鹅细小病毒与番鸭细小病毒差异分析及鉴别诊断方法研究进展

鹅细小病毒和番鸭细小病毒在大小、形态、理化特性、核酸类型、基因组结构等方面非常相似,而且两种疫病的流行病学、临床症状、病理变化也非常相似;两者的抗体也有一定的交叉保护性,用常规的血清学检测方法很难将这两种病毒区分。本文对鹅细小病毒和番鸭细小病毒的基因组结构和病毒编码的蛋白进行了比较分析,概述了两种病毒在基因组结构和抗原性上存在的差异,以及已经建立的鉴别诊断方法。     

基于生物信息学预测的番鸭细小病毒和鹅细小病毒免疫交叉反应研究

通过生物信息学软件开展了基于表位预测的番鸭细小病毒(MDPV)和鹅细小病毒(GPV)免疫交叉反应研究.番鸭细小病毒非结构蛋白线性抗原表位预测结果表明:AA248～252、503～509和545～554可能是线性表位优势区域,与已知的鹅细小病毒非结构蛋白线性抗原表位区进行比较,可能具有交叉反应性的区段为AA503～509.番鸭细小病毒农壳蛋白线性抗原表位预测结果表明:肽段AA27～33、39～50、67～75、111～115、149～155、260～264、321～325、426～430、448～452、485～489、521～525、540～544和685～691等区域可能是线性表位优势区域,与已知的鹅细小病毒衣壳蛋白线性抗原表位区进行比较,可能具有交叉反应性的区段为AA321～325、426～430、540～544和685～691.     

鹅细小病毒NS1基因植物真核表达载体的构建

根据发表的鹅细小病毒GPV B株全基因组设计一对引物,采用PCR方法扩增出鹅细小病毒扬州株(GPV YZ)非结构蛋白基因NS1,克隆到植物表达载体pBI121中,转化至大肠杆菌感受态细胞JM109。经菌液PCR、双酶切及质粒PCR鉴定后,将阳性重组质粒转化感受态农杆菌LBA4404。经菌液PCR及质粒PCR分析,获得了真核表达载体pBI121-NS1,该载体的构建为进一步研究鹅细小病毒NS1基因的分子生物学特性打下良好基础。     

鹅细小病毒野毒的分离及VP3基因的克隆及序列分析

试验对吉林省农安县某鹅场发现的疑似鹅细小病毒病进行了野毒的分离与鉴定,并以鹅细小病毒标准毒B株染色体DNA为模板,对VP3成熟蛋白基因特异性引物进行PCR扩增,获得了1603bp的DNA片段。通过T-A克隆技术,将PCR产物克隆至pMD18-T克隆载体。经鉴定证实,成功地构建了pMD18-T-VP3克隆载体。序列分析结果表明,该基因序列与鹅细小病毒标准毒B株的VP3成熟蛋白基因序列同源性为98%。     

贵州鹅细小病毒感染诊断技术研究

利用鹅细小病毒贵州分离株制备琼脂扩散试验沉淀抗原,建立琼脂扩散试验方法;以该分离株免疫家兔、制备高免血清、提取IgG制备荧光抗体,建立荧光抗体检测技术;根据鹅细小病毒VP3基因设计一对引物,建立PCR检测技术;然后采用这3种技术对鹅细小病毒感染临床病例进行检测比较,结果表明,这3种诊断技术均具有较高的特异性,可用于鹅细小病毒感染的临床诊断,但以荧光抗体检测技术的敏感性最高。     

新型鹅细小病毒四川株的全基因组扩增及遗传进化分析

【目的】了解四川地区新型鹅细小病毒(Novel goose parvovirus,NGPV)的分子生物学特征及遗传变异情况。【方法】根据Gen Bank中发表的新型鹅细小病毒的全基因组序列,设计5对兼并引物采用PCR方法分段扩增新型鹅细小病毒四川株的全基因组序列,并利用DNAstar等生物信息分析软件对获得的基因组序列进行分子特性与遗传演变分析。【结果】获得的新型鹅细小病毒四川株(命名为SC16)全长5 109 nt,5′端ITR长408 nt,3′端ITR长407 nt,NS基因长1 884 nt,VP基因长2 199 nt。序列比对和遗传进化分析显示,SC16株与山东分离株SDLC01(KT343253.1)及QH15(KT751090.1)的基因组核苷酸同源性高达99%,与两者的亲缘关系最近,基于NS及VP蛋白的氨基酸序列系统进化树分析结果与此一致。但SC16株的5′端ITR还是发生了一定的变异:与SDLC01及QH15相比,多了几个14 nt的插入片段。【结论】研究结果丰富了NGPV的分子生物学资料。     

