丹参酮ⅡA对增生性瘢痕成纤维细胞凋亡的作用

目的：通过对天然药物丹参酮ⅡA对增生性瘢痕成纤维细胞凋亡作用的研究,以期寻找新的治疗病理性瘢痕的有效药物。方法：以四甲基偶氮唑（MTT）法、流式细胞术（FCM）和特异性荧光染色法检测丹参酮ⅡA对成纤维细胞增殖和凋亡的影响。结果：丹参酮ⅡA对成纤维细胞的增殖具有显著的抑制作用．且呈现浓度和时间依赖性。采用流式细胞术和特异性荧光染色法检测凋亡指数,均呈剂量依赖性增高（P〈0．01）。结论;丹参酮ⅡA对瘢痕成纤维细胞的增殖具有显著的抑制作用．并且能够诱导其发生凋亡。     

半边旗提取物5F对人病理性瘢痕成纤维细胞增殖的影响

目的：研究半边旗活性成分5F对人病理性瘢痕成纤维细胞增殖的影响。方法：将不同浓度5F作用于体外培养的人病理性瘢痕成纤维细胞，检测MTT及LDH值，用免疫组织化学法检测用药前后细胞核内增殖核抗原(prolife rating cell nuclear antigen，PCNA)的表达。结果：5F在10～120mg／L浓度范围对病理性瘢痕成纤维细胞呈剂量依赖性增殖抑制，LDH值在0～40mg／L浓度范围内无明显改变，PCNA的表达在5F作用后明显减弱。结论：5F在体外能明显抑制病理性瘢痕成纤维细胞增殖，浓度在40mg／L范围内不引起细胞坏死性改变。     

重组Runx3腺病毒联合顺铂增强对肝癌细胞HLE增殖的抑制作用

目的：探讨腺病毒介导的Runx3基因（Ad—Runx3）与化疗药物顺铂（cisplatin,DDP））联合应用对肝癌细胞HLE增殖的抑制效果。方法：通过Ad—Runx3感染肝癌细胞HLE,用Ad—Runx3联合化疗药物顺铂处理培养的肝癌细胞HLE,利用Western-blot法检测RuNX3在肝癌细胞中的表达,MTT法检测细胞增殖抑制率。结果：Ad-Runx3感染HLE细胞48h后,RuNX3高效表达。MTT结果显示,IOOMOIAd—Runx3与6．25mg／LDDP联合应用5d后,HLE细胞增殖抑制率达（92．46±1．13）％,显著高于单用Ad—Runx3组的（59．28±1．37）％和DDP组的（46．37±2．51）％（P〈0．05）。结论：Ad—Runx3与DDP联合应用能显著提高对肝癌细胞HLE增殖的抑制作用。     

半边旗5F对瘢痕成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

目的 :研究天然药物半边旗 5 F对瘢痕成纤维细胞的作用 ,以期寻找新的治疗病理性瘢痕的有效药物。方法 :以四甲基偶氮唑盐 (MTT)方法和吸光度检测法及逆转录聚合酶链反应 (RT- PCR)法测定半边旗 5 F对成纤维细胞增殖和培养基中的胶原含量以及 、 型前胶原 m RNA表达的影响。结果 :半边旗 5 F对成纤维细胞的增殖具有显著的抑制作用 ,还能显著降低培养基中可溶性胶原的含量 (P<0 .0 1 )。上述抑制作用呈现药物浓度和作用时间依赖性。采用 RT- PCR法对 、 型前胶原的 m RNA检测显示随着药物质量浓度增高前两者的表达量降低。结论 :半边旗 5 F对瘢痕成纤维细胞的增殖和胶原合成具有显著的抑制作用 ,为寻找有效治疗病理性瘢痕的药物提供了新的思路     

复方酸制剂体外抗新城疫病毒试验

[目的]探讨复方酸制剂体外抗新城疫病毒（NDV）的活性,为研制新型抗NDV制剂提供理论依据。[方法]采用鸡胚成纤维细胞（CEF）培养法,观察细胞病变（CPE）,并用噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞活性,计算病毒抑制率,评价复方酸制剂的体外抗NDV作用。[结果]随着复方酸制剂浓度的增加,CPE逐渐减弱,病毒抑制率明显升高,当浓度为1.0mg/ml时,病毒抑制率可达70.04%。[结论]复方酸制剂在体外具有明显的抑制NDV增殖作用。     

