猪等孢球虫PCR诊断方法的建立

参照GenBank收录的Isospora suis 18SrRNA基因全序列(U97523),利用引物分析软件Oligo 6.57和Primer Premier 5.0设计了一对引物(上游引物:5''-tcctgcgagtactcatatgc-3'';下游引物:5''-gttcagc-tacgcataccttg-3''),首次扩增出猪等孢球虫分离株的18SrRNA基因序列,结合GenBank上登录的相关原虫序列,用DNAstar4.0软件比较其同源性,经Clustalx1.81序列比对,Paup4.0、Treeview3.0、Phylip种系发育关系软件分析后,证实该分离株为猪等孢球虫,并且河南不同地区之间的猪等孢球虫没有明显遗传差异。     

柔嫩艾美耳球虫江苏株SAG10基因的克隆及分析

根据Gen Bank中已发表的柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)SAG10基因序列,利用计算机软件设计1对引物,从E.tenella江苏株的第2代裂殖子中成功克隆出SAG10基因。将该基因与Gen Bank中国内外不同E.tenella分离株的SAG10基因进行比对,发现E.tenella江苏株与北京株的SAG10基因同源性最高,高达99%,其后依次为杨凌株、豪顿株。4种不同分离株SAG10基因的ORF之间有11个碱基不同,其中3个为无义突变,8个为有义突变。分析4种分离株SAG10基因推导蛋白质的亲水性、抗原指数、表面可及性发现,国内外不同E.tenella分离株SAG10蛋白的抗原性总体比较接近且很强,但国内不同分离株之间的抗原性更加接近,并优于国外的豪顿株,这可能是由于氨基酸突变引起蛋白质的空间构象和亲水性等发生变化而引起。将上述SAG10基因序列与复顶门原虫的其他相关SAGs基因序列进行遗传进化分析,发现Eimeria属球虫SAGs基因之间相对比较保守,且与犬新孢子虫(Neospora caninum)、N.hughesi、刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)的SAG基因之间同源性较低,与已有观点一致;但神经肉孢子虫(Sarcocystis neurona)的2条SAG1基因序列却与E.tenella的SAG1基因序列表现出更高的同源性,这与其他研究结论不符。     

沙地云杉内生真菌分布

[目的]明确沙地云杉内生真菌的种群分布。[方法]利用传统分离培养方法,分离、培养、鉴定沙地云杉内生真菌的种群组成。[结果]从沙地云杉各部位样品中共分离到内生真菌146株,其中有21株未产孢,经显微镜形态观察鉴定,产孢的125株内生真菌分属于21个属,其中交链孢属为优势属,分离频率为34.93%。[结论]沙地云杉不同树龄、不同部位分离获得的内生真菌在数量、分布和种群上存在一定差异。     

堆型艾美耳球虫cSZ1基因的克隆与分析

[目的]分析堆型艾美尔球虫cSZ1基因序列,为研制球虫疫苗提供候选抗原。[方法]根据堆型艾美尔球虫基因序列,设计合成引物,RT-PCR扩增堆型艾美尔球虫长春株cSZ1基因并测序。[结果]与GenBank中发表的堆型艾美尔球虫cSZ1基因序列相比,堆型艾美尔球虫长春株cSZ1基因发生了5个核苷酸变异,两者的核苷酸序列同源性为99.47%,两者编码区的核苷酸序列同源性为99.61%。堆型艾美尔球虫长春株cSZ1基因ORF内有2个变异位点。其中,A185G变异导致了所编码氨基酸由缬氨酸变为异亮氨酸。[结论]cSZ1基因编码蛋白可以作为球虫疫苗的候选抗原。     

重庆地区蚕豆叶部链格孢菌的鉴定及其生物学特性研究

[目的]对重庆地区危害蚕豆叶部的链格孢菌进行鉴定,并对其生物学特性进行研究。[方法]从重庆市分离得到蚕豆叶部链格孢属真菌16株,对其中代表性的2株进行形态学观察、分子鉴定和致病性测定,并对该病原菌的生物学特性进行研究。[结果]根据ITS和EF 2个基因序列的比对,明确2株菌分别属于链格孢(Alternaria alternata)和细极链格孢(Alternaria tenuissima)。2株病原菌菌丝在PDA培养基上生长最适温度为28℃,最适p H为7。[结论]该研究为重庆蚕豆链格孢病害研究提供参考。     

