番茄溃疡病一步法快速检测技术研究

对番茄细菌性溃疡病菌进行种子带菌的模拟检测试验.对用菌液处理过的种子进行简单抽提和纯化,不经过DNA提取而以抽提和纯化的病原菌为模板直接进行一步法PCR检测,对纯菌液Direct-PCR 最低检出限为2 600个细菌/ml,而Nested-PCR最低检出限可达到13个细菌/ml;对种子提取液,Direct-PCR不能检出,而Nested-PCR最低检出限可达到3×105个细菌/ml.一步法Nested-PCR可在12 h内对番茄种子携带的番茄溃疡病菌进行准确的定性鉴定.并且方法方便快速,成本低,灵敏度高,适用于种子携带番茄溃疡病菌的快速鉴定.     

枝条浸泡法鉴定番茄抗青枯病研究

采用枝条浸泡菌液法鉴定番茄品种对青枯病的抗性,并对影响鉴定结果的因素进行了研究。结果表明,菌液浓度以1×106～1×107cfu/mL、苗龄以38～48d、浸泡时间以6～12d为宜。该方法可以有效地鉴定番茄品种的抗性,有利于抗病基因鉴定时的取材保证,对抗性植株的快速鉴定及其幼苗的早期快速鉴定具有重要意义。     

巢式PCR快速检测西瓜细菌性果斑病菌

【目的】建立nested-PCR方法,快速检测西瓜种子中的燕麦嗜酸菌西瓜亚种（Acidovorax avenae subsp. citrulli,Aac）,为西瓜细菌性果斑病（bacterial fruit blotch of watermelon,WFB）的防控提供技术支持。【方法】 根据Aac BOX短重复序列的PCR产物设计两对引物BX-L1/BX-R5和BX-L1/BX-S-R2,建立以BX-L1/BX-R5为外侧引物,BX-L1/BX-S-R2为内侧引物的nested-PCR,以5 µL样品处理液于99℃高温裂解10 min,再放置冰上冷却5 min,以所释放病原DNA为模板进行PCR扩增,采用50 μL反应体系：5 μL 10×PCR buffer（25 mmol?L-1 MgCl2）,4 μL dNTP （D4030RA,2.5 mmol?L-1）,引物（5 μmol?L-1）各3 μL,0.4 μL Taq DNA酶（DR001B,5 U?μL-1）,通过退火温度优化,反应条件为：引物BX-L1/BX-R5各3 μL进行第一轮扩增,95℃,2 min;95℃,30 s;65℃,45s;72℃,1 min;35个循环;72℃,延伸7 min;取扩增后的产物1 μL为模板,以引物BX-L1/BX-S-R2各3 μL进行第二轮扩增,95℃,2 min;95℃,30 s,66℃,45 s,72℃,1 min,30个循环,72℃,7 min。在此条件下对梯度Aac菌悬液、模拟带菌种子提取液进行特异性、灵敏性及重复性检验,对不同带菌率的西瓜种子提取液进行检测。【结果】引物BX-L1/BX-R5和BX-L1/BX-S-R2在检测不同来源的Aac菌株时都产生了预期大小的片段,并且对其近源种燕麦嗜酸菌卡特莱兰亚种（A. avenae subsp. cattleyae）、魔芋假单胞菌（A. avenae subsp. konjaci）及其不相关菌株未扩增出目标片段。以BX-L1/BX-R5为外侧引物,BX-L1/BX-S-R2为内侧引物的nested-PCR,对Aac纯菌液和模拟带菌种子提取液的最低检测限4.7×101 cfu/mL,比direct-PCR灵敏度高出1 000倍。当西瓜种子带菌率在0.1%-0.5%时,nested-PCR阳性检测率为66.7%;当种子带菌率为1%-10%时,nested-PCR的阳性检测率为83%-100%。【结论】以BX-L1/BX-R5为外侧引物,BX-L1/BX-S-R2为内侧引物的nested-PCR方法,能够快速、高效检测携带微量Aac的西瓜种子,检测结果重现性高。     

