多效唑对斑马鱼体内解毒代谢酶和抗氧化酶活性的影响

[目的]探讨多效唑对水生生物在组织水平的毒性效应及其致毒机制。[方法]采用生物化学方法测定了多效唑不同浓度暴露下对斑马鱼(Brachydanio rerio)体内2种解毒代谢酶和2种抗氧化酶活性的影响。[结果]雄性斑马鱼比雌性更容易受到多效唑的胁迫,各种酶在斑马鱼体内的变化规律不同。多效唑对雄鱼超氧化物歧化酶(SOD)表现为激活-抑制-恢复,对雌鱼SOD表现为先抑制后激活但影响不显著;对雌鱼过氧化物酶(POD)表现为抑制,对雄鱼POD的抑制在后期才有所表现;对雌鱼羧酸酯酶(Car E)表现为高浓度抑制低浓度激活,后期恢复,对雄鱼Car E整体表现为激活;而对雄鱼谷胱甘肽S-转移酶(GST)则表现为高浓度中后期产生抑制,对雌鱼GST未表现出明显的抑制或激活效应。[结论]雄鱼体内Car E的活性在多效唑较低浓度下最先做出应激反应,可作为污染物早期预警的生物标志物。     

全氟辛烷磺酸对斑马鱼AchE及LDH的影响研究

[目的]探究PFOS对斑马鱼神经和能量代谢的影响。[方法]该研究采用室内暴露试验方法,将斑马鱼暴露于0、0.56、1.67、5.00、15.00 mg/L浓度的PFOS试验液中,测定斑马鱼体内AchE活性和LDH活性,试验周期为15 d。[结果]PFOS对斑马鱼头部AchE活性有诱导作用,0.56、1.67 mg/L低浓度暴露组对AchE活性表现为诱导作用,而5.00、15.00 mg/L高浓度暴露组与低浓度暴露组相比,PFOS对AchE活性有抑制作用。PFOS对斑马鱼肌肉组织LDH活性表现为先诱导后抑制的作用,与对照组相比,在暴露前6 d PFOS诱导斑马鱼体内LDH活性,促进了斑马鱼能量代谢,从暴露第9天到试验结束,斑马鱼体内LDH活性受到抑制,能量代谢减弱,且随着暴露浓度的升高,抑制作用越明显,呈现剂量—效应关系。[结论]在整个试验周期内,与对照组相比PFOS可以诱导AchE活性,抑制兴奋的传递从而破坏神经递质系统,暴露9 d后,PFOS对AchE活性的诱导作用随着暴露浓度的升高而减弱。PFOS短期暴露可促进斑马鱼能量代谢能力,长期暴露抑制斑马鱼无氧代谢。     

Cu（2＋）、Cd（2＋）、Cr（6＋）胁迫对斑马鱼抗氧化酶活性的影响

[目的]研究Cu2＋、Cd2＋、Cr6＋对斑马鱼抗氧化酶活性影响,探讨重金属对斑马鱼毒性大小。[方法]以斑马鱼为模式生物,采用半静态法对斑马鱼进行驯养和试验,测定Cu2＋、Cd2＋和Cr6＋对超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化物酶（POD）和过氧化氢酶（CAT）活性影响。[结果]Cu2＋暴露1d胁迫斑马鱼SOD和CAT为诱导效应,胁迫POD为抑制-诱导-抑制效应,Cu2＋暴露7 d胁迫斑马鱼SOD为诱导效应,胁迫POD和CAT为抑制效应;Cd2＋和Cr6＋暴露1 d和7 d胁迫斑马鱼SOD和CAT均为诱导效应,胁迫POD为抑制效应。且暴露1 d和暴露7 d酶活性变化均显著。[结论]Cu2＋、Cd2＋和Cr6＋单一胁迫斑马鱼抗氧化系统酶活性变化显著,在短时间和低浓度暴露下,Cr6＋毒性作用最显著;在短时间中、高浓度暴露下,Cd2＋毒性作用最显著;长时间暴露时,Cu2＋毒性作用最强,可为重金属污染对水生生物毒性机理研究提供参考。     

