苏云金杆菌cryⅠA（a）,cryⅠA（b）和cryⅠA（c）基因型的PCR？…

根据苏云金杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）杀虫晶体蛋白基因的结构特点,合成了ｃｒｙⅠ基因５‘端特异引物和３’端共同引物,利用ＰＣＲ扩增,使不同基因引物产生不同长度的扩增产物。通过扩增产物片段的分子量大小来确定菌株所含杀虫基因类型。本研究对福建农业大学生物技术中心分离和保存的２０个菌株进行了ｃｒｙⅠＡ（ａ－ｃ）基因类型的ＰＣＲ鉴定。     

豌豆品种(系)的RAPD分析

以１８个豌豆栽培品种及野生种材料为ＤＮＡ样品来源,采用７个１０碱基随机引物进行ＰＣＲ扩增。基因组ＤＮＡ的多态性,利用ＲＡＰＤ标记鉴定其品种间及品种内的遗传变异性。７个引物共扩增出６６位点,其中多态性位点５６个,占８４．８％。每个ＰＣＲ扩增产物分别以０和１记录存在与否。扩增产物间成对比较产生非相似性矩阵（Ｊａｃｃａｒｄ相似系数表）,此矩阵用于构建遗传相似性的树状系图谱（遗传树）。通过遗传树的构建将１０个Ｐ．ｓａｔｉｖｕｍ与８个Ｐ．ｆｕｌｖｕｍ群居为截然不同的两大组。     

BtMP—342菌株的生物学特性分析及毒力测定

１９９２年，从自然死亡尺蠖幼虫体内分离出ＢｔＭＰ－３４２菌株，经对落叶松毛虫室内外生测证明，该菌株是高毒力的优良菌株。１９９５年７月－８月期间，采用ＰＣＲ技术分析了ＢｔＭＰ－３４２菌株特异性，该菌株含有ＣｒｙＩＡａ、ＣｒｙＩＡｃ、ＣｒｙⅡＡ、ＣｒｙⅡＢ以及ＣｒｙＶ等五种毒蛋白基因。质粒电泳图谱分析表明，ＢｔＭＰ－３４２菌株由９个质粒构成，其中ＣｒｙⅠＡａ和ⅠＡｃ基因位于１５１．３Ｍｄ和１４６．８Ｍ     

利用RAPD标记鉴定豌豆栽培品种(P.sativum)和野生种(P.fulvum)

随机扩增多聚链ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）是基于聚合酶反应链（ＰＣＲ）的扩增反应。笔者应用ＲＡＰＤ技术区别Ｐ．ｓａｔｉｖｕｍ和Ｐ．ｆｕｌ－ｖｕｍ１２个品（种）系,并估测这些品（种）系之间的遗传多样性,用１２个１０－ｍｅｒ核苷酸引物扩增出１６８条染色带。估测遗传类型中遗传相似性是基于扩增产品中成对方法比较,遗传树的构建是利用无重量成组方法的平均数（ＵＰＭＧＡ）进行的。７个Ｐ．ｓａｔｉｖｕｍ栽培品种和５个Ｐ．ｆｕｌｖｕｍ材料群集为截然不同的两大组。ＲＡＰＤ的应用将为育种提供豌豆种间遗传关系资料。ＲＡＰＤ－ＰＣＲ鉴定出的物种特殊的强染色体带可以发展为稳定的物种特殊标记用于基因渗入研究。     

苏云金芽孢杆菌8010cryIA（b）基因的PCR鉴定

苏云金芽孢杆菌８０１０ｃｒｙＩＡ（ｂ）基因的ＰＣＲ鉴定ＰＣＲＡｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｆｏｒＩｄｅｎｔｉｆｙｉｎｇｃｒｙＩＡ（ｂ）ＧｅｎｅｏｆＢａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ８０１０￥／／近年来，国外已陆续有人用ＰＣＲ技术对苏云金芽孢杆菌杀...     

