重组禽流感病毒(H5+H7)二价灭活疫苗免疫SPF鸭免疫持续期试验

试验对重组禽流感病毒(H5+H7)二价灭活疫苗免疫SPF鸭后的免疫持续期进行了研究。选用14日龄SPF鸭20只,其中10只鸭的腿部肌肉接种免疫灭活疫苗,剂量为0.5 m L·只-1,另10只不接种的鸭作为对照组。结果表明,免疫后14 d可以产生较高的免疫力,H5N1 Re-8株的抗体效价平均增值为5.6 log2,H7N9 H7-Re-1株的抗体效价平均增值为6.6 log2。到35 d产生的HI抗体效价平均值达到高峰,H5N1 Re-8株的抗体效价平均增值为8.6 log2,H7N9 H7-Re-1株的抗体效价平均增值为9.5 log2。第120天H5N1 Re-8株抗体效价平均值为4 log2,H7N9 H7-Re-1株的抗体效价平均值均为5 log2,为抗体的保护临界值。根据此数据分析,一次免疫的免疫保护期约为120 d。     

重组禽流感病毒H5+H7亚型三价灭活疫苗（H5N1Re-11株、Re-12株+H7N9Re-2）对蛋鸡免疫效果抗体监测以及安全性试验评估

试验通过对重组禽流感病毒(H5+H7)三价灭活疫苗(H5N1Re-11株+Re-12株+H7N9 H7Re2株)在接种蛋鸡后产生抗体效价值的情况,评价重组禽流感病毒(H5+H7)三价灭活疫苗(H5N1Re-11株+Re-12株+H7N9 Re-2株)对蛋鸡预防高致病性禽流感疫病的效果。同时进行安全性试验。结果表明,蛋鸡在15日龄接种重组禽流感病毒(H5+H7)三价灭活疫苗(H5N1Re-11株+Re-12株+H7N9 H7Re2株),45日龄进行二次免疫,75日龄进行三免,产生H5N1Re-11株抗体滴度、H5N1Re-12株抗体滴度、H7N9 Re-2株抗体滴度都较高,从抗体消长规律来看,对产蛋前的蛋鸡都有较好的保护力,疫苗接种后未对鸡群造成应激反应。通过本试验在蛋鸡上接种重组禽流感病毒(H5+H7)三价灭活疫苗(H5N1Re-11株+Re-12株+H7N9 H7Re2株)首次免疫后14 d产生抗体有保护力,二免后14 d抗体滴度达到高峰,对蛋鸡有很好的保护力,为预防蛋鸡高致病性禽流感疫病提供临床依据。     

重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗免疫SPF鸡、SPF鸭后抗体消长规律分析

为了解重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗(H5N1,Re-6株+Re-4株)的免疫效果,为临床上制定合理的禽流感疫苗免疫程序提供依据,选取3个企业生产的12批疫苗,免疫SPF鸡、SPF鸭,跟踪至免疫后24周,每3周采血检测Re-6、Re-4 HI抗体效价。结果表明:SPF鸡、SPF鸭分别在免疫后6周和3周Re-4、Re-6抗体即可达到高峰值,随着时间的推移,抗体水平逐渐下降;SPF鸡抗体的高峰值高于SPF鸭;SPF鸡的高抗体水平的维持期长于SPF鸭;3个企业的疫苗均有良好的免疫效果。     

重组禽流感病毒H5+H7亚型三价灭活疫苗(H5 N1Re-11株、Re-12株+H7N9Re-2)对黄羽肉鸡免疫效果抗体监测试验

试验通过对重组禽流感病毒(H5+H7)三价灭活疫苗(H5N1Re-11株+Re-12株+H7N9 H7Re-2株)在慢速型黄羽肉鸡上接种后产生抗体效价值的情况,来评价重组禽流感病毒(H5+H7)三价灭活疫苗(H5N1Re-11株+Re-12株+H7N9 Re-2株)对黄羽肉鸡预防高致病性禽流感疫病的效果。结果表明黄羽肉鸡在15日龄接种重组禽流感病毒(H5+H7)三价灭活疫苗(H5N1Re-11株+Re-12株+H7N9 H7Re2株),45日龄进行二次免疫,75日龄进行三免,产生H5N1Re-11株抗体滴度、H5N1Re-12株抗体滴度、H7N9 Re-2株抗体滴度都较高,从抗体消长规律来看对慢速型黄羽肉鸡出栏前都有很好的保护力。试验在黄羽肉鸡上接种重组禽流感病毒(H5+H7)三价灭活疫苗(H5N1Re-11株+Re-12株+H7N9 H7Re2株)首次免疫后14 d产生抗体有保护力,二免后28日龄抗体滴度达到高峰,对慢速型黄羽肉鸡有很好的保护力。     

