SPA单克隆抗体ELISA诊断弓形虫病的研究

应用生物技术将葡萄球菌Ａ蛋白单克抗体辣根过氧化酶标记物和ＳＰＡ蓄桥法诊断弓形虫病，通过３４３份血清样品测定，阴性检出率比间接血凝法高２０个百分点。两两法的阳性符合率为１００％。该法具有操作简便。快速和灵敏度高的特点。     

猪传染性胃肠炎的快速诊断——用反向间接血凝试验检测猪传染性胃肠炎的抗原

本试验用反向间接血凝试验检测人工感染传染性胃肠炎病猪的抗原。结果表明,以小肠内容物和生前拉出的粪水作为检验材料较为适宜;滴度一般为1:128～1:2048;检验时间,一般2～3小时。以小肠粘膜作检验,滴度虽相当高,但非特异性凝集较多。 血球致敏条件,采用1％双醛固定绵羊红血球悬液。pH4.0醋酸缓冲液稀释。每毫升血球悬液含IgG80～160微克。在37℃致敏3～4小时最为适宜。致敏血球在4℃可保存198～227天。血凝试验结果判断标准,应以血清中和后抑制4个凝集孔以上,作为阳性。检出率为42/47(89.36％),以其他致敏血球作血凝试验和其他血清作抑制试验作比较,证明本试验的特异性相当可靠。 检测猪传染性胃肠炎的抗原,一般采用细胞培养和荧光抗体技术。前者比较困难,要传几代,才能获得细胞致病效应,且往往不上细胞。后者则适用于早期急性病例,在发病后期,尤其在上皮再生时期不易检出。采用间接血凝试验,国外仅见用于检测抗体,用作抗原检验,中外文献尚未见报导。本试验用反向间接血凝试验,检测人工感染猪的小肠粘膜、小肠内容物及粪水中的抗原,获得初步结果。     

快速酶免法（EIA）检测弓形体试剂盒的研究

快速酶免法系采用聚乙二醇(PEG)稀释抗体,可使弓形体抗原与抗体反应由原来37℃2小时缩短为10分钟。通过对388份样品测定,快速EIA法阳性率为36％,间接血凝(IHA)作对比,阳性率为26％。两法阳性反应完全相符,但检出率快速EIA高于IHA。人工造病12头猪,于11天和21天采血检测抗体水平,EIA法阳性两次皆为100％。由于EIA技术中实行包被一步标准化,使本法操作更为简便、灵敏、快速。     

副猪嗜血杆菌病的诊断

副猪嗜血杆菌,属于巴斯德科嗜血杆菌属,是猪的一种新的病原菌,是常规饲养猪群呼吸首的一种常在菌,但在特定条件下可以侵入机体并且引起严重的全身性疾病,以纤维素性多发性浆膜炎,关节炎和脑膜炎为特征,该病又称为革拉瑟氏病。     

兔弓形虫病弱毒虫苗的研究 第三报

通过紫外线致弱筛选和再克隆培育,现已选出一株弓形虫弱毒品系NTA-ⅢR。用本虫株按每只兔接种量5×10~3免疫23只兔全部安全,21天后用2个弓形虫强毒致死量作攻毒试验,结果对照组9只免全死,免疫组23只兔全部保护。免疫持续期测至9个月,保护率达100％。     

4株高致病性猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒的分离与鉴定

2007年7月从江苏某些猪场采集的具有明显高热症状的病料组织中分离出4株病毒,经对病毒的TCID50测定、血清学试验、病毒基因鉴定,确认这4株为美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒.病毒基因序列分析发现:4株病毒的NSP2基因均存在2处共30个氨基酸缺失,缺失氨基酸分别位于481位、532～560位.氨基酸序列同源性分析可见:分离株与VR2332株、MLV株的同源性很低,在60.3%至68.6%之间;与国内疫苗株CH-1a的同源性为83.1%～83.7%;与国内分离的变异株JXAI株、HUN4株、HB-1(sh)/2002株同源性很高,为91.2%～98.5%;同时4株分离株之间的同源性很高,为99.3%～100.0%.系统发育树表明:分离的4个毒株与JXAI毒株和HUN4株有较近的亲缘关系,与其他株的亲缘关系较远.动物回归试验表明,4株病毒均可以引起仔猪明显的临床高热症状.     

猪肺炎支原体PCR鉴定方法的建立

根据猪肺炎支原体的P36基因序列设计一对引物,建立猪肺炎支原体PCR检测方法,并对该方法进行了特异性和敏感性试验。成功建立了猪肺炎支原体特异且敏感的PCR检测方法,可区别猪鼻支原体、絮状支原体和鸡毒支原体,最低检出量为4.26 ng。     

猪肺炎支原体的分离方法

为了寻求分离猪肺炎支原体更好的方法,本试验采用剪碎法、研磨法、匀浆法和灌洗法对猪肺组织进行处理,并研究了不同肺脏组织处理方法对猪肺炎支原体活力的影响。结果显示,剪碎法与灌洗法获得的处理液对猪肺炎支原体的影响小于研磨法与匀浆法。采用剪碎法、灌洗法和研磨法对100份猪肺组织进行猪肺炎支原体野毒株分离的结果显示,经PCR鉴定,剪碎法分离到1株猪肺炎支原体,分离率为1%;研磨法分离到7株猪肺炎支原体,分离率为7%;灌洗法分离到2株猪肺炎支原体,分离率为2%。以上结果表明,研磨法获得的组织处理液对支原体活力有一定的影响,但其分离率好于剪碎法和灌洗法。因此,研磨法是一种较好的猪肺炎支原体分离方法。