云南烟草花叶病毒54KD基因的分离,克隆及序列分析

从云南省弥勒县采集典型病株接种蔓陀萝，植斑分离，经免疫电镜（ＩＥＭ）鉴定为ＴＭＶ（Ｔｏｂａｃｃｏ ｍｏｓａｉｃ ｖｉｒｕｓ），在红花大金元品种中以ＴＭＶ普通株作对照进行致病力测定，确定为强毒株系。以烟草花叶病毒ＲＮＡ云南强毒株系为模板。根据国内外研究结果自行设计、合成寡核苷酸引物，通过ＲＴ－ＰＣＲ体外扩增，Ｅ．ｃｏｌｉ菌株ＤＨ５ａ克隆，获得了云南烟草５４ＫＤ（ＴＭＶ复制酶）全基因片段，顺序分析表明     

害虫对转Bt基因植物的抗性

自１９８７年，比利时的Ｍｏｎｔａｇｕ实验室首次获得转Ｂｔ基因烟草植株后〔使用的基因为ｃｒｙⅠＡ（ｂ）〕，美国的Ａｇｒａｃｅｔｕｓ公司和Ａｇｒｉｇｅ ｎｅｔｉｃ公司也分别获得了转Ｂｔ基因抗虫烟草植株〔使用的基因分别是ｃｒｙⅠＡ（ａ）和ｃｒｙⅠＡ（ｃ）〕...     

PCR技术在快生型大豆根瘤菌菌株鉴别上的应用

以基因外重复的回文因子（ｒｅｐｅｔｉｔｉｖｅｅｘｔｒａｇｅｎｉｃｐａｌｉｎｄｒｏｍｉｃ，ＲＥＰ）和肠菌基因间重复一致序列（ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｌｒｅｐｅｔｉｔｉｖｅｉｎｔｅｒｇｅｎｉｃｃｏｎｓｅｎｓｕｓ，ＥＲＩＣ）的碱基顺序设计出的引物为引物，用ＰＣＲ（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ）技术分别扩增了８株快生型大豆根瘤菌（Ｓｉｎｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍ）的ＤＮＡ，得出了具有菌株特     

透明颤菌血红蛋白(VHb)基因合成及原核生物中的效应

以“连续延伸ＰＣＲ基因合成法”（姚泉洪１９９９），按植物偏爱密码子，合成了全长４４１ｂｐ的透明颤菌血红蛋白（Ｖｉｔｒｅｏｓｃｉｌｌａ ｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎ ＶＨｂ）基因。此方法不需用连接酶，而用高保真ＤＮＡ聚合酶ｐｗｏ及７个长度为９０ｂｐ左右的长寡核酸引物，经一次ＰＣＲ反应即完成了全长为４４１ｂｐ基因合成。ＰＣＲ产物经ＢａｎＨＩ和ＳａｃＩ酶切，克隆入ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ载体，合成的ＶＨｂ基因经克隆和测序证实与设计一致。与报道的ＶＨｂ基因相比，核苷酸改动了９８个。Ｇ＋Ｃ含量由原来的４５．３％提高到４７．８％。将该基因克隆入庆大霉素抗性基因启动子后，构建表达载体ｐＹＰ２００１ｈ（ＶＨｂｐ）。将其转入大肠杆菌菌株ＤＨ５α，在氧胁迫、缺乏、充足等三种情况下，绘制其生长曲线，探讨了合成ＶＨｂ基因在原核生物中的效应。结果     

用PCR-差别筛选法分离和克隆水稻抗瘟性相关基因(英文)

以水稻抗瘟性近等基因系Ｈ７Ｒ和Ｈ７Ｓ为材料,采用ＰＣＲ－差别筛选（ＰＣＲｂａｓｅｄｄｉｆｅｒ－ｅｎｔｉａｌｓｃｒｅｅｎｉｎｇ）的方法分离和克隆水稻受稻瘟病菌诱导的抗性相关基因．第一轮筛选获得４２个差异表达的ｃＤＮＡ克隆,经ＰＣＲ扩增,转膜,反向Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交后,得到１２个阳性ｃＤＮＡ克隆．本文对ＰＣＲ－差别筛选的优缺点以及进一步的鉴定工作亦作了讨论．     

芥菜遗传多样性的RAPD分析

随机扩增多态性ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）是一种新的分子标记技术,利用ＲＡＰＤ标记对芥菜（Ｂｒａｓｓｉｃａ ｊｕｎｃｅａ Ｃｏｓｓａ）１６个变种的遗传多样性进行了分析,从６０个１０ｂｐ随机引５物中筛选出２７个有效的,这２７个有效引物共扩增出３３６条ＤＮＡ带,其中２７５条为多态性带,占总数的８１．８５％,平均每个引物扩增出的ＤＮＡ带数为１２．４４,不同引物扩增出各自不同的ＤＮＡ指纹图谱,大部分图谱均有特征或特     

