对FC株猪源性肠毒素型大肠杆菌致病因子的研究

FC菌株是一株从腹泻仔猪粪便中分离的肠毒素型大肠杆菌○在MRHA反应中,本菌能凝集人○型、豚鼠、马、绵羊、牛、鸡和兔的红细胞,对人○型和豚鼠红细胞有很高的血凝性,血抗K_(88)和K_(99)血清不能抑制其对豚鼠和绵羊红细胞的血     

对FC株猪源性肠毒素性大肠杆菌致病因子的研究——Ⅰ.FC株菌粘着素抗原的鉴定及部分特性

本文介绍了FC株猪源性肠毒素性大肠杆菌柔毛粘着素的部分特性。在抵抗甘露糖的血凝试验中,本菌能凝集人O型、豚鼠、马、绵羊、牛、鸡和兔的红细胞,上对人O型和豚鼠红细胞有很高的血凝活性,且抗K_(88)和K_(99)血清不能抑制其对豚鼠和绵羊红细胞的血凝。在体外小肠上皮细胞吸附试验中,本菌对仔猪小肠上皮细胞有强烈的吸附能力。FC株茵的O抗原为101。K_(88)、987p两种抗血清均不能凝集本菌,而K_(99)抗血清可凝集。不过,经O_(101)和K_(99)两种抗原吸收后的FC抗血清仍能凝集F_(41)~+和K_(99)~+;F_(41)~+的两个标准菌株。这表明,FC菌株是一株具有K_(99)和F_(41)两种粘着素抗原的猪源性肠毒素性大肠秆菌。     

对FC株猪源性肠毒素型大肠杆菌致病因子的研究

FC菌株是一株从腹泻仔猪粪便中分离的肠毒型大肠杆菌(Entcrotoxigenic E.coli,ETEC)。在MRHA反应中,本菌能凝集人O型、豚鼠、马、绵羊、牛、鸡和兔的红细胞,对人O型和豚鼠红细胞有很高的血凝性,血抗K_(88)和K_(99)血清不能抑制其对豚鼠和绵羊红细胞的血凝.在体外小肠上皮细胞吸附试验中,本菌对仔猪小肠上皮细胞有强烈的吸附作用;透射电镜和扫描电镜观察证实了FC株菌除表面具有一种纤毛样结构外,还能定居在仔猪小肠段。血清学试验结     

仔猪大肠杆菌纤毛抗原反向间接血凝检测方法的建立与应用

为建立大肠杆菌K88、K99、987P纤毛抗原的快速鉴别诊断和定量检测方法,用纯化的大肠杆菌K88、K99、987P纤毛抗原免疫家兔制备阳性血清,其琼扩效价分别达到1∶32、1∶32、1∶128;利用该阳性血清IgG致敏醛化的绵羊红细胞,确定了最适K88、K99、987P阳性血清IgG的质量浓度分别为40、160、80μg/mL。用该方法对同一批次的K88、K99和987P纤毛抗原进行3次检测,K88、K99和987P纤毛样品的RIHA效价均为1∶1 600、1∶1 600和1∶800。结果表明,该检测方法具有较好的特异性和可重复性,可用于大肠杆菌K88、K99、987P纤毛抗原的快速鉴别诊断。     

K88^＋产肠毒素大肠杆菌贵州分离株的生物学特性

应用溶血性试验,故Ｄ－甘露糖微量血凝试验（ＭＲＭＨ）,玻板凝集,体外细胞粘附试验透射电镜和兔肠结扎试验,首次对大肠杆菌贵州分离株的生物学特性进行了全面研究。结果表明,该细菌是一株血清型为Ｏ６０：Ｋ８８,不溶血,产肠毒素的大肠杆菌;其所产Ｋ８８菌毛抗原,在电镜下呈纤细短小,密布于细菌表面,能介导细菌粘附于仔猪离体肠上皮细胞,使细菌能凝集豚鼠和鸡的红细胞,其凝集作用不被Ｄ－甘露糖抑制。     

