松材线虫和拟松材线虫种间及种下群体的RAPD指纹分析

利用ＲＡＰＤ技术对松材线虫（Ｂｕｒｓａｐｈｅｌｅｎｃｈｕｓｘｙｌｏｐｈｉｌｕｓ）和拟松材线虫（Ｂ．ｍｕｃｒｏｎａ－ｔｕｓ）的分离物基因组ＤＮＡ进行了ＤＮＡ片段的随机扩增,以确定种间及种内群体的亲缘关系和筛选具有种鉴定特征的分子标记．通过对４０个１０聚体随机引物的筛选,应用８个引物对两种线虫种间及种内分离物扩增片段的遗传分析显示：两种间群体ＲＡＰＤ扩增片段的共享度为４０％～５６％,而在松材线虫的不同分离物之间的共享度为６０％～８４％;其中有一个引物（Ｐ２５３）可在松材线虫和拟松材线虫种间产生具有种鉴定特征的特异性ＲＡＰＤ片段,在松材线虫的不同分离物中均可产生一约７００ｂｐ的特异性片段,而在拟松材线虫中产生了两个分别约为１３００ｂｐ和１９００ｂｐ的特异性片段．     

拟松材线虫对黑松致病性研究

松材线虫病（Ｂｕｒａｐｈｅｌｅｎｃｈｕｓｍｕｃｒｏｎａｔｕｓ）是发生在松树上的一种毁灭性病害 ,目前已在日本、中国、美国、加拿大和韩国等分布 ,并在日本和中国造成巨大的损失。在北美洲 ,松材线虫分布也很广。针叶树中还有一些形态与松材线虫非常相近的伞滑刃线虫 ,统称松材线虫复合种（ＰＷＮＣ） ,其中最常见的是拟松材线虫。拟松材线虫在东亚、美洲、欧洲都有 ,分布极广泛。杂交试验和ＤＮＡ分析证实松材线虫和拟松材线虫有密切的关系 ,能用ＲＡＰＤ和ＲＦＬＰ技术进行区分 ,拟松材线虫的ＤＮＡ有东亚和欧洲两种类型 ,前者主要分…     

芥菜遗传多样性的RAPD分析

随机扩增多态性ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）是一种新的分子标记技术,利用ＲＡＰＤ标记对芥菜（Ｂｒａｓｓｉｃａ ｊｕｎｃｅａ Ｃｏｓｓａ）１６个变种的遗传多样性进行了分析,从６０个１０ｂｐ随机引５物中筛选出２７个有效的,这２７个有效引物共扩增出３３６条ＤＮＡ带,其中２７５条为多态性带,占总数的８１．８５％,平均每个引物扩增出的ＤＮＡ带数为１２．４４,不同引物扩增出各自不同的ＤＮＡ指纹图谱,大部分图谱均有特征或特     

RAPD标记检测与肉鸡肥度性状关联的QTLs——肉鸡个体间RAPD指纹变异

采用随机扩增多态ＤＮＡ（ＲＰＡＤ）技术分析了肉鸡群个体间ＲＡＰＤ指纹的变异程度。１０个随机引物在３６只公鸡中共扩增出８３个片段,其中有６７个是多态性片断,多态率为８０．７２％,１１个随机引物在３６只母鸡中共扩增了９９个片段,其中有８６个是多态性片段,多态率为８６．８７％,公、母鸡群体内个体间遗传相似系数分别为０．７８５８、０．７３２８。结果表明：ＲＡＰＤ标记的多态性明显,作为一种ＤＮＡ标记,它可以     

病木样本松材线虫DNA检测方法研究

松材线虫是我国禁止进境的检疫性有害生物,在形态学特征上和拟松材线虫很相似。为提高12I岸木材检疫中松材线虫鉴定速度和准确性,我们开展了从含线虫木样中直接检测松材线虫的初步研究。根据松材线虫和松树内其他寄生线虫核糖体DNA的ITS区序列差异,设计了松材线虫的特异性引物对BXF／BXR,并对7个松材线虫分离物、4个拟松材线虫分离物和1个待鉴定伞滑刃线虫分离物的基因组DNA进行PCR扩增,结果从所有松材线虫分离物中都扩增到长度约为580bp的特异性条带,而其他分离物没有扩增产物出现。采用CTAB法提取含虫病木样本总基因组DNA,用引物对BXF／BXR对不同稀释梯度的DNA样品进行扩增,当含虫木样总DNA被稀释到8倍以上时,可从DNA模板中扩增出特异性条带。特异性引物对BXF／BXR检测木样中松材线虫的灵敏度可达10条线虫／100mg木样。     