瓜类细菌性果腐病病原IAS-PCR检测研究

本研究采用免疫磁珠吸附与PCR相结合的技术,对瓜类细菌性果腐病病原快速检测方法进行了研究。对新疆昌吉、海南、上海等地的西、甜瓜细菌性果腐病病叶、种子进行检测结果表明,用特异性引物,带菌病叶、种子均出现360bp特异条带,该方法对该菌悬浮液最低检出量为1×10cfu/mL,检出种子最低带菌率1‰。与常规PCR方法相比,检测时间周期为4h,且不需进行细菌DNA提取,灵敏度高出常规PCR100倍。这一方法的建立对于田间该病原的准确诊断,控制西、甜瓜种子带菌传播及进出口西、甜瓜种子检疫将起到重要作用。     

基于PCR法快速检测扩展青霉

对PCR快速检测扩展青霉的方法进行了研究.重点考察了退火温度对检测结果的影响,评价了该方法的灵敏度,并考察了该法在苹果样晶检测中的应用效果.结果表明,退火温度为51～61℃,扩展青霉3.5425 DNA扩增效果良好,纯菌培养所得菌体的DNA质量浓度的检测限为2.9×10-3μg/mL,菌液的检测限低于15 cfu/mL,苹果样品对菌体DNA检测结果无影响.     

利福平标记菌株BS1在番茄、茄子根部及土壤中的定殖动态

利用生防菌株BS1抗利福平霉素标记法,研究生防菌株BS1在番茄、茄子根部及根际土壤中定殖动态情况,结果表明,BS1可以在番茄、茄子根际土壤中定殖,随着时间的延长,根际土壤菌量逐渐下降,15 d后茄子苗根际土壤菌量及20 d后番茄苗根际土壤菌量均降至0.对BS1在番茄幼苗根部定殖能力研究表明,处理后6 h在幼苗根部定殖的菌量为15 cfu*g-1,12 h后为860 cfu*g-1,24 h后达最大值(7.8×104 cfu*g-1),以后不再增加,48 h后仍维持在较高水平(6.5×104 cfu*g-1).     

水稻细菌性条斑病菌的实时荧光PCR检测技术研究

 水稻细菌性条斑病是我国水稻上的检疫性病害之一。设计并筛选出特异性引物对Xoc2071F/Xoc2071R(Xoc2071),其扩增片段大小为329bp,利用SYBR GreenI荧光定量PCR方法进行水稻细菌性条斑菌的实时荧光PCR检测。结果表明,引物对Xoc2071能特异性检测到目标病原菌产生荧光信号而其他菌种不产生荧光信号。检测的灵敏度是2.25fg/μL质粒DNA和1.0×102cfu/mL的菌悬液,相当于1个细菌的基因,比常规PCR电泳检测的灵敏度高约100倍。此实时荧光PCR可以检测到仅需10g的带菌种子上目标菌的存在。     

番茄茎叶提取物对杀灭蚜虫活性研究

目的:探讨番茄茎叶提取物对蚜虫的杀灭活性。方法:以番茄茎叶作为材料,运用乙醇、氯仿、水、丙酮、乙酸乙酯进行番茄茎叶提取液的制备,同时以蒸馏水将提取液稀释成0.125 g/m L、0.25 g/m L、0.5 g/m L以及1 g/m L四种不同浓度提取液;以自然吸引蚜虫为对象,采用提取液进行喷洒,观察不同溶剂提取液以及不同浓度提取液的杀灭效果。结果:番茄茎叶水提取液对蚜虫无影响;随着番茄茎叶水提取液浓度的增加,24 h、48 h的死亡率、校正死亡率表现为随之递增。乙酸乙酯、丙酮、无水乙醇、氯仿四种不同的番茄茎叶提取液,其随着浓度的增加均表现为明显的杀灭活性增加;在浓度为0.125 mg/m L时,乙酸乙酯的杀灭效果最佳;在浓度达到1 mg/m L时,无水乙醇的杀灭效果最佳。番茄茎叶水提取液对小麦和菊花蚜虫的杀灭活性均不理想;乙酸乙酯、丙酮、无水乙醇、氯仿的浓度之间表现为明显的相关性和线性关系;无水乙醇提取液的效果最佳。结论:乙酸乙酯、丙酮、无水乙醇、氯仿番茄茎叶提取液均能够达到较好的蚜虫杀灭效果,但以无水乙醇对番茄茎叶进行提取其对蚜虫的杀灭活性最佳。     