陕西省致仔猪腹泻ETEC的分子流行病学调查

【目的】对陕西省致仔猪腹泻产肠毒素大肠埃希菌(Enterotoxigenic E.coli,ETEC)的肠毒素及黏附素进行分子流行病学调查。【方法】采集陕西省陕北(子洲、甘泉)、陕南(汉中、城固)和关中(杨凌、西安、户县)3个地区7个大型养猪场1～50日龄腹泻仔猪的粪便样品,进行大肠埃希菌的分离与鉴定。采用普通和多重PCR方法,检测已知能表达毒素的大肠埃希菌标准菌株,以验证试验方法的可行性;采用多重PCR方法,对分离自陕西省腹泻仔猪粪便样品中的大肠埃希菌进行肠毒素(STa、STb、LT)和黏附素(K88、K99、987P、F41)检测。【结果】试验共分离鉴定出104株大肠埃希菌,其中表达肠毒素的菌株有45株,STa、STb、LT和STa+LT阳性的菌株数量分别为28,5,8和4株;表达黏附素的共31株,K88、K99、987P和K88+987P阳性的菌株分别为4,22,2和3株。在被检测的样品中,同时表达肠毒素和黏附素的大肠埃希菌有14株;陕南地区仅检测出STa肠毒素和K99黏附素,陕北地区较复杂,各毒素类型均有出现。在1～7日龄,致仔猪腹泻大肠埃希菌表达的毒素主要是K99和STa;到20～30日龄时,各种毒素均有不同程度检出。【结论】陕西省致仔猪腹泻ETEC表达的肠毒素主要是STa,表达的黏附素主要是K99;毒力因子的分布与区域和仔猪日龄有密切关系。     

大肠杆菌987 P基因工程菌苗预防实验性仔猪黄痢试验

用基因工程技术构建的大肠杆菌HB101/pBP52菌株能产生987 P型菌毛,但不产生热稳定肠毒素(ST),用该茵株制备灭活苗,在产前21天免疫18头第一胎怀孕母猪.在分娩后24～48小时内,用产热稳定肠毒素(ST)大肠杆菌987菌株(O9:K103,987P:NM)人工感染所产仔猪102头,88头仔猪在观察期(攻毒后7天)结束时安全无恙,保护率达86.27％.结果表明:用无毒大肠杆菌HB 101/pBP 52菌株制备的灭活苗可以有效地预防987P菌毛型致病性大肠杆菌引起的仔猪黄痢.     

抗大肠埃希氏菌K99粘着素单克隆抗体及其特性测定

利用淋巴细胞杂交瘤技术已获得10株能稳定分泌抗大肠埃希氏菌K99粘着素单克隆抗体的杂交瘤细胞系,分别命名为EK409、EKA7—3、EKA7—5、EKC6、EKD4—12、EKD4—19、EKA2、EKDS—12、EKD3和EKB8。除EKD4—12单抗的亚类为IgG_3以及EKA_2为IgG_2a外,其余单抗均是IgG_1。上述前3株单抗均具有直接凝集(DA),免疫荧光(IF)和ELISA3种免疫学反应,而其余单抗都只有IF和ELISA两种反应特性。无DA反应性。在这3种反应中,反应强度和效价最高的是EK409和EKA7—3,二者小鼠腹水的DA滴度可达1:2048,IF和ELISA的效价均为10~(-6)。这两株单抗能与所试的各株K99+菌呈阳性反应,是型特异单抗。余下的8株单抗中,EKA7—5只对K12:K99+和含有O101抗原的K99+的两类菌株呈阳性反应,其余7株单抗仅对O抗原为101的K99+菌发生反应.所有的K99单抗对所试的K88+或987P+或F41+的大肠秆菌均以夏其他种肠道杆菌均无交叉反应。EK409和EKA7—3单抗还具有抑制MRHA反应的特性。     

用四种血清学方法测定猪源肠致病性大肠杆菌K88抗原的比较试验

猪源肠致病性大肠杆菌,一般具有两种主要致病因素:(1)产生耐热性与不耐热性肠毒素(ST和LT),对肠粘膜细胞造成毒害作用;(2)菌体表面具有一特殊抗原(K88抗原),使病菌粘着于小肠前段粘膜绒毛上,顽固地停留于肠道,持续放出毒素.K88抗原是一种蛋白质抗原,有免疫原性.因此,测定大肠杆菌的肠毒素和K88抗原,在仔猪大肠杆菌病的诊断和防制上均有重大意义.对耐热性与不耐热性肠毒素的测定,作者已于本年先后报道.本试验以反向间接血凝和含A蛋白葡萄球菌(简称SPA菌)协同凝集试验,传统的试管凝集和玻片凝集试验,共四种方法测定K88抗原,进行比较.     