RAPD－PCR技术在根结线虫分类鉴定中的应用

采用Ｏｐｅｒｏｎ公司Ａ组的９个引物对３种根结线虫：南方根结线虫１号小种（Ｍｅｌｏｉｄｏｇｙｎｅｉｎｃｏｇｎｉｔａｒａｃｅ１），爪哇根结线虫（Ｍ．ｊａｖａｎｉｃａ），北方根结线虫（Ｍ.ｈａｐｌａ）的基因组ＤＮＡ进行随机扩增，扩增产物显示了明显的多态性，其中引物ＯＰＡ－０１、ＯＰＡ－０３、ＯＰＡ－０４、ＯＰＡ－０５能区分３种根结线虫，其它５个引物仅能区分１个或２个种。     

四川主栽小麦品种RAPD标记遗传差异研究

采用随机扩增多态性ＤＮＡ（ＲＡＰＤ） 标记,对四川近５０ 年来年推广面积６－６７ 万ｈｍ２（１００万亩）以上的４０ 个小麦主栽品种遗传差异进行了初步探讨。结果表明,５５ 个随机引物中,有３２个引物（ 占５８－２％ ） 扩增产物具有多态性。３２ 个引物共扩增出１８５ 条带,其中９３ 条带（ 占５０％ ）具有多态性,每个引物可扩增出１ ～１１ 条多态性带,平均２－９ 条。４０ 个品种ＲＡＰＤ 标记遗传距离（ＧＤ） 变异为０－０１９ ～０－４７５ ,平均ＧＤ 值为０－２２１。聚类分析表明,在ＧＤ 值０－２３ 水平上,４０ 个品种可聚为５ 类。一些随机引物对有些品种能进行特异性扩增。引物ＯＰＮ１４ 对小麦１ＢＳ 扩增能产生特异性ＤＮＡ 片段,能完全鉴定出４０ 个供试品种中的９ 个１ＢＬ／１ＲＳ小麦－ 黑麦易位系品种。据此认为,ＲＡＰＤ标记可以作为小麦品种鉴定的指纹图谱。     

中国鹅5个品种遗传多样性的随机扩增多态DNA分析

用４０个１０－寡核苷酸随机引物对中国鹅的５个品种－狮头鹅,皖西白鹅,太湖鹅,浙东白鹅和四川白鹅进行了随机扩增多态ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）分析。结果表明,用筛选出的１４个引物共扩增出１７４个ＤＮＡ片段,其中的４８个（占２８．２％）在５个品种间表现为多态性。根据扩增ＤＮＡ片段的异同,计算了各品种和个体间的遗传多样性指数和遗传距离指数。同时,用分子进化遗传分析软件（ＭＥＧＡ）以ＵＰＧＭＡ法和ＮＪ法对遗传距离指     

松材线虫和拟松材线虫的PCR快速检测

利用PCR技术对松材线虫Bursaphelenchus xylophilus与拟松材线虫B．mucronatus的rDNA的ITS1区和5．8S区核甘酸序列扩增．根据松材线虫与拟松材线虫的ITS1序列区别,分别设计出松材线虫和拟松材线虫的特异性引物,实现了单条活的或FG(φ为4％的甲醛)固定的松材线虫和拟松材线虫的快速检测．     