悬浮MDCK细胞的驯化与H5亚型禽流感病毒的培养

【目的】为评估细胞源重组禽流感病毒H5亚型灭活疫苗的有效性提供数据支持。【方法】选取一株来源清楚的贴壁MDCK细胞,通过逐步降低培养基中血清含量及不断调整无血清培养基配方,将其驯化为悬浮MDCK细胞,并以此为基质增殖重组禽流感病毒H5N1 Re-6株、H5N1 Re-7株和H5N1 Re-8株;比较不同毒株在贴壁和悬浮MDCK细胞中增殖的差异。分别将经悬浮MDCK细胞增殖的病毒与经SPF鸡胚增殖的病毒制备成重组禽流感病毒(H5亚型)三价灭活疫苗,免疫商品蛋鸡和商品鸭,通过血清学方法比较细胞源与鸡胚源禽流感灭活疫苗的免疫效果。海兰褐商品蛋鸡:6 050只,分为3组,2组为免疫组,每组3 000只,28日龄免疫0.5 mL/只,80日龄免疫0.5 mL/只;不免疫对照组1组,50只,同等条件下隔离饲养。分别于蛋鸡日龄49、110、210 d(即首免后21 d、82 d、6个月)时采血分离血清,测定禽流感H5亚型Re-6株、Re-7株、Re-8株的HI抗体效价,监测抗体消长。长白飞鸭:220只,分为3组,2组为免疫组,每组100只,10日龄免疫0.5 mL/只,24日龄免疫1.0 mL/只,不免疫对照组20只,同等条件下隔离饲养。分别于鸭日龄24、38、52 d(即首免后14、28、42 d)时采血分离血清,测定禽流感H5亚型Re-6株、Re-7株、Re-8株的HI抗体效价,监测抗体消长。【结果】获得一株可在无血清培养基中悬浮生长的MDCK细胞,摇瓶、5L生物反应器中的培养数据及细胞状态显示,该细胞株适合放大生产。此悬浮MDCK细胞培养48 h细胞密度可由1.5×10~6 cells/mL左右增殖到1.0×10~7 cells/mL左右,状态良好、活率高、单个悬浮于培养基中。以此悬浮MDCK细胞为基质增殖重组禽流感病毒,H5N1 Re-6株的HA效价达1﹕512,TCID_(50) 10~(7.67)/mL,EID_(50) 10~(7.83)/0.1 mL;H5N1 Re-7株的HA效价达1﹕256,TCID_(50)达10~(7.33)/mL,EID_(50)10~(7.17)/0.1 mL;H5N1 Re-8株的HA效价达1﹕1024,TCID_(50) 10~(8.5)/mL,EID_(50) 10~(8.38)/0.1 mL,与经贴壁MDCK细胞增殖的病毒毒价相当。细胞源三价灭活疫苗免疫海兰褐商品蛋鸡,首免后21 d时,禽流感H5亚型Re-6株、Re-7株、Re-8株HI抗体效价几何平均值(GMT)分别为1﹕446、1﹕111、1﹕416,二免后30 d时三者HI抗体效价几何平均值(GMT)分别为1﹕588、1﹕362、1﹕776,6个月时分别为1﹕239、1﹕128、1﹕223,维持了较高的抗体水平;免疫长白飞鸭,首免后14 d时,禽流感H5亚型Re-6株、Re-7株、Re-8株HI抗体效价几何平均值(GMT)分别为1﹕30、1﹕17、1﹕64,28 d时三者HI抗体效价几何平均值(GMT)分别为1﹕194、1﹕91、1﹕137,42 d时分别为1﹕416、1﹕128、1﹕239;以上两组的试验结果与鸡胚源重组禽流感灭活疫苗免疫后诱导产生的HI抗体效价相当。【结论】经驯化获得的可在无血清培养基中悬浮生长的MDCK细胞株,其增殖重组禽流感病毒H5N1 Re-6株、H5N1 Re-7株、H5N1 Re-8株能力强,且病毒被制备成灭活疫苗免疫海兰褐商品蛋鸡和长白飞鸭可产生较高水平的抗体。为大规模工业化生产禽流感疫苗提供技术支持。     

