临床型空肠弯曲杆菌生物膜体外模型建立及相关特性研究

空肠弯曲杆菌是一种在世界范围内普遍存在的人畜共患病病原,生存条件严苛.研究发现,该菌在一定条件下可以形成一种能够抵抗外界环境不良影响生物膜,这也是该菌能够在恶劣环境中存活并产生耐药性的重要原因.文章选取临床分离空肠弯曲杆菌为研究对象,建立其生物膜体外模型,通过PCR、扫描电镜等一系列方法对空肠弯曲杆菌生物膜进行鉴定.正交试验法对培养基、温度以及空气条件三种因素对空肠弯曲杆菌生物膜形成影响进行研究.结果表明,体外生物膜形成最佳条件为MHB培养基、37℃和常规空气条件.     

应用DNA环介导恒温扩增技术快速检测空肠弯曲菌

【目的】空肠弯曲菌是一种重要的人畜共患病致病菌,主要经被污染的水源、乳制品、生禽肉进行传播,建立快速、准确的诊断方法是防控空肠弯曲菌感染的重要措施。【方法】本文引入一种新型的核酸检测技术--DNA环介导恒温扩增 (loop-mediated isothermal amplification, LAMP),以空肠弯曲菌ORF-C序列为检测靶基因,建立了空肠弯曲菌LAMP快速检测方法。【结果】利用本LAMP方法对21种病原菌进行检测,仅空肠弯曲菌为阳性结果,说明该方法具有高度的特异性。该LAMP方法对空肠弯曲菌纯培养菌的检测灵敏度达6CFU/反应管,对污染材料中空肠弯曲菌的检测灵敏度为9CFU/反应管。【结论】本研究建立的空肠弯曲菌LAMP检测方法操作简便、检测快速,具有良好的实用性。      

犬源空肠弯曲杆菌的分离鉴定及药敏试验

空肠弯曲杆菌是一种分布十分广泛的人畜共患病原菌,能随粪便排出体外.本研究随机采集了病犬的血便8 份,进行该病原菌的分离、鉴定,结果分离到3株,检出率为37.5%.药敏试验显示该菌对头孢哌酮、头孢曲松、 庆大霉素、洛美沙星、氟哌酸敏感,对阿莫西林、头孢唑啉氨苄西林中等敏感,对复方新诺明、林可霉素等耐药.     

几种放线菌处理后对猪粪中主要病原菌和恶臭产生菌的影响研究

采用室内培养方法,研究评估了细黄链霉菌（Streptomyces microflavus）、抗生链霉菌（Streptomyces antibioticus）、灰色链霉菌（Streptomyces griseus）三种放线菌及其组合对猪粪中主要病原菌的影响,并对其体外的抑菌作用机理进行了初步探讨。结果表明,接菌处理能有效减少猪粪中的沙门氏菌（Salmonella spp.）、病原性大肠埃希氏菌（Escherichia coli O157）、空肠弯曲杆菌（Campylobacter spp.）、单核细胞增生李斯特氏菌（Listeria monocytogenos）的数量。与对照组相比,单独添加细黄链霉菌组后猪粪中空肠弯曲杆菌的数量从3.1×101cfu·g^-1降至不可检测。放线菌胞内外活性混合物质的体外抗菌试验的结果显示,不管是单独处理还是几种放线菌的复合处理都对供试的大肠杆菌、梭菌、优杆菌、沙门氏菌、病原性大肠埃希氏菌、空肠弯曲杆菌、单核细胞增生李斯特氏菌表现出一定程度的抑制作用,在抑菌能力方面,单独添加细黄链霉菌的效果优于其他各组。     

蛋鸡和鲜蛋空肠弯曲菌带菌状况的研究

对420只蛋鸡和200枚鲜蛋进行了空肠弯曲菌检查。结果表明,蛋鸡平均带菌率为66.2％,在43～46用龄时带菌率最低(34.0％),26～28周龄时带菌率最高(92.0％),19～20周龄时带菌率居中(45.3％),差异极显著(P<0.01)。在200枚鲜蛋中未检出空肠弯曲菌。对15只空肠弯曲菌阳性蛋鸡进行该菌在体内分布的研究表明,十二指肠、空肠、回肠、盲肠、直肠和泄殖腔为空肠弯曲菌的主要栖居场所,在咽喉、腺胃、卵巢和输卵管内也有该菌检出,而在嗉囊中未检出该菌。同时,对蛋清抑制空肠弯曲菌的平板试验显示,蛋清没有抑菌作用。本文并对空肠弯曲菌在鸡体的垂直传播途径进行了讨论,认为空肠弯曲菌不经鲜蛋而垂直传播于仔鸡。     

空肠弯曲杆菌多酶脉冲场电泳基因分型研究

为提高脉冲场电泳(PFGE)技术对空场弯曲杆菌的分型效果,利用6种限制性内切酶对33株空肠弯曲杆菌进行了基因分型研究,结果发现,BamHⅠ是单酶中分型效果最好的一种限制性内切酶,结合KpnⅠ和SacII,可以提高PFGE在空肠弯曲杆菌基因分型中的效果.     

