南昌霉纱A产生菌原生质体诱变选育

南昌霉素Ａ产生菌－南昌链霉菌ＮＡＷ－３菌株经原生质体再及原生质体紫外线照射处理后,通过摇瓶发酵筛选出高产株ＮＡＷ－３（１）,其产南昌霉素Ａ能力由出发菌株ＮＡＷ－３的１３８３单位／ｍＬ,提高到１８９５单／ｍＬ,产纱能力提高了３７％。     

醋菌纤维素高产菌株筛选和菌物鉴定

从１５０份自然材料中分离得到了２６个产纤维素菌株。其中,Ａｘ－１、Ａｃ－Ⅱ两高产菌株初步鉴定为巴氏醋杆菌木醋亚种（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｐａｓｔｅｕｔｉｎｕｓ Ｓｕｂｓｐ．Ｘｙｌｉｎｕｍ）和汉森醋杆菌（Ａ．Ｈａｎｓｅｎｉｉ）。该二菌株在２８℃～５ｄ静态培养中,从５０ｇ／Ｌ蔗糖（或葡萄糖）培养液中产出１４ｇ／Ｌ或１６ｇ／Ｌ纤维素,并初步测试了该纤维素的基本特性。     

酿酒酵母与糖化酵母的核倍性融合株的构建

在探讨原生质体制备、融合及再生条件的基础上，采用聚乙二醇（ＰＥＧ）对耐高温的酿酒酵母（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）ＨＵ－ＴＹ－１Ａ菌株和淀粉发酵力最强的糖化酵母（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｄｉ－ａｓｔａｔｉｃｕｓ）５２０６－１Ｂ菌株进行种间或同株间的原生质体融合，获得了数株ＨＵ－ＴＹ－１Ａ和５２０６－１Ｂ的同株以及种间融合株，融合率为（１．３～９．０）×１０￣（－６）．通过测定融合株的细胞体积大小、ＤＮＡ含量、遗传稳定性和营养要求等表明：融合株细胞体积和ＤＮＡ含量约为两亲株之和；种间融会株具有双亲株的遗传特性；融合株的倍性为２ｎ，３ｎ，４ｎ及５ｎ。     

香椿的扦插繁殖

香椿根插繁殖可采用粗０．８－２．４ｃｍ的根作插穗。０．３－０．５ｃｍ的细根宜用平埋方式，覆土厚１－２ｃｍ，成苗率可达８５．７％。硬枝扦插，在窖藏前用ＩＢＡ５００ｍｇ／Ｌ或ＮＡＡ５００ｍｇ／Ｌ处理插；或在扦插前用２，４－Ｄ５０ｍｇ／Ｌ处理插穗，均为提高生根率。     

笋兰的组织培养初报

１植物名称笋兰（ＴｈｕｎｉａａｌｂａＲ．ｆ．）２材料类别茎段３培养条件培养基：（１）ＭＳ＋ＫＴ１ｍｇ／Ｌ（单位下同）＋ＮＡＡ１;（２）１／２ＭＳ＋６－ＢＡ２＋ＮＡＡ１＋１０％ＣＭ;（３）１／２ＭＳ＋ＮＡＡ１＋１０％ＣＭ;（４）ＭＳ＋ＮＡＡ１＋１％活性...     

健康鸵鸟(1～6月龄)38项血清生化参数的测定

建立健康鸵鸟（Ｓｔｒｕｔｈｉｏｃａｍｅｌｕｓ）的血清全套生化参数,采用日本岛津ＣＬ ７２００型全自动生化分析仪,对３０只１～６月龄健康鸵鸟３８项血清生化参数进行测定．结果如下：（１）血清蛋白参数／ｇ·Ｌ－１：ＴＰ３１．８２,ＡＬＢ１５．４１,ＧＬＯ１６．１８（ＡＬＢ／ＧＬＯ０．９５）,Ａｐｏ Ａ１０．１２,Ａｐｏ Ｂ０．１４（Ａｐｏ Ａ１／Ａｐｏ Ｂ０．８０）;（２）血清酶参数／ｕ·Ｌ－１：ＡＬＴ１４．３,ＡＳＴ４５６．８（ＡＬＴ／ＡＳＴ０．３８）,ＧＧＴ３．４,ＬＤＨ１６０３．１,ＣＫ３９３６．８,ＣＫ ＭＢ１４３０．８,ＡＭＹ３４１５．１,ＡＫＰ５７１．７,ＨＢＤＨ３７３．３;（３）血清糖、蛋白质、脂类及其代谢产物参数／ｍｍｏｌ·Ｌ－１：ＧＬＵ９．４１,ＴＲＩ１．９７,ＢＵＮ０．９４,ＬＤＬ２．１９,ＨＤＬ１．５４,ＣＨＯ３．５８（ＨＤＬ／ＣＨＯ０．４１）;ＣＲＥ１２．６５μｍｏｌ·Ｌ－１（ＢＵＮ／ＣＲＥ０．０６３）,ＵＡ５０５．２４μｍｏｌ·Ｌ－１,ＴＢＡ３７．１μｍｏｌ·Ｌ－１,ＴＢＩＬ５．３２μｍｏｌ·Ｌ－１,ＤＢＩＬ３．２１μｍｏｌ·Ｌ－１,ＩＢＩＬ２．０８μｍｏｌ·Ｌ－１,ＴＴＴ４．１２ｕ;（?     