重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗免疫商品肉鸭和SPF鸭的效果研究

为了解重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗(H5N1,Re-6株+Re-8株)的免疫效果,为临床上制定合理的禽流感疫苗免疫程序提供依据,试验选取14日龄樱桃谷商品肉鸭30只和SPF鸭30只,注射重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗(Re-6株+Re-8株)0.4 m L/只作为首次免疫,饲养至28日龄时,樱桃谷肉鸭、SPF鸭随机分成A、B和C、D组,每组均为15只,B、D组再次颈部皮下注射该疫苗0.5 m L/只,均从14日龄起每周采集血清一次,直至56日龄,检测H5抗体情况。结果表明:不同品种鸭对同一亚型禽流感疫苗免疫效果存在差异,首次免疫的日龄可以提至7~10日龄,商品肉鸭一次免疫即可满足防疫需要。     

蛋鸡重组高致病性禽流感H5N1(Re-4+Re-5)2价灭活疫苗免疫效果的评价

参照农业部既定的蛋鸡高致病性禽流感免疫程序,对100只蛋鸡雏免疫重组高致病性禽流感H5N1(Re-4+Re-5)2价灭活疫苗,300只蛋鸡雏分3组分别免疫重组高致病性禽流感H5N1(Re-4)株、(Re-5)株灭活单苗作为对照,通过免疫应激反应观察、抗体效价检测,以评价该疫苗的免疫效果。     

山东省2011年春季中标禽流感灭活疫苗质量检测及抗体消长规律分析

为了摸清山东省高致病性禽流感疫苗的质量情况,对2011年春季山东省3个中标厂家生产的重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗(H5N1,Re-5株+Re-4株)进行了质量检验和疫苗的抗体消长规律的跟踪。试验结果显示:除L厂家的2011010批次、G厂家的2011012批次有菌外,3个厂家的其余33批次灭活疫苗的物理性状、灭活检验和无菌检验均全部合格。免疫SPF鸡3周后,除Q厂家2011005批次疫苗外,其余34批疫苗HI抗体效价均≥6.0log2,产品达到质量标准要求。抗体消长规律实验表明,3个厂家的疫苗免疫SPF鸡4周即可达到高峰值,Re-4 HI抗体水平≥9.5log2,Re-5 HI抗体水平≥8.0log2,至25周时,仍维持在高抗体水平:Re-4 HI抗体水平≥9.0log2,Re-5 HI抗体水平≥7.8log2。从总的趋势看,L厂家的疫苗免疫抗体效价好于Q厂家和G厂家。     

樱桃谷肉鸭H5N1亚型禽流感(Re-6株)灭活疫苗母源抗体消长规律及免疫程序研究

选取1日龄健康无免疫的樱桃谷肉鸭480羽,随机分成A、B、C、D 4组,每组120羽。B、C和D组在10日龄分别免疫H5N1亚型禽流感(Re-6株)灭活疫苗0.5、0.8和1.0 m L/羽,A组为非免疫对照组。用HI方法检测其母源抗体和免疫抗体,根据母源抗体和免疫抗体消长规律,探讨樱桃谷鸭H5N1亚型禽流感(Re-6株)灭活疫苗的合理免疫程序。结果表明,樱桃谷鸭母源抗体效价和抗体合格率在1日龄最高,分别为6.6 log2和96.7%,14日龄下降至3.87 log2和56.7%,21日龄之后几乎没有保护力;3个试验组免疫抗体水平和抗体合格率在统计学上差异不显著(P0.05),建议免疫程序为:10日龄免疫,免疫剂量0.8 m L/羽。     

重组禽流感病毒H5亚型三价灭活疫苗免疫抗体的效果比较

为了探索禽只免疫重组禽流感病毒H5亚型三价灭活疫苗(细胞源,Re-6株+Re-7株+Re-8株)后,Re-6、Re-7和Re-8不同株抗体的关系,采用血凝实验和血凝抑制试验的方法对免疫禽只免疫抗体水平进行检测,研究几种抗体的相关性。     

禽流感免疫抗体消长规律研究

用禽流感(AI)灭活疫苗免疫120日龄蛋鸡后,分别于30,50,70,90,110,130d检测AI-HI抗体。检测结果表明,30dAI抗体为5.0log2;70d为7.11log2,抗体效价达到最高值;到90d,AI抗体效价为6.12log2,开始下降;110dAI抗体效价降至4.65log2;120dAI抗体效价已降到临界值以下,为3.2log2。AI灭活疫苗免疫期在120d以内。     