苦竹类植物RAPD分析及其系统学意义

利用随机扩增多态性ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）技术,分析了苦竹类植物中产于日本的大明竹Ｐｌｅｉｏｂｌａｓｔｕｓ ｇｒａｍｉｎｅｕｓ（Ｂｅａｎ）Ｎａｋａｉ、、长苦竹Ｐｌ．ｓｉｍｏｎｉｉ（Ｃａｒｒ．）Ｎａｋａｉ,中国产的苦竹Ｐｌ．ａｍａｒｕ（Ｋｅｎｇ）Ｋｅｎｇｆ．、宜兴苦竹Ｐｌ．ｙｉｘｉｎｇｅｎｉｓ Ｃｈｕ ＆Ｃｈａｏ、斑苦竹Ｐｌ．ｍａｃｕｌａｔｕ（ＭｃＣｌ．）Ｃｈｕ＆Ｃｈａｏ。采用２０个引物（１０ｂｐ）进行扩增出的ＤＮＡ片段,用于种间遗传相似性分析。结果表明：（１）苦竹与宜兴苦竹关系密切;（２）大明竹与其它４种关系较远;（３）形态为分上将中、日产苦竹分成两类没有得到ＲＡＰＤ分析的支持。     

三种群银鲫的RAPD分析初报

利用２０个随机引物对产于方正、彭泽和淇河地区的三个银鲫种群进行了ＲＡＰＤ检测结果显示１４个引物的扩增效果良好,单一引物扩增的ＤＮＡ片段数在２￣１３条之间,片段长度在３００￣４０００ｂｐ之间。根据ＲＡＰＤ结果,进行了银鲫种群内、种群间的遗传差异分析。１４个引物中,引物ＯＰＶ－０７、ＯＰＶ－１４和ＯＰＶ－２０等对三种群银鲫扩增出的指纹图谱差异显著,可作为银鲫种群鉴定的分子标记。     

三种群银鲫的RAPD分析初报

利用２０个随机引物对产于方正、彭泽和淇河地区的三个银鲫种群进行了ＲＡＰＤ检测结果显示１４个引物的扩增效果良好,单一引物扩增的ＤＮＡ片段数在２￣１３条之间,片段长度在３００￣４０００ｂｐ之间。根据ＲＡＰＤ结果,进行了银鲫种群内、种群间的遗传差异分析。１４个引物中,引物ＯＰＶ－０７、ＯＰＶ－１４和ＯＰＶ－２０等对三种群银鲫扩增出的指纹图谱差异显著,可作为银鲫种群鉴定的分子标记。     

松材线虫的人工培养研究

本研究用松木屑和真菌培养松材线虫，结果表明：无菌的松木屑不能生长和繁殖线虫，有菌的才能繁殖线虫，其效果随松木屑来源（松树品种）的不同而异，不同的真菌培养线虫的效果有较大差异．长喙壳菌（Ｃｅｒａｔｏｃｙｓｔｉｓｓｐ．）、毛壳菌（Ｃｈａｅｔｏｍｉｕｍｓｐ．）和镰刀菌（Ｆｕｓａｒｉｕｍｓｐ．）的效果明显优于常用的灰葡萄孢菌（Ｂｏｔｒｙｔｉｓｃｉｎｅｒｅａ）和盘多毛孢菌（Ｐｅｓｔａｌｏｔｉａｓｐ．），可选用于培养松材线虫，在真菌菌落上，不同的接种虫量以及不同的温度对松材线虫的培养均有一定的影响．     

豌豆品种(系)的RAPD分析

以１８个豌豆栽培品种及野生种材料为ＤＮＡ样品来源,采用７个１０碱基随机引物进行ＰＣＲ扩增。基因组ＤＮＡ的多态性,利用ＲＡＰＤ标记鉴定其品种间及品种内的遗传变异性。７个引物共扩增出６６位点,其中多态性位点５６个,占８４．８％。每个ＰＣＲ扩增产物分别以０和１记录存在与否。扩增产物间成对比较产生非相似性矩阵（Ｊａｃｃａｒｄ相似系数表）,此矩阵用于构建遗传相似性的树状系图谱（遗传树）。通过遗传树的构建将１０个Ｐ．ｓａｔｉｖｕｍ与８个Ｐ．ｆｕｌｖｕｍ群居为截然不同的两大组。     