小鹅瘟地方株的分离鉴定及致病力试验

通过对当地鹅场发生的小鹅瘟疑似病例的病变肝脏进行病毒分离,将具有病变的肝脏加hanks液进行研磨后,低温反复冻融3次,除菌过滤后接种12日龄的鹅胚。收集死亡鹅胚的尿囊液,初步分离出鹅细小病毒,经电镜观察、琼脂扩散试验、血清保护试验鉴定为鹅细小病毒。动物回归试验表明,该病毒的潜伏期为5d,病程为1～3d,病死率达100%,对雏鹅半数致死量(LD50)为0.1mL 10-4.5稀释的病毒液。     

2株鹅细小病毒的主要结构蛋白VP2基因的克隆和序列分析

将鹅细小病毒PJ分离株和XJ分离株接种于13日龄非免疫鸭胚,收集接毒后24～72h死亡的鸭胚尿囊液。根据Genbank已发表的鹅细小病毒B株基因组核苷酸序列设计1对引物,对2株鹅细小病毒毒株主要结构蛋白VP2基因进行PCR扩增,将扩增产物与pMD18-T载体连接并测序。结果表明:PJ株和XJ株VP2的核苷酸序列全长分别为2 044bp和2 050bp,PJ株与B株、XJ株、台湾株的同源性均为93.5%～96.7%,与YG株、哈尔滨株、广东株的同源性为88.7%左右,与匈牙利株的同源性仅为80.7%,而与番鸭细小病毒的同源性为74.8%～80.7%。XJ株与匈牙利株的同源性为83.5%,与番鸭细小病毒的同源性为76.8%～80.0%,与其他毒株的同源性为91.6%～98.3%。     

浅谈小鹅瘟综合防治技术

小鹅瘟是由鹅细小病毒引起的一种急性、亚急性烈性传染病,是目前危害养鹅业的重要传染病之一。本文从鹅细小病毒的病原学特征、流行病学特点、临床症状、剖检变化和临床诊断以及防治措施等方面进行了综述,旨在为该病在生产中的防治提供技术参考和建议。     

动物细小病毒致病机制的研究进展

因动物细小病毒的高危害性、高传染性,使其得到越来越多的关注与研究。为了给诊断技术、疫苗预防的研究提供借鉴,对猪细小病毒、犬细小病毒、猫细小病毒和鹅细小病毒从病原学、分子生物学特征方面进行介绍,并对4种动物细小病毒致病机制进行综述。     

植物胚胎发育晚期丰富蛋白的结构与功能

胚胎发育晚期丰富蛋白（LEA蛋白）是植物在逆境条件下生成的一类应激蛋白,它可以通过稳定细胞膜、结合金属离子等机制提高植物的抗逆性。笔者对植物LEA蛋白的分类及其相应的结构,以及LEA蛋白响应干旱、低温及其他胁迫响应中功能的研究进展进行了综述。     

植物表达重组蛋白的N-糖基化研究进展

分子农业中,植物作为生物反应器生产药用重组蛋白是近十几年来基因工程研究的一大热点。植物具有完整的真核表达系统、重组蛋白通常可以正确组装、折叠和修饰,同时,由于植物表达体系的方便、廉价等优点,利用转基因植物生产药用蛋白的研究迅猛发展,已有100余种蛋白中得到表达,有些已进入商业化生产。但是植物与动物对蛋白的转译后修饰并不是完全保守的,植物是否能够真正“忠实”地表达出实用、可靠的目的蛋白产品已成为备受瞩目的话题,由于大多数药用蛋白都是分泌型蛋白,因此植物表达重组蛋白的N-糖基化成为新的研究热点。笔者对植物表达体系对药用蛋白的N-糖基化修饰途径和人源化改造植物表达重组蛋白的研究进展两个方面加以综述,并对生物反应器的未来发展方向进行了探讨和展望。     

盐桥与全基因组微生物耐热性的关系研究

挑选了NCBI COG数据库中具有全基因组的单细胞微生物,选择其中三维结构已知的蛋白质作为研究对象,研究了盐桥数目和类型对古细菌和细菌类蛋白质耐热性的影响作用。结果表明:无论古细菌还是细菌类蛋白质,总盐桥含量和盐桥网络都随耐热性的提高而增加;古细菌类超高温蛋白质形成盐桥时对Asp的利用率比较高;细菌类耐热蛋白质形成盐桥时尽量利用带正电荷的Lys和带负电荷的Glu,而常温蛋白质尽量利用带正电荷的His和带负电荷的Asp;由于耐热蛋白质对带电荷氨基酸的利用率高,即使细菌类耐热蛋白质和常温蛋白质含有等量的带电荷氨基酸,其稳定性也会提高。     