低氧对斑马鱼细胞存活能力的影响

[目的]明确低氧对斑马鱼细胞存活和抗氧化酶系统的影响,为揭示鱼类细胞低氧适应机理打下基础.[方法]采用不同浓度低氧处理斑马鱼胚胎上皮细胞(ZF-4细胞),检测低氧对其存活率的影响,并分析低氧应激下ZF-4细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽(GSH)、一氧化氮合酶(NOS)活性及丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO)含量的变化.[结果]1.0%O2处理可促进ZF-4细胞存活;SOD活性呈先降低后升高的变化趋势,在处理24 h时达最高值;CAT活性呈先降低后升高再降低的波动变化趋势,于处理8 h时达最低值;GSH活性在处理16 h时达最高值,随后开始下降;MDA含量与对照组无显著差异(P>0.05);NO含量和NOS活性在处理16 h时达最高值.经0.1%O2处理8 h后ZF-4细胞的存活率达最高值;SOD活性在处理24 h时显著高于对照组(P<0.05,下同);经0.1%O2处理后CAT活性极显著降低(P<0.01,下同),GSH活性则从处理8 h后极显著高于对照组;MDA含量显著或极显著降低;NO含量和NOS活性极显著降低.[结论]在极端缺氧环境下,斑马鱼细胞主要通过提高SOD和GSH等抗氧化酶活性以提高细胞的低氧适应能力,从而促进细胞存活.     

甲基叔丁基醚对斑马鱼及中国仓鼠卵巢细胞的毒性效应

[目的]研究甲基叔丁基醚(MTBE)对斑马鱼和中国仓鼠卵巢细胞的毒性作用及氧化应激效应,为其科学、合理应用提供依据。[方法]应用半静态试验法研究不同浓度MTBE对斑马鱼的急性毒性效应,以中国仓鼠卵巢(CHO)细胞为模型,分析不同浓度MTBE对CHO细胞增殖水平和氧化应激相关酶活力水平的影响。[结果]MTBE对斑马鱼的48 h LC50值为71.5 mg/L;在细胞试验中,当MTBE暴露浓度高于5.0 mmol/L时,CHO细胞增殖水平受到明显抑制(P0.05);当MTBE暴露浓度达到50.0 mmol/L时,SOD活力明显上升(P0.05)。当MTBE浓度达到25.0 mmol/L时,CAT活力达到最大值且与对照组差异显著(P0.05);当MTBE浓度达到25.0 mmol/L时,CHO处理组GSH-Px活力明显上升(P0.05)。[结论]MTBE暴露可以诱导斑马鱼和CHO细胞的毒性作用,而氧化应激酶活力水平的改变可能是MTBE毒性作用之一。     

黄河鲤谷胱甘肽对氨氮胁迫的生理响应

[目的]研究氨氮对鲤幼鱼肝组织谷胱甘肽及其酶系的影响,阐析谷胱甘肽对环境胁迫的抗氧化防御机理.[方法]将黄河鲤在对照组(0 mg/L)和低(10 mg/L)、中(20 mg/L)、高(30 mg/L)3个氨氮处理组中染毒,研究氨氮胁迫6、24和48h后对肝组织中谷胱甘肽(GSH)含量、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和谷胱甘肽转移酶(GST)活性的影响.[结果]氨氮胁迫诱导黄河鲤幼鱼肝组织中GSH含量、GSH-Px和GST活性迅速升高,并在氨氮胁迫24h达到最大值,从而抵御氨氮造成的氧化胁迫.随着氨氮胁迫时间的延长,肝组织中GSH含量、GSH-Px和GST活性降低,抗氧化能力减弱.[结论]氨氮胁迫诱导黄河鲤幼鱼肝组织中谷胱甘肽含量及其酶系活性改变,以有效清除细胞中的活性氧和有毒代谢物,提高鱼类对环境的适应性.     