一种豆腐凝固剂酸汤中乳酸菌的分离及其生物学特性的研究

两份自然发酵酸化的豆腐凝固剂,酸汤样品中,分离到过氧化氢酶阴性、硝酸盐还原试验阴性、不液化明胶的革兰氏阳性杆菌４株和球菌１株。并通过生化试验和糖类发酵等生物学特性的研究,确定豆腐凝固剂酸汤中的主要产酸菌为乳酸菌,并将４株杆菌分别鉴定为：Ｌ．ｃｕｒｖａｔｕｓ（ＢＴ１－２）Ｌ．ｈｉｌｇａｒｄｉｉ（ＡＴ１－３）Ｌ．ｂｉｆｅｒｍｅｎｔａｎｓ（ＢＴ２－３）Ｌ．ｃｏｒｙｎｉｆｏｒｍｉｓｓｕｂｓｐ．ｃｏｒｙｎｉｆｏｒｍｉｓ（ＢＴ２－５）;１株球菌为Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓｓｕｂｓｐ．ｄｅｘｔｒａｎｉｃｕｍ（ＢＴ２－１）。     

单双低油菜原生质体培养高效成株体系的研究

以甘蓝型单低和双低油菜为材料，对原生质体培养及植株再生进行了研究。结果表明：低温预处理无菌苗可提高原生质体活力。不同下胚轴部部位对原生质体的得率及分裂频率均有影响。用琼脂糖包理法，在不含ＮＨ４ＮＯ３及ＫＮＯ３，而加有丝氨酸和谷氨酰胺的Ｋｍ８ｐ培养基上培养原生质体获得了高频率再生愈组织。在Ｍ＋ＢＡ１ｍｇ／Ｌ分化培养基上两周后得到芽的分化，转至ＭＳ＋ＮＡＡ０．１ｍｇ／Ｌ＋生根粉０．１ｍｇ／Ｌ的培养基上     

酿酒酵母和糖化酵母核倍性融合株的生长与生理特性研究

出发菌株是通过原生质体融合而获得的酿酒酵母（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）菌株ＨＵ－ＴＹ－１Ａ与糖化酵母（Ｓ．ｄｉａｓｔａｔｉｃｕｓ）菌株５２０６－１Ｂ的不同核倍性融合株．经对其生长速率、生物量、耐渗性、耐酒精能力以及发酵力等的测定,表明均不同于原双亲株ＨＵ－ＴＹ－１Ａ和５２０６－１Ｂ;同时发现两株性状优异的四倍体菌株：４ＡＢ２－６０和４ＢＡ１－３．在３０℃培养时,其生长速率和生物量略高于亲株或与之相当,４０℃时明显高于双亲株,耐高渗、耐酒精能力高于５２０６－１Ｂ,与ＨＵ－ＴＹ－１Ａ相当;３０℃淀粉发酵与５２０６－１Ｂ接近,４０℃时则优于５２０６－１Ｂ;３０℃葡萄糖发酵,４ＢＡ１－３低于５２０６－１Ｂ,高于ＨＵ－ＴＹ－１Ａ,４ＡＢ２－６０则优于双亲株,４０℃时,４ＡＢ２－６０和４ＢＡ１－３均优于双亲株．同时我们还发现不同倍性的同株融合株之间存在一定的基因表达剂量效应．     