抗猪大肠杆菌卵黄抗体的研制及其高免蛋白粉生产技术

本项目以含有K88、K99和987P的猪大肠杆菌免疫健康蛋鸡,制备含有鸡抗猪大肠杆菌的卵黄抗体.免疫后的蛋鸡体内的特异性抗体水平能保持较长时间,水平稳定.     

育成牛K99 F41兼型大肠杆菌的分离鉴定

从肠毒血症病死的4头育成牛空肠内分离到4株革兰氏阴性细菌,经生化试验、O抗原鉴定、纤毛抗原检查、ST肠毒素测定及动物感染试验证明,分离的4株细菌均为兼有K99和F41两种纤毛抗原的产ST肠毒素的O_(142)血清型致病性大肠埃希氏菌。     

共表达ETEC K99、K88菌毛蛋白重组干酪乳杆菌的构建

将PCR扩增的K99和K88-LTB基因片段串联插入到干酪乳杆菌细胞表面表达载体pLA中,构建了重组表达载体pLA-K99-K88-LTB,将其电转化干酪乳杆菌CICC 6 105,获得了表达融合蛋白pLA-K99-K88-LTB的重组干酪乳杆菌表达系统.重组干酪乳杆菌在MRS培养基中表达后,经SDS-PAGE检测,约...     

鸡抗猪大肠杆菌卵黄抗体的研制与应用

用猪致病性大肠杆菌 K88、K99、987P、F4 1 标准菌株制成的灭活油佐剂作为免疫原 ,待产蛋鸡免疫后收集高免卵黄 ,然后提取、纯化 ,精制成鸡抗猪大肠杆菌特异性高免卵黄抗体并用于临床 .结果表明该制剂安全性好 ,每头仔猪注射或口服 2-4m L剂量预防仔猪大肠杆菌性腹泻 ,效果明显     

抗猪大肠杆菌功能性卵黄粉的制备及对小鼠的攻毒保护作用

通过制备抗致病性大肠杆菌特异性IgY及富含特异性IgY的功能性卵黄粉,进行小鼠的攻毒保护试验,探讨功能性卵黄粉对由致病性大肠杆菌引起的疾病的防治作用.结果显示:(1)致病性大肠杆菌与特异性IgY混合后,菌体出现凝集,且病原菌的运动力明显受抑制;(2)浓度为1.3×109CFU·mL-1的致病性大肠杆菌K88、K99和9...     

检测产肠毒素性大肠杆菌粘附素抗体间接ELISA的建立

为了评价仔猪大肠杆菌病K88-K99-987P-F41 四价亚单位疫苗的免疫效果,利用纯化粘附素为包被抗原,建立了检测产肠毒素性大肠杆菌粘附素抗体的间接ELISA。初步确定了各种反应条件: K88、K99、987P、F41粘附素抗原最适包被浓度依次为1∶400、1∶80、1∶40、1∶40,相应粘附素抗体最佳稀释度依次为1∶400、1∶200、1∶200、1∶200。经交叉试验、阻断试验和重复试验证实,本方法具有良好的特异性和重复性。     

K88-K99-987P和K88-K99-F41佐剂苗对鸡免疫效果的比较

将猪致病性大肠杆菌K88-K999-87P和K88-K99-F412种混合菌液分别与不同的佐剂(弗氏佐剂、白油佐剂、氢氧化铝和磷酸缓冲盐溶液)混合制成8种灭活疫苗免疫产蛋鸡4次,经水稀释、絮凝澄清、盐析及亲和层析制备特异性卵黄免疫球蛋白(IgY),用SDS-PAGE检测抗体纯度和分子量、酶联免疫吸附实验(ELISA)测定抗体滴度。结果表明,与氢氧化铝乳胶苗和水苗相比,弗氏佐剂苗和白油苗均能诱导并产生稳定、高活性卵黄抗体,免疫蛋鸡所制得抗体的滴度比未免疫蛋鸡分别提高32和16倍。IgY在温度低于60℃和pH值4~8时比较稳定,胃蛋白酶在不同pH下对IgY的活性影响显著。抑菌实验表明IgY能有效抑制大肠杆菌的生长。