Inhibition of secretion of hepatitis B surface antigen by a related presurface polypeptide

The presurface (preS) proteins of hepatitis B virus are structural components of the viral envelope that may play important roles in virion assembly and infectivity. They are specified by a large open reading frame that includes the coding region for the major surface (S) protein in its 3' half. Translation of the preS proteins initiates upstream from the S region, giving rise to proteins that are composed of the S domain and an additional 163 (preS1) or 55 (preS2) amino acids. Little is known about the biosynthesis and assembly of these proteins. The expression of the S and preS1 proteins was examined by transfecting cultured mammalian cells with viral DNA and injecting synthetic messenger RNA's into Xenopus oocytes. In contrast to the proteins encoded by the S region, the preS1 proteins are not detectably secreted into the culture medium. Furthermore, when the S and preS1 proteins are synthesized together, secretion of the S proteins is specifically and strongly inhibited. The results suggest a unique molecular interaction during secretion of the S and preS proteins that may be important for virus assembly.     

Bt杀虫晶体蛋白的研究概述

苏云金芽孢杆菌 (Bt)杀虫晶体蛋白对许多农业害虫有很高的活性。许多试验表明Bt晶体蛋白之间具有协同增效作用 ,蛋白的混配比单一的蛋白具有更高的活性。本文对Bt杀虫晶体蛋白分类方法、蛋白活性以及蛋白之间的协同作用进行综述。     

变异链球菌UA159细胞壁蛋白的预测和功能分析

[目的]对变异链球菌UA159细胞壁蛋白进行预测和功能分析,为后续研究该菌致病机制奠定基础。[方法]用Phobius和Signal P 4.0软件预测变异链球菌UA159的细胞壁蛋白,并采用COG功能数据库对细胞壁蛋白进行功能注释。[结果]变异链球菌UA159共含有22个细胞壁蛋白,其中含有LPx TG锚定基序的有12个,含有Lys M基序的有3个,含有CW基序的有5个,含有GW基序的有1个,含有PG锚定基序的有1个。功能分析结果显示,22个细胞壁蛋白中有18个蛋白没有具体的功能注释,4个蛋白有具体的功能注释,其中beta-lactamase与防御机制功能有关;exo-beta-D-fructosidase与碳水化合物代谢与转运有关;分子伴侣蛋白ATP-dependent protease Clp E与蛋白质翻译后修饰和蛋白质折叠有关;cell wall-associated protein Wap A与细胞壁和细胞膜的生物合成有关。[结论]变异链球菌UA159全基因组大多数的细胞壁蛋白功能未知,需在以后研究中进行进一步的功能注释。     

植物抗菌蛋白及其在农业中的应用研究进展

植物在长期进化过程中为了抵御外源物侵袭而产生了一些具有抗菌活性的蛋白质和肽等.在自然界中植物抗菌蛋白多种多样,多为抗真菌蛋白,依据其结构、作用机制和序列特性,可将其大体分为以下几类:病程相关蛋白、类亲环素蛋白、防御素及类防御素蛋白、凝集素、核糖体失活蛋白、脂转移蛋白、蛋白酶抑制剂和2S清蛋白等.随着植物抗真菌蛋白的分离纯化,植物抗病基因工程的研究的重大突破,植物抗真菌蛋白在植物抗病原菌和抗虫保护中展示出广阔的应用前景.总结植物抗真菌蛋白研究进展,对其在农业抗虫和转基因方面的应用研究作了阐述.     

Hydrophobic organization of membrane proteins

Membrane-exposed residues are more hydrophobic than buried interior residues in the transmembrane regions of the photosynthetic reaction center from Rhodobacter sphaeroides. This hydrophobic organization is opposite to that of water-soluble proteins. The relative polarities of interior and surface residues of membrane and water soluble proteins are not simply reversed, however. The hydrophobicities of interior residues of both membrane and water-soluble proteins are comparable, whereas the bilayer-exposed residues of membrane proteins are more hydrophobic than the interior residues, and the aqueous-exposed residues of water-soluble proteins are more hydrophilic than the interior residues. A method of sequence analysis is described, based on the periodicity of residue replacement in homologous sequences, that extends conclusions derived from the known atomic structure of the reaction center to the more extensive database of putative transmembrane helical sequences.