亚砷酸对人胰腺癌PANC-1细胞增殖及RASSFIA基因甲基化的影响

目的探讨亚砷酸对人胰腺癌PANC-1细胞增殖及RAS相关结构域家族基因1A（RASSHA）甲基化的影响。方法PANC-1细胞用不同浓度亚砷酸处理,采用MTT法检测细胞增殖,甲基化特异性PCR（MSV）法检测RASSFlA基因甲基化情况。结果随着亚砷酸浓度增加（1．2～4．8μmol／L）和作用时间延长,PANC-1细胞抑制率逐渐增加（P〈0．05）。PANC－1细胞中RASSFlA基因表现为高甲基化状态,但其甲基化随亚砷酸浓度增加而逐渐减弱。结论亚砷酸对PANC－1细胞增殖的抑制作用具有时间和剂量依赖性,并通过RASSFlA基因的去甲基化起作用。     

PM2．5对大鼠血管平滑肌细胞PCNA、VCAM-1表达及增殖的影响

目的观察大气细颗粒物（PM2．5）对培养的大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）增殖细胞核抗原（PCNA）、血管细胞黏附分子-1（VCAM-1）表达及增殖的影响,了解其可能的作用机制。方法采集湛江市区大气中的PM2．5,以10、20、50、100、200mg／L剂量染毒培养的大鼠VSMC24h后,观察PM2．5对VSMC的PCNA、VCAM-1表达（免疫组化法）及增殖（MTT法）影响。结果在10-200mg／L范围内,随着染毒质量浓度增加,VSMC的PCNA水平从（16．67±2．58）上升到（58．00±8．25）（F=82．23,P〈0．01）,VCAM-1水平从（15．83±2．32）上升到（60．83±2．56）（F=258．63,P〈0．01）,MTT值从（0．49±0．067）增加到（0．72±0．025）（F=27．98,P〈0．01）。结论PM2．5促进体外培养的VSMCPCNA、VCAM-1表达,刺激VSMC增殖,在10-200mg／L质量浓度范围内具有剂量依赖性。     

供核细胞来源对猪克隆胚胎发育的影响

为研究不同组织来源的供核细胞对猪体细胞核移植胚胎发育能力的影响,分别采用颗粒细胞、耳成纤维细胞和尾成纤维细胞作为供核细胞,移入体外成熟的猪去核卵母细胞中形成重构胚,培养后对比其卵裂率和囊胚率。结果表明：以耳成纤维细胞作为供核细胞的重构胚的囊胚率最高,为17．8％,显著高于颗粒细胞（11．4％）（P〈0．05）。在卵裂率方面,两者无显著差别,分别为65．6％和61．9Voo（P〉o．05）。猪尾尖成纤维细胞的发育能力最差,卵裂率仅为20．2％且未获得囊胚,与其它两组差异显著（P〈O．05）。因此,耳组织来源的成纤维细胞作为供核细胞组织来源丰富且细胞易于传代和保存,以此为供核细胞的重构胚发育能力强,适合作为供核细胞。     

Caffeoyl Glycoside对小鼠免疫细胞功能的影响

本实验室从胡黄连根茎分离到1，6-di-O-caffeoyl-β-D-glucopyranoside单体Caffeoyl Glycoside（CG），体外试验测定其对小鼠免疫细胞功能的影响。通过MTT法检测CG对Balb／c小鼠脾淋巴细胞增殖，NK细胞对K562细胞杀伤活性的影响，以及小鼠腹腔巨噬细胞（PMφ）能量代谢水平；CG对PMφ吞噬中性红能力的影响。CG在一定剂量范围内单独或者协同非特异性丝裂原（ConA或LPS）作用均能够显著增强小鼠脾淋巴细胞、PMφ的增殖能力（P〈0．05或P〈0．01），CG单独作用就能显著提高NK对K562细胞的杀伤活性（P〈0．05或P〈0．01）。CG在体外对小鼠主要免疫细胞的增值和功能方面具有显著的促进作用（P〈0．05或P〈0．01）。研究结果显示CG具有特异性与非特异性的免疫增强作用。     

cyclinD1在增生性瘢痕不同时期的表达及意义

目的：了解cyclinD1在增生性瘢痕形成过程中的作用。方法：应用免疫组织化SP法检测不同时期增生性瘢痕和正常皮肤组织成纤维细胞中cyclinD1的表达。结果：随着增生性瘢痕的发展．增生性瘢痕成纤维细胞中的cyclinD1表达呈由强至弱的变化;正常皮肤成纤维细胞中cyclinD1的表达呈阴性。结论：cyclinD1可能在增生性瘢痕形成的早期发挥重要作用。     