利用PCR技术检测鸡肉产品中的空肠弯曲杆菌

根据空肠弯曲杆菌旋转酶基因（gyrAgene）的保守序列,设计1对引物,建立了快速检测鸡肉中空肠弯曲杆菌的PCR方法。采用该方法和生化试验对送检的100份鸡肉样品进行检测,结果表明：PCR方法能特异性地扩增出空肠弯曲杆菌192bp核苷酸片段,其它结肠弯曲杆菌、肠炎沙门氏菌、大肠杆菌、副溶血性弧菌、产气荚膜梭菌、绿脓假单胞菌等均不能获得阳性扩增结果。检测限度为8cfu／mL。鸡肉肉水、增菌液和纯培养菌落的PCR鉴定结果,阳性率分别为16％、24％和20％,生化鉴定检出率为20％。     

宁德地区鸡场空肠弯曲杆菌调查与耐药性分析

为了解宁德地区鸡场中空肠弯曲杆菌的流行状况及耐药特征,于2018年9月在宁德地区部分鸡场随机采集100份鸡粪便样品,进行空肠弯曲杆菌的分离鉴定、多位点序列分型,随后采用微量肉汤稀释法检测分离菌株对9种抗生素的敏感性。结果显示,100份样品中共分离得到空肠弯曲杆菌23株,总体分离率为23.0%;23株空肠弯曲杆菌被分为14个序列型,其中优势序列型为ST354,同时鉴定出多个新的序列型;药敏检测结果显示,23株空肠弯曲杆菌对泰利霉素、阿奇霉素和克林霉素具有敏感性,对其他抗生素均产生不同程度的耐药,其中对萘啶酸、四环素和环丙沙星的耐药率分别高达91.3%、91.3%及87.0%;23株空肠弯曲杆菌均表现出至少1种耐药表型,且78.3%的菌株表现多重耐药性。以上结果反映出宁德地区鸡场空肠弯曲杆菌复杂的流行状况及严重的耐药性,相关研究结果为宁德地区空肠弯曲杆菌的流行监测及养殖场用药提供参考依据。     

益生菌发酵乳无菌提取物对空肠弯曲杆菌flaAσ28启动子的抑制作用

为了研究益生菌发酵乳无菌提取物对食源性有害微生物(空肠弯曲杆菌)有毒基因表达的抑制作用,以利用空肠弯曲杆菌的有毒基因flaA σ28启动子和无启动子的质粒pRYluxCDABE联结构建的生物冷光转基因模型为试验材料,通过检测生物发光特性的方法,研究了空肠弯曲杆菌有毒基因flaA表达与益生菌(5种双岐杆菌,6种乳酸杆菌)发酵乳无菌提取物之间的关系。结果表明,益生菌发酵乳无菌提取物对空肠弯曲杆菌flaA σ28启动子的活性有显著的抑制作用(P<0.05),并可显著抑制空肠弯曲杆菌有害基因flaA的表达。     

益生菌发酵乳无菌提取物对空肠弯曲杆菌flaA σ28启动子的抑制作用（英文）

为了研究益生菌发酵乳无菌提取物对食源性有害微生物(空肠弯曲杆菌)有毒基因表达的抑制作用,以利用空肠弯曲杆菌的有毒基因flaA σ28启动子和无启动子的质粒pRYluxCDABE联结构建的生物冷光转基因模型为试验材料,通过检测生物发光特性的方法,研究了空肠弯曲杆菌有毒基因flaA表达与益生菌(5种双岐杆菌,6种乳酸杆菌)发酵乳无菌提取物之间的关系。结果表明,益生菌发酵乳无菌提取物对空肠弯曲杆菌flaA σ28启动子的活性有显著的抑制作用(P<0.05),并可显著抑制空肠弯曲杆菌有害基因flaA的表达。     

空肠弯曲杆菌PCR-ELISA检测方法的建立

针对空肠弯曲杆菌(Campylobacter jejuni)旋转酶基因(gyrA gene)设计特异性引物和探针,将生物素和地高辛分别标记上游引物5＇端和核酸探针3 ＇端,并对反应条件进行优化,建立空肠弯曲杆菌PCR-ELISA检测方法.结果表明:该方法能特异的检测空肠弯曲杆菌基因组DNA,检测阈值为2fg,敏感性是常规PCR的10倍.对模拟泄殖腔样本进行检测,检测限为50 cfu/mL.对100份临床样品进行检测,PCR和PCR-ELISA方法阳性检出率分别为60％和69％.     