毛霉状网柄菌去除鸡粪中肠道细菌的作用研究

利用网柄菌对细菌的捕食作用,对毛霉状网柄菌去除鸡粪中肠道细菌的效果进行了初步研究。结果表明:在20℃振荡培养36h,粪便中的细菌总数下降至9.8×104cfu/mL,大肠菌群、葡萄球菌、梭菌总数分别下降至4.5×104cfu/mL、2.6×104cfu/mL、5.0×101cfu/mL,去除率分别达到99.99%、99.97%、99.69%、73.68%。培养72h,粪便中的细菌总数、大肠菌群、葡萄球菌、梭菌总数分别下降至8.0×103cfu/mL、8.0cfu/mL、5.0cfu/mL、5.0cfu/mL,其处理效果优于其他生物处理。网柄菌处理前后鸡粪营养成分差异不显著(P>0.05),说明利用网柄可以最大限度地保持其原有营养成分。     

加工番茄种子带菌检测与种子消毒处理试验研究

对加工番茄7个品种的种子进行带菌检测和5种药剂的消毒处理结果表明,种子表面携带病菌主要为细菌的假单胞菌(Corynespora cassiicola)和黄单胞菌(Xanthomonas campestyis),前者带菌率为0.8;～10.8;,后者为0～14.2;,而镰刀菌(Fusarium)、丝核菌(Rhizoctonia)和交链孢菌(Alternaria)等真菌带菌率比细菌稍低.种子内部也带有一定数量的细菌和真菌,但品种间差异较大.47;苗盛(Monceren)(WS)用量0.2;包衣、高锰酸钾200、250倍浸种以及2.5;适乐时(Celest)(FS) 用量0.5; 包衣对加工番茄种子消毒效果最好.田间采用47;苗盛湿拌剂和2.5;适乐时种子包衣剂进行大田示范,防病效果良好.     

番茄细菌性溃疡病研究进展

 根据国内外近年来番茄溃疡病的研究概况,对番茄溃疡病的历史、主要症状、病原菌的分类地位及生物学特性、病原菌的分离、检测和鉴定技术、病害的田间发生、流行条件及防治方法进行了综述,分析了我国加入世界贸易组织后实施《卫生与植物卫生措施协定》以及农产品安全条例等,认为做好番茄溃疡病风险性分析、监测国际种子贸易传入该病害的可能性非常重要,同时提出了今后加强番茄溃疡病研究的主要方向。     

党参和黄芪根际土壤水浸液对亚麻种子萌发和幼苗生长的化感效应

为了探讨党参和黄芪根际土壤水浸液对亚麻的化感作用,采用生物测定方法,研究党参和黄芪根际土壤水浸液在0.5、0.25、0.125和0.062 5g·mL-1 4个质量浓度下对亚麻种子萌发及幼苗生长的影响。结果表明,2种草药根际土壤水浸液对受体亚麻种子吸胀过程中相对吸水量的增加有抑制作用,抑制程度随其质量浓度的升高而增强;亚麻种子萌发和幼苗生长在低质量浓度时表现为化感促进作用,在高质量浓度时表现为化感抑制作用,对亚麻幼苗渗透调节物质可溶性糖、丙二醛(MDA)和游离脯氨酸(Pro)含量都有显著影响。     

甘肃河西地区番茄病毒病病原种类鉴定

2006-2008年对甘肃河西地区番茄病毒病的种类进行了调查和鉴定.河西地区番茄病毒病田间表现为花叶和条斑等症状,种子可带毒.采用DAS-ELISA方法,从田间样本及该地区出入境番茄种子上检测到烟草花叶病毒(TMV)、番茄花叶病毒(ToMV)和黄瓜花叶病毒(CMV),并对TMV 和ToMV阳性样品进行了 IC-RT-PCR鉴定.该地区番茄病毒病优势病毒为烟草花叶病毒;13%的样本中检测出2种病毒的复合侵染.     