不同疫苗接种对鸡免疫学功能的影响试验

为验证不同疫苗免疫对鸡免疫学功能的影响,采用两批市售的鸡新城疫-传染性支气管炎-禽流感（H9亚型）三联灭活疫苗注射14日龄鸡,同时按0.3 mL·只-1注射重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗（细胞源,Re-6株+Re-8株）,并同时设单独注射重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗（细胞源,Re-6株+Re-8株）组和健康对照组,每组鸡各10只,分别于疫苗注射后14、21和28 d,对各组鸡采血,分离血清,进行H5亚型禽流感HI抗体效价测定。结果表明：注射后14、21和28 d,第1组（新支流三联180010900批）组鸡血清中H5亚型禽流感HI抗体效价分别为1:68.6、1:207.9和1:415.6,第2组（新支流三联180020900批）组鸡血清中H5亚型禽流感HI抗体效价分别为1:68.6、1:207.9和1:445.7;第三组单独注射重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗（细胞源,Re-6株+Re-8株）组鸡血清中H5亚型禽流感抗体效价分别为1:64.0、1:194.0和1:388.0,健康对照组鸡血清中H5亚型禽流感HI抗体效价均不高于1:24.3。说明接种2种疫苗试验鸡血清H5亚型...     

H_5N_1亚型Re-4株禽流感疫苗免疫的检测与分析

在2008～2009年石家庄地区,商品蛋鸡中采集754份血样,经过检测H5N1,Re-4株HI抗体可看出,均匀度较差,有11份HI抗体为0,179份HI抗体在6log2以下,易受到威胁。HI抗体平均为6.82log2;随着免疫次数的增加,HI抗体在逐渐增高,但多次免疫HI抗体不超过12log2;雏鸡母源抗体1日龄为5.09log2,在24日龄降为0;雏鸡15日龄免疫H5N1亚型Re-4株疫苗21天后产生较强免疫力。     

禽流感DNA疫苗(H5亚型Re-8株)对黄羽肉鸡免疫程序的优化

[目的]本试验旨在探索禽流感DNA疫苗(H5亚型Re-8株)对黄羽肉鸡的免疫效果及合理的免疫程序。[方法]选取1日龄健康未免疫禽流感疫苗的黄羽肉鸡210羽,随机分为7组,每组30羽,其中A、B、C 3组为单次免疫试验组,分别于1、10和14日龄免疫禽流感DNA疫苗,每羽30μg; D、E、F组为加强免疫试验组,D、E 2组分别于14和10日龄免疫禽流感DNA疫苗,每羽30μg, 3周后D组加强免疫同种疫苗,每羽30μg, E组加强免疫H5禽流感D7+rD8二价灭活疫苗,每羽0.3 mL;F组为灭活苗对照组,于10和31日龄分别免疫0.3 mL H5禽流感D7+rD8二价灭活疫苗;G组为空白对照组。各组受试鸡于免疫前和免疫后每周(后期每2周)采集血液并测定血清HI效价,研究受试鸡母源抗体和免疫期抗体的消长规律。[结果]黄羽肉鸡母源抗体HI效价至14日龄降至3.5,抗体合格率低于40%。单次免疫禽流感DNA疫苗时,14和10日龄免后1～2周HI抗体开始升高,1日龄免疫后3周抗体持续下降。禽流感DNA疫苗或二价灭活疫苗加强免疫后1周HI抗体效价均可达到5.0。[结论]黄羽肉鸡于10和14日龄免疫禽流感DNA疫苗,每羽30μg,免疫后3周,每羽0.3 mL H5禽流感D7+rD8二价灭活疫苗或每羽30μg禽流感DNA疫苗加强免疫后,可为鸡群提供长期的免疫保护。     

肉鸭重组禽流感病毒灭活疫苗(H5 N1亚型, Re -6株)母源抗体消长规律及免疫程序研究

选取1 d健康无免疫肉鸭480羽,随机分成A、B、C、D 4组,每组120羽。 B组、C组、D组在10 d分别免疫0．5、0．8、1．0 mL H5N1亚型禽流感（Re－6株）灭活疫苗,A组为非免疫对照组。用HI方法检测母源抗体、免疫抗体,根据母源抗体、免疫抗体消长规律,探讨H5N1亚型禽流感（ Re－6株）灭活疫苗的合理免疫程序。结果显示：7 d之前,鸭群中90％以上的个体HI效价在4 log2及以上,获得的母源抗体可以有效保护鸭群;14 d时,鸭群仅有56．7％的个体有保护性抗体;21 d还能够检测到极低的母源抗体,鸭群中6．7％的个体有一定的保护力;28 d之后,鸭群所有个体的HI效价均在4 log2以下,鸭群已经丧失对禽流感病毒的抵抗力。     