天然饲料补充正辛酸减少商品肉鸡空肠弯曲菌的寄居

空肠弯曲菌能引起人类的食物性传染疾病,且流行病学研究也表明家禽及其产品是人类感染该疾病的重要来源。减少家禽肠道中的空肠弯曲菌会减少其对家禽产品的污染。正辛酸是中链脂肪酸,据报道其可有效杀死包括空肠弯曲菌在内的各种细菌性病原体,但对于已经寄居在商品肉鸡肠道中空肠弯曲菌的治疗效果还未见报道。试验旨在研究正辛酸对42日龄鸡盲肠中空肠弯曲菌的治疗效果。试验共设4个试验组。前两个试验组,     

空肠弯曲菌flaA基因序列及功能预测分析

[目的]对空肠弯曲菌空肠弯曲菌flaA基因的序列及功能进行预测分析。[方法]分析了多个空肠弯曲菌flaA核酸及氨基酸序列组成和序列差异性;预测分析了flaA基因密码子使用偏好性、蛋白结构和功能域、Fla A与相关功能蛋白的互作情况。[结果]不同菌株的flaA基因序列存在差异性,且差异主要存在于序列的中间区域。不同空肠弯曲菌菌株的同一基因在密码子选择上存在差异。Fla A与多个蛋白存在不同形式的相互作用。[结论]该研究可为空肠弯曲菌flaA基因序列分析和功能研究应用提供基础和依据。     

藏羊肉中优势腐败不动杆菌的分离鉴定及其生物膜形成特性

本研究从冷鲜藏羊肉中共分离获得40株腐败菌,其中10株为不动杆菌,经结晶紫染色定量检测发现10株不动杆菌均具有中等或强粘附成膜能力。对1株成膜能力最强的不动杆菌A3的成膜特性进行深入分析,发现该菌在培养3 d时生物膜内菌数最高,随后培养5 d至7 d时菌数无显著(P0. 05)变化。扫描电镜、激光共聚焦显微镜观察及胞外多糖质量浓度测定结果表明,该菌形成生物膜的过程中培养1 d到3 d细菌迅速繁殖,培养3 d到5 d,菌体聚集成团,并且此时不可溶性多糖的含量最高,培养7 d时胞外分泌物质减少,生物膜出现解离状态。因此,在藏羊肉加工过程中,针对此菌生物膜抑制的研究可着重关注控制胞外物质的分泌,并且在生物膜未成熟前实施消毒措施,有助于彻底杀灭生物膜内的腐败菌。     

两株大肠埃希菌生物膜形成及影响因素

为分析不同离子质量浓度变化对大肠杆菌生物膜形成的影响,以分离自犊牛腹泻病中的两株大肠埃希菌为材料,采用试管法和96孔微量板法,在体外进行大肠杆菌生物膜形成及影响因素的研究。结果显示,试验菌(7号,13-2号)均能在试管和96孔板上形成生物膜。同时,根据试验结果绘制出这两株菌在48h、37℃下于M9培养基和进口96孔板的生物膜生长曲线。     

猪空肠弯曲菌感染的防治

在养猪生产中,猪空肠弯曲菌感染是较为常见的疾病,是由弯曲菌属中的空肠亚种细菌所致,猪空肠弯曲菌感染是一种人畜共患的细菌性消化道传染病,病猪主要表现腹泻、脱水等消化道症状,对于饲养管理水平较低的中小型猪场发病较多,危害较大。     

弯曲菌多重PCR检测方法的建立及其初步应用

以16S rRNA、mapA和ceuE为靶基因,建立检测空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的多重PCR方法。特异性试验能分别扩增出空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的特异性条带,其他参考菌株均未扩增出条带;敏感性试验表明,基于增菌培养和选择性培养的多重PCR方法对弯曲菌检测限为10 mL或10 g模拟污染样品,最低可检测0.925 pg.μL-1空肠弯曲菌DNA和1.050 pg.μL-1结肠弯曲菌DNA。以国家标准为参照,应用该方法对180份生鲜鸡肉样品进行检测,结果表明多重PCR方法具有快速、简便、特异性强和灵敏度高等特点,可克服传统生化鉴定和血清学方法的不足,为弯曲菌检测提供新的技术。     