柴胡皂甙-d对人肝癌HepG2细胞增殖及细胞周期的影响

目的 探讨柴胡皂甙-d(SSd)对人肝癌HepG2细胞增殖和细胞周期的影响.方法 (1)常规培养人肝癌HepG2细胞;(2)噻唑蓝(MTT)实验观察不同质量浓度SSd处理HepG2细胞72 h后以及10mg/L的SSd作用HepG2细胞不同时间对HepG2细胞生长指数的影响;(3)流式细胞术(FCM)检测SSd处理HepG2细胞48h后细胞周期的分布.结果 SSd能明显抑制HepG2细胞的增殖,以10mg/L的SSd作用48h的抑制作用最明显.FCM检测显示SSd作用48h后实验组处于S期的细胞数较对照组明显减少(P<0.01).结论 SSd对人肝癌HepG2细胞的体外增殖具有抑制作用,并能使细胞周期中处于S期的细胞数减少.     

西兰苔叶黄酮体外抗癌活性的研究

[目的]探讨西兰苔叶黄酮粗提物（EOF）的抗癌机制。[方法]通过四甲基偶氮唑盐（MTT）试验检测EOF对细胞生长的抑制率,并用流式细胞仪采用Annexi-V/PI双染法进行细胞凋亡检测,以探讨西兰苔叶EOF对癌细胞增殖的抑制作用及其诱导的癌细胞凋亡机制。[结果]西兰苔叶EOF对SW480、HepG2、Hela和A549这4种细胞的生长均表现出抑制作用,抑制率随药物浓度的增加而增大,呈明显的量效关系,其50%抑制浓度（IC50）值分别为88.14、99.65、104.43、79.77μg/ml,对SW480细胞的作用最为明显。通过Annexi-V/PI双染法流式细胞仪测得其浓度为30、60、80、120、160μg/ml时,诱导的SW480细胞的早期凋亡率分别为12.74%、16.41%、19.61%、28.28%和50.66%。[结论]西兰苔叶EOF是通过抑制增殖和诱导细胞凋亡来发挥对肿瘤的治疗作用的。     

蒲黄醇提取物对C57BL／6荷瘤小鼠免疫功能的影响

[目的]研究蒲黄醇提物对C57BIM6荷瘤小鼠免疫功能影响。[方法]通过建立Lewis肺癌小鼠移植瘤动物模型,以抑瘤率为指标考察蒲黄醇提物的体内抗肿瘤活性,分别测定其抑瘤率、胸腺指数和脾脏指数;四氮唑盐（MTY）法对荷瘤小鼠脾淋巴细胞增殖活性进行测定;ELISA法测定荷瘤小鼠血清中白细胞介素一2（IL-2）、肿瘤坏死因子-a（TNF-a水平。[结果]蒲黄醇提取物100mg／kg·d组对肿瘤生长有明显的抑制作用（P〈0．01）,其抑瘤率为48．3％,蒲黄醇提物三个剂量组均能提高荷瘤小鼠的胸腺指数和脾脏指数。同时100和200mg／kg·d组能显著提高荷瘤小鼠脾淋巴细胞的增殖能力和荷瘤小鼠血清中IL-2、TNF—ol的水平。[结论]蒲黄醇提物具有提高荷瘤小鼠体液免疫和细胞免疫的作用。     

氢化可的松对小鼠T淋巴细胞增殖的抑制作用

[目的]探讨氢化可的松对小鼠T淋巴细胞增殖功能的影响。[方法]用淋巴细胞分离液无菌制备小鼠脾淋巴细胞,于RPMI1640的完全培养基中加入ConA后进行转化。用流式细胞仪检测T细胞活化分子CD25和CD69及其共表达率。将转化的淋巴细胞分成不加氢化可的松的对照组和加入不同浓度的氢化可的松组,在各时间点取样计数,绘制其生长曲线。[结果]经ConA刺激3 d的T细胞上CD25和CD69分子及其共表达率最高,分别达73.5%、58%和32%。生长曲线显示,各组细胞在加氢化可的松后第2 d达到对数生长期,10-5、10-6、10-7mol/L浓度的氢化可的松对活化小鼠T淋巴细胞增殖都有抑制作用,但各浓度组间无显著差异（P〉0.05）,而与对照组相比有显著差异（P〈0.05）。[结论]在一定的浓度范围内氢化可的松对小鼠T淋巴细胞的增殖具有抑制作用,这为细胞移植免疫耐受的诱导提供了试验依据。     

