胞中经过多轮筛选,得到纯化的重组禽痘病毒(rFPV-gfp-gpt-AHHA)。通过PCR、序列测定和western blot的方法对rFPV-gfp-gpt-AHHA进行鉴定和抗原活性分析。结果表明AH/06的HA基因稳定的重组到rFPV-gfp-gpt-AHHA中,其表达的HA蛋白能够与AH/06的阳性血清反应,显示出了良好的抗原性。同时病毒的生长曲线也显示外源HA基因的插入并没有影响亲本病毒的复制。这些结果为进一步的免疫效力研究奠定了基础。     

猪蓝耳病疫苗概述及免疫效果评估

正1国内猪蓝耳病现状猪蓝耳病又称猪繁殖与呼吸障碍综合征(Porcine Reproductive and Respiration Syndrome,PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的一种高度传染性疾病,临床上以母猪发热、厌食、早产、流产、木乃伊胎、死胎、弱仔等繁殖障碍及各种年龄的猪的呼吸困难和仔猪的高死亡率为特征。从2013年开始,在中国分离到具有与NADC30株相