甘蔗白条病(Xanthomonas albilineans)PCR,ELISA,DIA检验技术研究(英文)

应用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）技术检测甘蔗白条病（Ｘ．ａｌｂｉｌｉｎｅａｎｓ）蔗茎无症带菌样品和纯培养及总ＤＮＡ;并以改良半选择性培养基（ｍＸＡＭ）定量．比较了ＰＣＲ,ＥＬＩＳＡ,ＤＩＡ的检测效率和可靠性．表明ＰＣＲ能够特异性检出白条黄单胞包括标准菌株３３９１５ＡＴＣＣ和血清型Ｉ,Ｉ等１９个菌株．但是不能扩增其它５个分离自蔗茎的腐生黄单胞和１３个其它属种的植物细菌．能够检出少至１０ｐｇ靶细菌总ＤＮＡ或２０个活细菌．ＰＣＲ检测灵敏度较ＥＬＩＳＡ和ＤＩＡ高１００～１０００倍．田间样品检测结果与实际发病符合度为９３．４６％．这一分子检测技术适用于国内外甘蔗种质资源交换和口岸检疫以及病害流行学研究     

分子标记的类型、特点及在育种中的应用

介绍了分子标记的４ 个系统：①非ＰＣＲ 标记系统;②以ＲＡＰＤ 为代表的单引物ＰＣＲ 系统;③由两个引物引起的选择性扩增片段多态性（ＡＦＬＰ） ;④以ＳＳＲ（ 或ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ） 为代表的两个引物的ＰＣＲ 系统,以及它们各自的特点。同时还提出了在具体应用时应从５ 个方面考虑、选择合适的标记系统。     

桃ACC氧化酶cDNA片段扩增及其克隆和鉴定

采用“富集ＰＣＲ”方法,用单个特异引物和ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）１５从桃伤处理叶片ｃＤＮＡ 中扩增出特异性片段⒚将扩增产物分离并克隆筛选到１３ 个重组克隆,其中有６ 个克隆能与ＡＣＣ氧化酶基因组ＤＮＡ 杂交,对其中一个阳性克隆ｐＧＥＭＡＣ１２ 作酶切分析,发现其酶切图谱与已报道的桃果实成熟相关的ＡＣＣ氧化酶ｃＤＮＡ 基本一致⒚ＤＮＡ 序列分析表明,插入片段两端ＤＮＡ 序列均是 ５＇端特异引物序列,表明是由５＇端特异引物单个引物扩增出来,全序列分析表明插入片段全长８３３ ｂｐ,是ＡＣＣ 氧化酶ｃＤＮＡ 基因编码区的一部分,５＇端缺少启始密码子ＡＴＧ,３＇端缺少部分编码序列和终止密码子ＴＡＡ⒚     

马立克氏病病毒gB基因的重组痘苗质粒构建

根据马立克氏病病毒（ＭＤＶ）ｇＢ基因序列设计ＰＣＲ引物,以ｇＢ质粒为模板,扩增出ＭＤＶｇＢ基因５’端到３’端３８８ｂｐ的ＤＮＡ片段。用ＥｃｏＲⅠ和ＸｂａⅠ双酶消化ＰＣＲ产物,将其克隆入ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ质粒,构建中间质粒Ⅰ;用ＸｂａⅠ消化ｇＢ质粒,切出ＭＤＶｇＢ基因ＸｂａⅠ片段,并正向克隆入中间质粒Ⅰ的ＸｂａⅠ位点,将ＭＤＶｇＢ基因１３７ｂｐ的ＰＣＲ产物与其ＸｂａⅠ片段正向连接,构建中间质粒Ⅱ用ＥｃｏＲⅠ调出中间质粒Ⅱ中的ＭＤＶｇＢ基因,正向克隆入痘苗病毒表达载体ｐ１６启动子下游,构建ＭＤＶｇＢ基因表达质粒ｐ１６－ＭＤＶｇＢＭＤＶｇＢ基因重组痘苗表达质粒的成功构建,为下一步进行重组病毒的构建及ＣＴＬ应答的深入研究奠定了基础     