荸荠离体培养技术的初步研究

以荸荠（Ｅｌｅｏｃｈａｒｉｓｔｕｂｅｒｏｓａ Ｒｏｅｍ ． ｅｔ． Ｓｃｈｕｌｔ）品种“大红袍”中心芽的芽尖为外植体,在ＭＳ＋ ６ＢＡ １．０ ｍ ｇ／Ｌ＋ ＮＡＡ ０．１ ｍ ｇ／Ｌ培养基中诱导产生了丛生叶状茎,叶状茎继代培养在 ＭＳ附加不同激素浓度的 ６ＢＡ 和ＣＰＰＵ 培养基中,当６ＢＡ,ＣＰＰＵ 浓度分别为３ ｍ ｇ／Ｌ,０．３ ｍ ｇ／Ｌ时,增殖系数达到最高,为４．００ 左右．叶状茎生根后移栽到大田中,可同以荸荠球茎为繁殖体一样产生球茎．在荸荠收获期测定单荠重和直径,结果表明,试管苗在整齐度上均优于对照,其中单荠重存在显著差异     

桉树焦枯病菌原生质体制备条件的优化

以桉树焦枯病强致病菌株Calonectria pseudoreteaudii YA51为材料,对其原生质体生成条件进行优化.结果表明,收集1 g(湿重)培养24 h的菌丝,以0.8 mol·L~(-1)Na Cl为渗透压稳定剂,置于10 m L含20 mg·m L~(-1)崩溃酶和30 mg·m L~(-1)裂解酶的混合酶液中,在30℃、100 r·min~(-1)条件下裂解4 h,原生质体生成量可达3.72×107个·m L~(-1),在SR培养基上的再生率为32.33%.     

L-乳酸生产菌——根霉菌的原生质体化及再生条件的研究

对米根霉AS3 .82 0及少根根霉AS3 .2 893进行了原生质体化及再生条件的研究。它们原生质体化及再生的最佳条件为 :米根霉AS3 .82 0 :蜗牛酶、溶菌酶与纤维素酶之比为 2∶1∶2 ,酶浓度为 2mg/mL ,在 3 0℃下酶解 3h ;少根根霉AS3 .2 893 :蜗牛酶、溶菌酶与纤维素酶之比为 3∶1∶1 ,酶浓度为 1mg/mL ,在 3 0℃下酶解 3h。稳定缓冲液为含 0 .7mol/LKCl的 0 .0 5mol/L的磷酸缓冲液 (pH为 6.0 )。在上述条件下 ,原生质体产量可达 1 .7× 1 0 6～ 2 .0× 1 0 6 个 /mL。     

层出镰孢菌原生质体制备条件的研究

[目的]研究层出镰孢菌(Fusarium proliferatum)原生质体的最佳条件,建立高效制备层出镰孢菌原生质体制备的方法.[方法]通过对菌丝体菌龄、酶解液组合、酶解反应温度及酶解时间等影响因素进行优化,对层出镰孢菌原生质体的制备条件进行研究.[结果]菌块在CMC液体培养基中25℃培养分生孢子3 d后,过滤离心后转移至YEPD液体培养基中培养12 h,该菌丝最适于层出镰孢菌原生质体的制备;用1.2 mol/L KCl溶液配制含有5 mg/m L裂解酶、25 mg/m L崩溃酶、0.05 mg/m L溶壁酶的酶解液在30℃下对菌丝酶解1.5 h,此时原生质体的数量最大,为2.47×10~9个/m L.原生质体再生培养时,使用40%PTC溶液恢复细胞壁,在TB3液体培养基中30℃过夜培养,离心后与TB3固体培养基混合后倒入平板培养,原生质体再生率可达39.75%.[结论]通过对菌丝体菌龄、酶解液浓度、温度、酶解时间等条件的优化,可提高层出镰孢菌原生质体的产量及再生率,为进一步研究层出镰孢菌致病分子机制提供理论依据.     

阿维链霉菌原生质体制备方法的研究

对阿维链霉菌原生质体制备进行了研究,结果表明:阿维链霉菌原生质体制备的最佳条件为在35 mL含0.5%甘氨酸的YEME培养基中接种孢子悬液,28℃、200 r/min培养40 h;3 000 r/min收集菌丝体,用10.3%蔗糖溶液清洗2次;溶菌酶浓度为4mg/mL的P缓冲液悬浮菌丝体,30℃下处理50 min完成原生质体制备。以50%PEG1000为促融剂,原生质体融合率最高。     

南昌霉素A产生菌原生质体诱变选育研究

南昌霉素A(Nanchangmycin A)产生菌——南昌链霉菌(Streptomyces nanchangensis)的原生质体经不同浓度NTG处理以后，分别采用抗药性诱变筛选和随机筛选选育高产菌株，通过连续3批次摇瓶发酵筛选出高产菌株400-N-4s，其产南昌霉素A的能力比出发菌株116-3r-68提高了20％以上。同时，经过对两种筛选结果进行统计学分析，结果表明，采用抗药性致死标记技术，可以有效的提高抗生素高产菌株的选育效率，得到较好的结果。     