天花粉蛋白对A549细胞增殖的影响

目的:观察天花粉蛋白对人肺腺癌细胞株A549生长增殖的影响。方法:应用MTT法检测天花粉蛋白对A549细胞生长增殖的影响。结果:经天花粉蛋白处理后A549细胞生长明显受抑,并呈一定的剂量时效依赖性。结论:天花粉蛋白在体外能抑制A549肺腺癌细胞的生长繁殖。     

慢病毒载体介导成纤维细胞高效稳定表达绿色荧光蛋白

 试验尝试建立稳定表达外源基因的人成纤维细胞系。取成年男性包皮皮肤的皮下组织,分离培养人皮肤成纤维细胞,分别采用脂质体和慢病毒载体介导转染人皮肤成纤维细胞表达绿色荧光蛋白。结果显示,来自成年人包皮皮下组织的成纤维细胞呈梭形,具有快速的增殖和稳定的生长性能。脂质体介导转染的人皮肤成纤维细胞绿色荧光蛋白表达不稳定,阳性细胞表达率低,转染后的人成纤维细胞变得更为细长,细胞生长速度降低。慢病毒载体介导人皮肤成纤维细胞高效稳定表达绿色荧光蛋白,转染后细胞生长性能和形态没有变化,经过多次传代和冻存复苏对人皮肤成纤维细胞绿色荧光蛋白的表达没有影响,通过流式细胞仪对慢病毒介导表达绿色荧光蛋白的人皮肤成纤维细胞检测显示,绿色荧光蛋白表达阳性率为99.85%,并且表达绿色荧光蛋白的人皮肤成纤维细胞细胞均一程度为76.05%。试验证实了慢病毒载体能够高效稳定介导人皮肤成纤维细胞表达绿色荧光蛋白。     

长大二元杂交猪胎儿成纤维细胞的生物学特性

【目的】研究长大二元杂交猪胎儿成纤维细胞的生物学特性。【方法】采用室温消化法从妊娠30d的长大二元杂母猪胚胎中分离胎儿成纤维细胞,利用MTT法检测第5、10、15、25、35、45、60、70代胎儿成纤维细胞的增殖能力,通过倒置显微镜观察不同代数的细胞形态,流式细胞仪分析细胞周期变化,DAPI染色观察细胞核染色质的形态以及衰老相关β-葡糖苷酶活性的染色测定等方法来判断细胞的衰老程度。【结果】①采用消化液室温消化法成功分离到猪胎儿成纤维细胞,细胞具有典型的成纤维细胞形态。②猪胎儿成纤维细胞于生长初期1～6d呈对数增长,此后进入平台期。【结论】随着细胞代数的增加,细胞的增殖能力虽有所下降,但仍然呈稳定的增长状态,各代次猪胎儿成纤维细胞生长良好。     

枸杞多糖对小鼠精原干细胞增殖作用的影响

[目的]观察枸杞多糖(LBP)对体外培养的小鼠精原干细胞的增殖作用。[方法]选2～5日龄的ICR小鼠,采用多次贴壁法纯化精原干细胞培养3 d,加入不同浓度的LBP,利用MTT比色分析法和Brdu增殖细胞标记法,检测不同浓度LBP对体外培养精原干细胞增殖的影响。[结果]与对照相比,用LBP处理后的精原干细胞的细胞数量明显增多,高浓度的LBP(200μg/ml)对精原干细胞的增殖有明显的促进作用(P<0.01)。[结论]LBP能够促进精原干细胞的增殖。     

大花君子兰总生物碱抗肿瘤作用的研究

采用MTT法观察大花君子兰总生物碱(简写为TACMR)对体外培养的人肺癌细胞NCI-H446、人胃癌细胞SGC-7901、人乳腺癌细胞MCF-7和人肝癌细胞SMMC-7721 4种细胞株的增殖抑制作用;用小鼠移植性肿瘤法检测TACMR对小鼠H22肝癌的生长抑制作用,并通过脾指数和胸腺指数等指标综合考察TACMR对肿瘤小...