高通量基因芯片在压载水中检测致病菌的应用

在口岸压载水检测中发现有多种食源性致病菌的存在,给公共卫生和口岸生态环境带来极大风险。目前对食源性致病菌的检测主要是通过细菌的培养及生化鉴定、荧光PCR等方法,但是不能同时检测多种致病菌。本研究针对一种能检测12种食源致病菌的芯片进行了应用研究,用参比菌株和实验室自分离的菌株检测该芯片的特异性,结果表明该芯片的特异性良好,在所检测的菌株之间无交叉反应。在DNA水平上可以检测到110~7 000 copy的DNA分子,在菌裂解液的水平上可以检测到104~105copy数目的菌体,样品添加实验证明1 cfu/m L的菌浓度就可以通过增菌后芯片检测到。该芯片可鉴别金黄色葡萄球菌、阪崎肠杆菌、肠出血性大肠杆菌O157∶H7、霍乱弧菌、志贺氏痢疾杆菌、空肠弯曲杆菌、单增李斯特菌、副溶血性弧菌、弯曲肠杆菌、沙门氏菌、志贺氏菌、蜡样芽孢杆菌和产气荚膜杆菌等。研究证明该芯片的灵敏度比PCR水平略低,但是其具备高通量、快速、准确,简单易操作等优点,可以应用于口岸压载水中携带食源致病菌的快速检测。     

江苏市售禽肉中弯曲杆菌的检测及耐药性分析

为了解江苏市售禽肉中弯曲杆菌的污染及耐药情况,从江苏省10个市区农贸市场及超市采集252份新鲜鸡肉、鸭肉、鸽肉样品进行弯曲杆菌的分离鉴定,采用纸片扩散法测定分离菌株对8类10种抗菌药物的耐药性,采用PCR及测序技术检测菌株携带重要耐药基因的情况。结果表明：共分离到34株空肠弯曲杆菌和66株结肠弯曲杆菌,阳性率分别为13.5%和26.2%。鸡肉、鸭肉、鸽肉样品中弯曲杆菌阳性率分别为41.4%、29.6%和38.2%。耐药性检测结果显示,弯曲杆菌对四环素、红霉素、阿奇霉素、妥布霉素、氨苄西林和庆大霉素耐药率分别为60.0%、54.0%、54.0%、52.0%、50.0%和41.0%,对氟苯尼考和磷霉素耐药率分别为13.0%和2.0%,结肠弯曲杆菌的多重耐药率(84.8%)显著高于空肠弯曲杆菌(26.5%)。分离菌株对10种抗生素共产生31种耐药谱,空肠弯曲杆菌和结肠弯曲杆菌的优势耐药谱分别为AMP-CN-TOB-CIP-TE和TOB-E-AZM-SXT-TE。aadE-sat4-aphA-3及RE-cmeABC检出率分别为26.0%和20.0%,其与弯曲杆菌多重耐药表型符合率分别为90.9...     

新疆部分地区牛源空肠弯曲菌分离鉴定及耐药性分析

【目的】研究新疆部分地区牛空肠弯曲菌污染及耐药性。【方法】从乌鲁木齐、昌吉、石河子3个地区共采集牛肛拭子171份。用布氏肉汤初步增菌后,用改良CCD琼脂基础和哥伦比亚血平板2种选择培养基培养,用聚合酶链式反应(PCR)鉴定,最后参照2010年美国临床实验室标准化研究所(CLSI)推荐使用的琼脂扩散法进行药敏试验。【结果】从乌鲁木齐牛场肛拭子分离鉴定到1株空肠弯曲菌(编号为N22),检出率为1.11%(1/90);昌吉牛场肛拭子分离鉴定到1株空肠弯曲菌(编号为C25),检出率为3.33%(1/30)。石河子牛场肛拭子没有分离到空肠弯曲菌。2株空肠弯曲菌对单环β内酰胺类、氨基糖苷类抗生素高度敏感;对喹诺酮类抗菌药物、大环内酯类和大部分头孢菌素类抗生素产生了不同程度的耐药。【结论】新疆牛群存在空肠弯曲菌的感染,感染菌株可用单环β-内酰胺类、氨基糖苷类抗生素进行防治。研究结果可为评价新疆牛群空肠弯曲菌的流行状况和制定防控措施提供科学依据。