新疆加工番茄溃疡病的发生及其病原菌研究

[目的]番茄溃疡病是番茄上最严重、最具毁灭性的病害之一,2010年6～8月在新疆石河子、奎屯等地的加工番茄田问相继发现典型症状的病株和病果.旨在明确引起该病害的主要病原菌种类,为进一步的防治研究打好基础.[方法]对采集的病株、病果进行病原菌的分离纯化,应用注射法、剪叶法及喷雾接种测定菌株的致病性;通过供试菌株的形态学特征、培养特性、生理生化反应的测定、16S rDNA序列分析及番茄溃疡病菌特异性引物的PCR检测确定病原的归属.[结果]所有供试菌株对供试番茄都具有致病性,表现为茎秆爆裂,植株萎蔫死亡.菌株形态特征、培养特性及生理生化反应都与密执安棒形杆菌密执安亚种(Clavibactermichiganense subsp.michiganense)的特征相一致;供试菌株16S rDNA核苷酸序列与德国已报道的密执安棒形杆菌密执安亚种菌株的核苷酸序列同源性为99.86;;特异性引物检测也得到预期目标片段.[结论]因此,将此病害确定为番茄溃疡病,其病原为密执安棒形杆菌密执安亚种(C.michiganensis subsp.Michiganensis).     

小麦、蚕豆和油菜对向日葵列当种子萌发的影响

通过盆栽试验和水培试验的方法在不同地区分别种植小麦、蚕豆和油菜3种作物,研究这3种作物的甲醇浸提液以及根系分泌物对向日葵列当种子萌发的影响。结果显示,小麦和蚕豆植株的根部甲醇浸提液以及根系分泌物对向日葵列当种子的萌发有较强的刺激作用,其中小麦甲醇浸提液处理的向日葵列当种子萌发率最高(41.5%)。蚕豆植株的甲醇浸提液和根系分泌物也对向日葵列当种子萌发有较强的影响,其中蚕豆根系分泌物处理向日葵列当种子的萌发率高达41.1%。综合得出,小麦和蚕豆的根部可能含有刺激向日葵列当发芽的物质,具有作为向日葵列当诱捕作物的可能性。     

紫斑牡丹种子休眠原因初探

为探索紫斑牡丹Paeonia rockii种子休眠原因,对其种皮透性、抑制物质强度(以豌豆Pisum sativum种子为材料)和种子不同部位外植体生长等进行了研究。结果表明:种皮透性对种子吸水率和呼吸速率有一定影响;用生根前的紫斑牡丹种子胚乳、胚、种皮浸提液处理的豌豆均有部分生根率,且生根率依次增大,但上胚轴萌发率均为0;用生根及发芽后的紫斑牡丹种子种皮、胚乳处理豌豆的生根率显著高于生根前的,且均有部分上胚轴萌发,但前两者生根率及上胚轴萌发率无显著差异;完整种子、种皮置于一旁的去皮种子、去皮种子、胚(裸胚或去子叶胚)的紫斑牡丹生根率依次提高,发芽率均为0;紫斑牡丹胚及去子叶胚均需要经过低温处理后上胚轴才可以萌发。由此说明:①造成紫斑牡丹种子下胚轴休眠的因素是种皮的透性、种皮及胚乳中的抑制物质。②紫斑牡丹种子上胚轴休眠的原因在胚内部,而与种子在生根后及发芽过程中种皮及胚乳中抑制物质强度的变化无关,去除种皮、胚乳及子叶无法解除其休眠,上胚轴休眠需要经过低温过程方可解除。     