2016年江苏省部分猪场猪伪狂犬病原学监测与变异性分析

[目的]研究猪伪狂犬病毒在江苏省的遗传变异情况.[方法]对2016年1-12月江苏不同地区42家规模猪场采集或者送检的共2365份病料组织进行PCR检测,分析不同季节、猪场规模以及地区的检测结果,并把检测出的部分基因序列进行同源性分析.[结果]猪伪狂犬阳性样品364份,阳性率为15.4％;夏、秋两季的病原阳性率均低与春、冬两季;苏北以及苏中地区的病原阳性率高于苏南地区;不同规模的猪场病原阳性率随着猪场规模的扩大逐渐下降且趋势明显.11株分离株中PRV-6分离株与Barthak61疫苗株属于同一个分支.[结论]该研究可为江苏省乃至全国猪伪狂犬病的防控提供参考.     

新疆番茄生长及其果实加工过程中霉菌污染的监测

[目的]确定新疆番茄果实生长及其加工过程中的霉菌组成,了解不同加工番茄产地所分离霉菌的差异与分布特征以及是否有产毒霉菌污染.[方法]对番茄生长与加工过程中不同环节进行样品采集与霉菌分离,并根据菌落形态特征、显微特征、生理生化和ITS序列分析等方法对分离获得的霉菌进行鉴定.[结果]共分离鉴定45株霉菌,曲霉为优势菌17株,其次为青霉9株,镰孢菌6株,赤霉菌4株,木霉2株,其它类型霉菌7株.[结论]番茄生长土壤与番茄果实中均分离鉴定出产毒真菌黄曲霉菌和木贼镰孢霉,从番茄叶片中分离到产毒真菌尖孢镰孢菌.     

中国被毛孢高产孢菌株的筛选

[目的]获得高产孢的中国被毛孢菌株。[方法]对比5株中国被毛孢菌株的产孢率,并结合菌株在固体培养基上的菌丝生长速度、菌落半径、菌落形态及菌丝生物量等性状表现加以筛选。[结果]菌株7B和8B产孢率明显高于其他菌株,但菌丝生物量与其他菌株差异不明显。[结论]菌株7B和8B可作为生产分生孢子的优良中国被毛孢菌株。     

猪等孢球虫纯种株的建立及其生物学特性研究

从哺乳仔猪的腹泻粪样中分离出等孢球虫卵囊,感染仔猪建立球虫纯种株.通过卵囊形态结构观察与18S rRNA PCR鉴定,鉴定该球虫分离株为猪等孢球虫.将6只24日龄断奶仔猪分为2组,分别感染4×102和104个孢子化卵囊,观察仔猪的临床表现及虫株的潜伏期、显露期和卵囊产量.结果表明,感染4×102个卵囊后仔猪未出现腹泻症状,感染104个卵囊后仔猪出现腹泻且持续6 d.感染4×102个孢子化卵囊时,潜隐期为5 d,显露期为7 d,每个卵囊产出5.72×103个卵囊;感染104个孢子化卵囊时,潜隐期为5 d,显露期18 d,每个卵囊产出6.41×102个卵囊.由此可见,该株猪等孢球虫对仔猪具有致病性,可用于构建猪等孢球虫病动物模型及其疾病学研究.     