茶薪菇原生质体制备条件的分析

以茶薪菇为出发菌株,对其原生质体制备条件进行研究,具体分析了酶浓度、菌龄、渗透压稳定剂以及酶解时间和温度等因素对茶薪菇原生质体产出量的影响。结果表明:采用液体发酵培养第5 d的菌丝体,以0.4 mol/L KC l作渗透压稳定剂,加入0.20%混合酶(纤维素酶与蜗牛酶按1∶1混合)在25℃下酶解3 h,制备原生质体效果最佳,原生质体产出量可达2.5×107个/mL。     

拮抗木霉gz-2菌株原生质体制备及转化条件优化

[目的]优化拮抗木霉gz-2菌株原生质体制备及转化条件,快速、高效获得绿色荧光标记菌株,为哈茨木霉及同类真菌的GFP标记提供参考,并为下一步研究其在不同环境中的定殖动态、分布规律及生防特性等打下基础.[方法]采用PEG-CaCl2介导的原生质体转化体系,从木霉菌株的菌龄、酶解时间、转化体系中质粒的含量及再生培养基中潮霉素B(HmB)的浓度等方面对哈茨木霉gz-2菌株原生质体制备及转化条件进行优化,获得表达稳定的转化子,并与出发菌株的生长特性进行比较,评价转化效果.[结果]gz-2菌株培养36 h菌丝所形成的原生质体稳定性最好,菌丝体酶解3.5 h获得的原生质体数量最多,达11.67×106个/mL;每240μL转化体系中质粒DNA含量为40μL,得到的转化子数量最多,为8.67个/皿;再生培养基中HmB含量为600μg/mL时可获得稳定的强转化子.[结论]筛选获得1株表达稳定的转化子GFP-gz-2菌株,该菌株在菌落形态、菌丝生长速率及产孢量上与出发菌株gz-2无显著差异,且具有较好的遗传稳定性.     

一株木霉菌SWFC1511原生质体形成及再生条件的研究

研究了一株木霉菌SWFC1511菌株原生质体的制备及再生条件,并观察其原生质体释放过程。结果表明:木霉菌SWFC1511原生质体制备的最佳条件为:菌丝培养20 h后,用比例为1∶3的2%溶菌酶与2%蜗牛酶为酶解液,在35℃下酶解3 h后,原生质体的产量较高。所形成的原生质体在再生培养基1上的再生率较高。     

木薯脆性胚性愈伤组织原生质体培养与植株再生

【目的】建立有效的木薯原生质体再生体系,为原生质体融合以及原生质体转化等研究奠定技术基础。【方法】酶解木薯品种TMS60444 的脆性胚性愈伤组织（FEC）的悬浮系,分离原生质体的产量最高达3.5×106个/g,FDA检测其活性约90%。用TM2G培养基以液体浅层法分别在5×105个/mL和2×105个/mL密度下培养,培养过程中前30 d用0.3 mol•L-1 TM2G新鲜培养基每10 d更换1次,此后每10 d用0.25 mol•L-1 TM2G新鲜培养基更换。原生质体培养45 d后即可挑出1-2 mm大小的愈伤组织分别在MSN培养基上分化胚、CMM上促胚成熟、CEM上茎伸长、MS上生根。【结果】在5×105个/mL的原生质体培养密度下,长出的都是致密型愈伤组织（能分化胚状体）,而在2×105个/mL的密度下培养长出的有致密型愈伤组织,也有空泡型愈伤组织（不能分化胚状体）。本试验共挑出1 479个致密细胞团,分化获得757个子叶胚,已再生完整植株186棵。【结论】本研究分离的原生质体产量和活性有较大提高,对前人所指出的瓶颈问题有所改进,原生质体再生植株效率有较大提高。     

鸭疫里默氏杆菌原生质体制备与再生的研究

以耐药标记的鸭疫里默氏杆菌TXRAl(CAd ,Elf)为亲本菌株,在DNase I始终存在的条件下,采用Lysozyme-EDTA法制备原生质体,然后在高渗琼脂平板上再生。系统地优化了影响原生质体制备及再生的各种条件,摸索出鸭疫里默氏杆菌TXRA1以Lysozyme 0．1 g／L作用20 min后补加EDTA至终浓度为0．01 mol／L继续作用45 min为最佳试验条件,并成功获得了92％的原生质体制备率和38．77％的再生率。