桃花种质亲缘演化关系的研究——RAPD分析

利用３６个１０碱基随机引物首次对７个桃花（Ｐｒｕｎｕｓ ｐｅｒｓｉｃａ）近缘种和３０个品种进行ＲＡＰＤ反应。对选出１０个引物扩增出的具有多态性、可重复的、清晰的５６条带进行数据统计分析、ＵＰＧＡＭ聚类结果表明：毛桃（Ｐｒｕｎｕｓ ｐｅｒｓｉｃａ）和新疆桃（Ｐ．ｆｅｒｇａｎｅｎｓｉｓ）之间具有很近的亲缘关系,并与桃花品种间亲缘关系最近;寿星桃、垂枝在品种在聚类图上分别较早地聚合在一起,表明其类内具有     

新城疫病毒Ulster株血凝素-神经氨酸酶基因的克隆与鉴定

新城疫病毒Ｕｌｓｔｅｒ株经ＳＰＦ鸡胚增殖和超速离心纯化后，以酚－ＳＤＳ法提取其基因组ＲＮＡ，作为反转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）的模板。根据其已发表的Ｆ和ＨＮ基因核苷酸序列，合成一个长为３０ｍｅｒ的寡核苷酸（位于Ｆ基因内）和一对分别长为２８、３０ｍｅｒ的寡核苷酸（位于ＨＮ基因两侧）分别作为反转录引物和ＰＣＲ引物。扩增反应产物经琼脂糖凝胶电泳分析，出现一条长为１．９３ｋｂ的特异性条带，与预期相符。并将此特异性条带克隆入质粒载体ｐＧＥＭ－３Ｚｆ（＋）中，并经限制性核酸内切酶分析（ＲＥＡ）。ＲＴ－ＰＣＲ和ＲＥＡ结果证实其为新城疫病毒Ｕｌｓｔｅｒ株的血凝素－神经氨酸酶基因。     

TMV蚕豆株系CP基因及3′端非编码区序列分析与表达

根据烟草花叶病毒Ｕ１株系ＴＭＶ－Ｕ１序列，人工合成引物，通过ＰＣＲ扩增并克隆了烟草花叶病毒蚕豆株系（ＴＭＶ－Ｂ）的外壳蛋白（ＣＰ）基因和３′端非编码区．ＤＮＡ全序列测定结果表明，外壳蛋白基因全长４５９个碱基，编码１５１个氨基酸，３′端非编码区全长２２４个碱基．与ＴＭＶ－Ｕ１株系相比，ＴＭＶ－Ｂ仅在ＣＰ基因上有一个碱基缺失，并导致ＣＰ基因提前终止，使其编码的氨基酸少７个．将ＣＰ基因及３′端非编码区插入ｐＧＥＭＥＸ－１的Ｔ７基因１０中，转入Ｅ．ｃｏｌｉ后诱导表达，聚丙烯酰胺凝胶电泳分析呈现一特异的蛋白带．Ｗｅｓｔｅｒｎ免疫检测证明，该特异带与ＴＭＶ抗血清呈阳性反应．将ＣＰ基因正向插入植物表达载体ＰＢⅠ１２１中，置于花椰菜花叶病毒３５Ｓ启动子控制之下，获得了植物表达载体ｐＺＬ５     

松材线虫和拟松线虫种间及种下群体的RAPD指纹分析

利用ＲＡＰＤ技术对松材线虫（Ｂｕｒｓａｐｈｅｌｅｎｃｈｕｓ ｘｙｌｌｐｈｉｌｕｓ）和拟松材线虫（Ｂ．ｍｕｃｒｏｎａｔｕｓ）的分离物基因组ＤＮＡ进行了ＤＮＡ片段的随机扩增,以确定种间及种内群体的亲缘关系和筛选具有种鉴定特征的分子标记。通过对４０个１０聚体随机引物的筛选,应用８个引物对两种线虫种间种内分离物扩增片段的遗传分析显示：两种间群体ＲＡＰＤ扩增片段的共享度为４０％￣５６％,百在松材线虫的不同分     

一种克隆和分析多聚酶链式反应产物的简易快速方法

一种克隆和分析多聚酶链式反应产物的简易快速方法ＢｏｒｉｓＳｋｒｙａｂｉｎＤｉｄｏＶａｓｓｉｌａｃｏｐｏｕｌｏｕ本文介绍一种克隆多聚酶链式反应（ＰＣＲ）产物的快速有效方法，它包括末端修复（Ｅｎｄｒｅｐａｉｒ）和ＰＣＲ产物纯化．紧接是ＰＣＲ产物激酶催化反...