水禽专用高致病性禽流感疫苗临床免疫效果初探

本研究通过对试验组水禽(鸭)免疫禽流感灭活疫苗(H_5N_2亚型D7株)、对照组免疫重组禽流感病毒(H_5N_1亚型)细胞灭活疫苗(Re-6株),在免疫前及免疫后15d、21d、36d、51d和66d分别进行免疫抗体监测及病毒核酸监测,结果显示:免疫后各试验组动物的抗体水平均显著性高于对照组(P0.05),且试验组之间差异不显著(P0.05)。试验组和对照组的免疫抗体合格率均为100%,达到合格标准。通过比较分析,禽流感灭活疫苗(H_5N_2亚型D7株)对水禽的免疫效果要优于重组禽流感病毒(H_5N_1亚型)细胞灭活疫苗(Re-6株)。     

鸡新城疫、禽流感(H9亚型)、禽腺病毒(Ⅰ群,4型)三联灭活疫苗(La Sota株+TJ株+HY株)抗体产生期和免疫持续期试验

以实验室制备的3批制品各经颈部皮下接种7日龄和21日龄SPF鸡,7日龄鸡于免疫后7、11、14、21、28 d及1、2和3个月;21日龄鸡于免疫后7、11、14、21、28 d及1、2、3、4和5个月时采血,分离血清,分别测定免疫鸡血清中鸡新城疫病毒、禽流感(H9亚型)病毒和禽腺病毒抗体效价。试验结果表明,实验室3批制品免疫7日龄SPF鸡后,免疫后11 d鸡新城疫病毒、禽流感(H9亚型)产生抗体,21～28 d时3种病毒抗体均达到抗体高峰,高峰期持续至免疫后1个月,免疫后3个月下降到有效保护标准以下。三联疫苗免疫21日龄SPF鸡,免疫后11 d鸡新城疫病毒、禽流感(H9亚型)产生抗体,针对3种病毒的抗体在免疫后21～28 d达到抗体高峰,高峰期持续至免疫后2个月,免疫后3个月开始下降,免疫后5个月下降到有效保护标准以下。因此,鸡新城疫、禽流感(H9亚型)、禽腺病毒(Ⅰ群,4型)三联灭活疫苗(La Sota株+TJ株+HY株)免疫2周龄的鸡免疫持续期为2个月,免疫2周龄的鸡免疫持续期为4个月。     

猪细小病毒PPT1株免疫原性研究

用PPT1株制备猪细小病毒油乳剂灭活疫苗,并将其与市售灭活疫苗免疫豚鼠,定期采集,血清用血凝抑制试验测定抗体效价。试验结果表明,PPT1株在PK-15细胞上病毒增殖效价可达到1.96×106TCID50/mL,两种疫苗二免后14d,抗体效价均可以达到8log2。     

鸡新城疫LaSota株油乳剂灭活疫苗抗体消长规律的研究

用鸡新城疫LaSota株接种10日龄SPF鸡胚,收获尿囊液,经甲醛灭活后与10号白油佐剂混合乳化制成油乳剂灭活疫苗。抽取其中三批,接种14日龄非免疫鸡100羽,4d后检测抗体,以后每隔1周或2周采血检测ND-HI抗体,并于抗体水平为2log2、4log2、6log2左右时攻毒。结果表明,免疫后4d即能检测出抗体,之后逐渐上升,至第4周抗体水平达到高峰且较稳定,然后缓慢下降,150d后HI抗体降至临界值以下。攻毒结果表明,能使鸡抵抗强毒攻击的抗体临界值为6log2。     

长葛市某蛋鸡场高致病性禽流感疫苗免疫效果分析

禽流感是由A型流感病毒引起的一种禽类传染病,疫苗免疫接种是预防禽流感最经济、有效的手段,为探讨高致病性禽流感疫苗的免疫效果,长葛市某蛋鸡场采用H5亚型禽流感三价灭活疫苗对17日龄鸡群进行首免,对55日龄鸡群进行二免,对124日龄鸡群进行三免,对鸡群免疫后的抗体水平进行了监测与分析。结果显示首免后39天,H5亚型Re-6抗体平均值(log2)达到3.9,二免后16天、32天、48天、63天鸡群H5亚型Re-6抗体平均值(log2)分别达到6.1、7.8、7.0、6.9,三免后9天、24天、39天鸡群H5亚型Re-6抗体平均值(log2)分别达到7.6、8.5、8.0。经过三次免疫之后,鸡群抗体值均达到较高水平,该养殖场的免疫程序对鸡群起到良好的免疫保护效果。