松材线虫的人工培养研究

本研究用松木屑和真菌培养松材线虫,结果表明：无菌的松木屑不能生长和繁殖线虫,有菌的才能繁殖线虫,其效果随松木屑来源（松树品种）的不同而异,不同的真菌培养线虫的效果有较大差异．长喙壳菌（Ｃｅｒａｔｏｃｙｓｔｉｓｓｐ．）、毛壳菌（Ｃｈａｅｔｏｍｉｕｍｓｐ．）和镰刀菌（Ｆｕｓａｒｉｕｍｓｐ．）的效果明显优于常用的灰葡萄孢菌（Ｂｏｔｒｙｔｉｓｃｉｎｅｒｅａ）和盘多毛孢菌（Ｐｅｓｔａｌｏｔｉａｓｐ．）,可选用于培养松材线虫,在真菌菌落上,不同的接种虫量以及不同的温度对松材线虫的培养均有一定的影响．     

DNA提纯方法对6种甘蔗亚族植物RAPD的影响

甘蔗植物组织内的多酚类、色素类等物质是干扰ＲＡＰＤ扩增反应的主要成分。本研究以ＣＡＴＢ法和ＳＤＳ法为基础,着重对抗氧化剂（ＰＶＰ等）、酶（蛋白酶Ｋ、ＲＮａｓｅＡ）和酚抽提等因素对提取ＤＮＡ的质量及其ＲＡＰＤ的影响进行了比较筛选。结果表明：①甘蔗ＤＮＡ提取质量和纯度与ＲＮａｓｅＡ、抗氧化剂等处理直接相关,蛋白酶Ｋ、ＣＡＴＢ和ＳＤＳ的处理无明显差异;②对于甘蔗ＲＡＰＤ反应,模板ＤＮＡ中含有一定量的ＲＮ     

松材线虫RAPD-PCR反应体系的优化与分子鉴定标记的筛选

应用随机引物S344、S356和S360比较分析了PCR热循环复性温度、Mg2+浓度和模板浓度对松材线虫基因组DNA的RAPD扩增结果的影响,旨在建立松材线虫的最佳反应体系,并以此进行松材线虫的分子鉴定标记筛选。结果表明:37℃的复性温度、3.0 mmol.L-1Mg2+、10μL反应体系中松材线虫基因组DNA模板1~25 ng是研究松材线虫RAPD特征的最佳反应体系。利用此反应体系,通过对100个随机引物的分析,获得了3条松材线虫区别于拟松材线虫的分子鉴定标记。     

进境木片松材线虫PCR检测方法研究

利用松材线虫rDNA内转录区（ITS）特异性引物,对泉州口岸入境木片携带的线虫基因组DNA进行特异性PCR扩增,建立一套快速准确的线虫检测鉴定方法。将该检测方法应用于泉州口岸现场检疫鉴定,结果未检测到松材线虫,与传统形态学鉴定方法结果一致。     

松材线虫的PCR快速诊断研究

松材线虫的ＰＣＲ快速诊断研究①许建平１郑经武１王建伟２龚鸿飞１李德葆１（１浙江农业大学生物技术研究所，杭州３１００２９；２杭州动植物检疫局，杭州３１００２１ＰＣＲＡｓａｙｔｏＤｉａｇｎｏｓｉｓａｎｄＤｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＢｕｒｓａｐｈｅｌｅｎｃｈｕｓ...     

栽培大豆品种间遗传关系的RAPD研究

选用８１种随机引物，利用ＲＡＰＤ技术对１３种栽培大豆品种的基因组ＤＮＡ多态性进行了分析，结果表明大多数的随机引物均得到了良好的ＰＣＲ扩增结果，显示出不同的栽培大豆品种之间基因组ＤＮＡ既有高度的同源性，又具有良好的多态性。通过Ｎｅｉ氏遗传共享度分析，使用ＵＰＧＭＡ（ｔｈｅ ｕｎｗｅｉｇｈｔｅｄ ｐａｉｒ ｇｒｏｕｐ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒａｒｉｔｈｍｅｔｉｃ ａｖｅｒａｇｅｓ）进行聚类分析，得到了ＵＰ