6株肠艾美耳球虫繁殖力的比较研究

[目的]为肠艾美耳球虫的早熟选育及兔球虫疫苗的研制提供理论依据。[方法]采用6个不同地区肠艾美耳球虫的孢子化卵囊经口接种45日龄无球虫兔,接种剂量为1×104个卵囊/只,并对6株肠艾美耳球虫的繁殖力进行比较。[结果]衡水株排卵量最多,张家口株次之,胶南株排卵量最少。睢宁株的排卵量接近胶南株,如皋株、通江株相近,在感染后第8.5～9天均有排卵,各虫株的排卵高峰期相似,第13天排卵量达到峰值,第21天接近0。[结论]不同地理株肠艾美耳球虫的排卵量不同,但排卵高峰相一致。     

河南省致病性猪源链球菌部分微生物学特性及耐药性研究

[目的]了解河南省猪链球菌病病原的微生物学特性及耐药性,为临床防治提供依据。[方法]从河南省不同地区猪场中疑似猪链球菌病的自然发病病例中分离到12株地方流行株,经形态染色、培养特性、生化特性以及致病性试验对其进行了初步鉴定和药敏试验。[结果]结果表明,12株猪链球菌中4株为C群,4株为D群,3株为E群,1株为未知群;分离株均对头孢类药物、磷霉素、氟苯尼考等高度敏感,而对红霉素、磺胺、链霉素等不敏感。[结论]该研究为了解河南省猪链球菌病的流行动态及综合防治提供了有力参考。     

河南省部分中小型猪场种公猪猪瘟野毒感染的分子流行病学调查

[目的]了解河南省部分中小型猪场公猪精液中猪瘟野毒的感染状况。[方法]应用RT-PCR方法对河南省10个中小型猪场的58份种公猪精液进行了猪瘟野毒感染情况的调查。[结果]7个猪场的猪瘟野毒检测结果呈阳性,占总检测场数的70%;10份精液的猪瘟野毒检测结果呈阳性,样品阳性率为17.24%。[结论]河南省大部分中小型猪场存在种公猪猪瘟野毒感染的现象,且感染状况较为严重。     

遵义市规模养猪场大肠杆菌的耐药性检测

[目的]掌握遵义市规模养猪场大肠杆菌的耐药情况,为贵州省动物源性细菌监测提供数据。[方法]采集遵义市规模养猪场猪肛门拭子和总排污池新鲜粪便(或污水棉拭子)样品335份,分离出阳性大肠杆菌。采用微量肉汤稀释法对分离的大肠杆菌进行耐药性检测。[结果]分离并鉴定到334株阳性大肠杆菌,分离的大肠杆菌对7种抗菌药物的耐药率依次为:磺胺间甲氧嘧啶钠土霉素恩诺沙星头孢噻呋氟苯尼考环丙沙星庆大霉素,多重耐药性主要集中在4耐、5耐、6耐和7耐。[结论]遵义市规模养猪场大肠杆菌的耐药性严重及多重耐药性正在恶化,且猪场总排污池大肠杆菌对各药物的耐药性皆高于猪肛门拭子。     

河南省部分猪场猪伪狂犬病免疫状况监测及分析

[目的]了解河南省部分猪场猪伪狂犬病免疫状况。[方法]应用酶联免疫吸附试验方法对河南省部分猪场送检的3 861份血清进行了抗体检测。[结果]血清学检测结果显示其平均阳性率为67.65%,母猪、公猪、育肥猪、保育猪和产房仔猪的平均阳性率分别为79.19%7、5.34%1、7.60%、40.78%和62.24%;其中2010年5月至2011年4月份的各月平均阳性率分别为63.76%7、1.26%6、2.36%、67.15%5、8.86%6、9.53%、61.36%、61.23%和74.41%6、7.66%7、0.76%、85.71%。[结论]河南省大部分猪场伪狂犬病的免疫水平不是特别理想。     

猪链球菌及其血清型的PCR检测

从广东省部分地区猪场采集疑似猪链球菌病病猪的扁桃体棉拭病料202份,用PCR方法检测棉拭样本培养物中猪链球菌（Streptococcussuis）及其主要致病血清型（1、2、7和9型）．检出阳性样品147份,检出率为72．8％．其中检出S．suis血清2型21份,检出率为12．9％;检出血清9型6份,检出率为3．0％;未检出血清7型和1型．此外,不同地区和不同发育阶段的猪,S．suis检出率和各血清型检出情况也存在较大差异．从而证实广东地区猪群中广泛存在S．suis呈地域性流行,并且是多种血清型共存．     