2种取代苯对花翅摇蚊毒性和细胞色素P450酶活性的影响

[目的]明确取代苯类污染物对水生昆虫毒性及细胞色素P450酶活性的影响。[方法]运用药液培养法和酶活性测定法分析了对氯苯酚和对苯二胺对花翅摇蚊4龄幼虫毒性及细胞色素P450酶活体和离体活性的影响效应。[结果]对氯苯酚和对苯二胺对花翅摇蚊4龄幼虫的24 h半数致死浓度(LC50)分别为38.65和78.43 mg/L。对氯苯酚对花翅摇蚊4龄幼虫体内P450酶活性作用主要表现为随作用时间增加抑制作用减小;而对苯二胺则主要表现为随作用浓度增加诱导作用增强。对氯苯酚和对苯二胺对花翅摇蚊4龄幼虫离体P450酶活性的半数抑制浓度(IC50)分别为466.15和594.43 mg/L。[结论]花翅摇蚊细胞色素P450可作为监测对氯苯酚和对苯二胺水体污染的参考生物化学标志物。     

氯吡嘧磺隆对斑马鱼肝脏抗氧化酶·ATP酶和AchE酶活性的影响

[目的]研究氯吡嘧磺隆对斑马鱼肝脏中抗氧化酶、ATP酶和Ach E酶活性的影响。[方法]通过化学品半静态式鱼类静态试验研究斑马鱼肝脏中CAT、SOD、GSTs、Na~+K~+、Ca~(2+)Mg~(2+)-ATPase、Ach E酶的活性和MDA含量。[结果]在低浓度处理中,氯吡嘧磺隆对CAT、SOD和GSTs起到诱导作用;高浓度组中氯吡嘧磺隆对CAT、SOD、GSTs、ATPase、Ach E酶均起到抑制作用。[结论]亚致死剂量氯吡嘧磺隆会对斑马鱼肝脏造成损伤。     

三苯基锡和五氯酚对斑马鱼急性毒性作用和过氧化物酶活性的影响

[目的]研究三苯基锡（TPT）和五氯酚（PCP）对斑马鱼过氧化物酶（POD）活性的影响,探讨TPT和PCP对斑马鱼的毒性作用。[方法]以斑马鱼为受试生物,采用半静态法对斑马鱼进行驯养和试验,测定TPT和PCP对斑马鱼的LC50、联合毒性作用类型和对POD活性的影响。[结果]TPT和PCP对斑马鱼的96 hLC50分别为12.313和61.195μg/L,毒性顺序为TPT〉PCP。TPT和PCP暴露1 d胁迫斑马鱼POD为诱导-抑制效应,暴露7 d胁迫斑马鱼POD为抑制效应。且暴露1 d和暴露7 d酶活性变化均显著。[结论]TPT和PCP为剧毒物质,TPT和PCP联合作用类型为协同作用;TPT和PCP单一胁迫斑马鱼POD活性变化显著,可为有机物污染对水生生物毒性机理研究提供参考。     

水体重金属在斑马鱼(Danio rerio)组织中的累积及对抗氧化系统的影响---以浑河为例

目的]评估浑河水体重金属污染现状及其对水生生物生态健康的影响。[方法]取浑河水样测定重金属元素含量(Al、Cr、Cu、Fe、Mg、Mn、Zn),并选择模式生物斑马鱼暴露浑河水90 d,测定水体重金属在斑马鱼脑、鳃、肝、肠、肌肉组织中的累积及对超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、还原性谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽-S-转移酶(GST)、脂质过氧化产物(MDA)、乙酰胆碱酯酶(ACh E)、总抗氧化能力(T-AOC)以及Na~+/K~+-ATPase活性的影响。[结果]浑河水重金属元素含量虽符合国家Ⅱ类水标准,但与对照组相比,Cu、Fe、Mn、Zn含量分别高出42.9%、217.2%、77.8%和96.2%。浑河水胁迫下的斑马鱼脑、鳃、肝、肠、肌肉组织中,重金属呈现不同程度的累积,其中肝组织的累积量最高。同时,肝组织中SOD和CAT增加率分别为109.1%和32.0%,而T-AOC显著下降28.5%,说明肝组织抗氧化能力下降。鳃组织中MDA显著升高59.2%,表明水体重金属引起脂质过氧化,诱导了斑马鱼鳃组织的氧化损伤。[结论]斑马鱼肝鳃组织较为敏感,SOD、CAT、T-AOC及MDA可作为敏感的毒理学研究的生物标志物,对水体综合毒性进行早期预警。     