黄精种子内源抑制物质的初步研究

根据黄精种子存在休眠的生物学特性,对其内源抑制物质存在的部位及抑制作用进行研究。结果表明,黄精种子、胚乳和种皮均存在活性较高的内源抑制物质,对白菜和小麦种子的萌发及芽(主根)、胚芽鞘和根条数量(小麦)有显著抑制作用,随质量浓度的增大抑制作用逐渐增强;在相同质量浓度下,甲醇粗提物的抑制活性高于蒸馏水粗提物;同时,黄精种子不同部位抑制物质的含量存在一定差异,表现为种皮高于胚乳。     

小麦水浸提液对节节麦种子萌发和幼苗生长的影响

为阐明小麦Triticum sestivum对入侵植物节节麦Aegilops tauschii的化感作用机制,采用培养皿生物测定法,依据萌发率、苗高、根长及超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）等生理生化指标的变化,研究了小麦茎叶和根系水浸提液对节节麦种子萌发和幼苗生长的影响。结果表明:小麦茎叶和根系水浸提液对节节麦种子萌发、幼苗苗高和根长均表现出“低促高抑”的化感作用。生理生化指标结果显示,小麦不同部位水浸提液对节节麦幼苗生长表现出质量浓度效应的化感胁迫作用,随浸提液质量浓度的增加,节节麦幼苗相对电导率不断增加,叶绿素质量分数逐渐下降,当浸提液质量浓度达100 g·L-1时,与对照差异均达显著水平（P < 0.05）。此外,SOD活性、脯氨酸质量分数及丙二醛质量摩尔浓度均呈逐渐增加变化,其中,前期（0~5 g·L-1）丙二醛质量摩尔浓度较对照增加差异不显著（P>0.05）,可能与节节麦自身调节有关,之后增加迅速,且较对照增加均达到差异显著水平（P < 0.05）,表明节节麦幼苗生长受到小麦水浸提液化感胁迫作用的加剧。综合化感效应值显示,浸提液质量浓度为25~100 g·L-1时,小麦对节节麦幼苗化感抑制作用强弱为茎叶≥根系。     

向日葵霜霉病种子带菌研究

用种子洗涤检验法和分部染色检验法研究了向日葵霜霉病菌（Ｐｌａｓｍｏｐａｒａｈａｌｓｔｅｄｉ）种子带菌特点。结果表明，内果皮和种皮中带有菌丝体、吸器和卵孢子，胚和胚乳中不带菌，种子表面污染有孢子囊和卵孢子。另外，种子间混杂的病株残片也带有菌丝体、卵孢子和孢子囊。带菌种子传病试验证实带有卵孢子的种子能产生少数系统侵染病株；而仅带有菌丝体和吸器的种子，除萌发率降低，幼苗发育不良外，未发现任何症状，体内也未见病菌     

紫花苜蓿土壤浸提液对蜀葵的化感作用

为探究紫花苜蓿对蜀葵种子萌发和生长的化感作用，采取了紫花苜蓿根际及距离根际20、40、60 cm处表层5~10 cm的土壤，采用高效液相色谱法（HPLC）检测土壤浸提液（分别表示为R、D20、D40、D60）中5种有机酸类化感物质的含量。采用生物检测方法分析测定了土壤浸提液对蜀葵种子萌发的影响，并通过盆栽试验测定了紫花苜蓿与蜀葵间作条件下蜀葵叶绿素、丙二醛（MDA）、可溶性蛋白及生物量等生理生态学指标。结果表明： 5种有机酸在紫花苜蓿根际的含量最高，随着与根际距离的增加有机酸含量逐渐减少；R处理下，蜀葵发芽率和发芽指数比对照（蒸馏水）分别降低6.23%和31.32%，根长和苗长则与对照相比分别显著减少了56.11%和48.94%。盆栽实验结果表明，紫花苜蓿和蜀葵间作对蜀葵地上和地下生物量均产生明显抑制作用，与单种时相比分别减少8.01%和23.99%；间作使蜀葵叶绿素含量降低、MDA和可溶性蛋白含量升高。研究表明，紫花苜蓿对蜀葵有明显的化感作用，种植时不宜过密，应至少保持间距60 cm。