西杂肉牛球虫病的诊断与虫种鉴定

[目的]为肉牛球虫病的诊断和防治提供依据。[方法]通过对新乡市某肉牛场患出血性肠炎的西杂肉牛进行临床检查,粪便直接涂片检查和饱和食盐水漂浮检查,并对粪样中分离的球虫卵囊及其孢子化卵囊进行形态学观察和虫种鉴定。[结果]在粪便中检出大量球虫卵囊,球虫经鉴定分别为艾美耳属的牛艾美耳球虫、邱氏艾美耳球虫、巴西艾美耳球虫、巴克朗艾美耳球虫和椭圆艾美耳球虫,确诊该牛场的出血性肠炎是由多种牛球虫混合感染引起的牛球虫病,其中,牛艾美耳球虫和邱氏艾美耳球虫为该肉牛场的优势种。[结论]临床检查、粪便实验室检查和虫种鉴定是诊断肉牛球虫病的一套简便实用方法。     

江苏丹阳等县猪球虫调查报告

本文报导了江苏省丹阳等三县猪球虫的种类以及不同年龄猪的球虫感染率。共查276头猪,球虫阳性的95头,阳性率为34.4％。从276头不同年龄的猪共检到1科2属11种球虫卵囊,其中艾美尔属Eimeria9种:猪艾美尔球虫E.suis,蒂氏艾美尔球虫E.debiecki,光滑艾美尔球虫E.cerdonis,粗糙艾美尔球虫E.scabra,四川艾美尔球虫E.szechuanensis,豚艾美尔球虫E.porci,最小艾美尔球虫E.perminuta,新蒂氏艾美尔球虫E.neodebrleki,有刺艾美尔球虫E.spinosa。等孢属I sospora两种,即猪等孢球虫I.suis,阿拉木图等孢球虫I.almataensis。其中猪艾美尔球虫,光滑艾美尔球虫,豚艾美尔球虫,最小艾美尔球虫,新蒂氏艾美尔球虫,有刺艾美尔球虫和猪等孢球虫7种为国内首次报道。     

河南省部分地区规模化猪场繁殖障碍性疫病的血清学调查

[目的]了解河南省部分地区规模化养猪场繁殖障碍性疫病的流行情况,为有目的、有重点地开展相应的猪繁殖障碍性疫病免疫预防工作提供参考。[方法]对河南部分猪场送检于河南农业大学动物疫病检测诊断中心的血清进行监测,其中6 825、2 609、1 177、123和53份血清分别用于检测猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征、猪伪狂犬病、猪细小病毒病和衣原体病抗体。[结果]血清学监测结果显示,血清中猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征、猪伪狂犬病、猪细小病毒病和衣原体病相应抗体阳性率分别为63.28%、61.44%、25.49%、39.84%、5.66%。[结论]河南省部分地区猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征、猪细小病毒病的防疫工作亟待加强,猪伪狂犬病的防治需要进一步强化,衣原体病已得到有效控制。     

湖北省高热病猪链球菌的分离鉴定和对小鼠的致病性研究

 【目的】从湖北省不同地区的高热症病例猪的心血、肝、淋巴结、肾和肺等分离出11株链球菌,进行血清型、毒力基因分布和病理学的初步研究。【方法】通过ATB自动生化鉴定系统Rapid ID 32 STREP链球菌鉴定、PCR分型、毒力基因的PCR检测及动物试验对分离菌株进行试验。【结果】11株均为猪链球菌,其中1株为7型,2株为9型,另8株为其它型,没有1型和2型。对11株猪链球菌的mrp、epf、sly、orf2、fbps、gdh6种毒力基因的分布情况进行PCR检测及动物试验表明：致病性和致死性较强的菌株毒力基因表型多为epf+orf2+fpbs+gdh+,显示除mrp、sly外,其它毒力因子也与菌株毒力相关。病理学变化表明急性死亡多表现为急性败血症症状,全身各组织器官广泛出血,以及肺炎、肾炎,脾脏淤血水肿和淋巴结脓肿。【结论】湖北省存在7型和9型的猪链球菌感染,猪链球菌在高热症中具有一定致病作用。