离子液体对斑马鱼急性毒性及保护酶活性的影响

[目的]探讨离子液体对斑马鱼急性毒性及保护酶活性的影响。[方法]采用半静态水体染毒法测定1,2-二甲基咪唑对斑马鱼的急性毒性,并对1,2-二甲基咪唑进行了安全性评价。同时测定了不同作用时间后斑马鱼体内不同组织(鳃、肝脏和肌肉)抗氧化酶的活性。[结果]处理96 h后,1,2-二甲基咪唑对斑马鱼的LC50和LC20值分别为120.815和111.401 mg/L。1,2-二甲基咪唑(LC20和LC50)处理的斑马鱼鳃、肝脏和肌肉的CAT活性均呈现出先诱导后抑制的趋势。1,2-二甲基咪唑(LC20和LC50)处理的斑马鱼的鳃、肝脏和肌肉的SOD活性均呈现出始终抑制的趋势。1,2-二甲基咪唑(LC20和LC50)处理的斑马鱼鳃的POD活性的影响呈现出先诱导后抑制的趋势,肝脏POD活性的影响从经过LC20浓度处理来看呈现出先诱导后抑制的趋势,从经过LC50浓度处理来看呈现出抑制——诱导——抑制的趋势,1,2-二甲基咪唑对斑马鱼肌肉POD活性呈现出始终抑制的趋势。[结论]1,2-二甲基咪唑在斑马鱼体内积累显著影响斑马鱼体内CAT、SOD和POD的活性,降低斑马鱼体内自由基的清除能力,从而对其产生毒害作用。     

赤眼鳟形态特征及其两种同工酶的组织特异性分析

[目的]从形态特征和生化遗传层面上丰富赤眼鳟种质资源研究数据,同时为筛选出鉴定赤眼鳟种群的生化遗传标记打下基础.[方法]采用形态学测量观察赤眼鳟的形态特征,并以聚丙烯酰胺凝胶电泳检测其不同组织(心脏、眼睛晶状体、肌肉、肝脏和肾脏)中的乳酸脱氢酶(LDH)和苹果酸脱氢酶(MDH),分析两种同工酶表达的组织特异性.[结果]赤眼鳟的眼上缘可见一红斑,鳃耙短而疏,主要形态特征为背鳍D.iii-7,胸鳍P.i-14,臀鳍A.iii-7~8,腹鳍V.i-8,其齿式2·4·5/4·4·2或2·4·4/4·4·2.从赤眼鳟的心脏、眼睛晶状体、肌肉、肝脏和肾脏等5种组织中共检测到7条LDH酶带和6条MDH酶带,不同组织中的酶带数目和活性各不相同,呈明显的组织特异性,且同一组织不同个体间也存在明显差异.[结论]同工酶表达的组织特异性除了受遗传基因调控外,还与各组织的生化代谢活动相关,其中心脏LDH可作为鉴定赤眼鳟种质的生化遗传标记.     

花鳗鲡不同组织同工酶研究

[目的]研究花鳗鲡8种同工酶在不同组织中分布的生理意义。[方法]对花鳗鲡7种组织或器官（心脏、肝脏、肌肉、肾脏、鳃、眼、鳍）中8种同工酶的组织特异性,进行分析。[结果]花鳗鲡的EST、MDH、LDH、POD、SDH、SOD、ADH 7种同工酶均具有明显组织特异性。EST在肝脏中活性最强;MDH在心脏、肝脏中染色较深;LDH在心脏和鳍中含量最高;POD在肾脏中活性最强;SOD在肝脏和肌肉中的含量最高;ADH在肝脏中含量最高。[结论]除ME外,花鳗鲡的7中同工酶均具有明显组织特异性,且不同组织中酶的活性大小也有差别。     

中国鲎同工酶组织器官特异性表达

采用垂直聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,分析了中国鲎6种组织器官（肝胰腺、心脏、肠、鳃、肌肉和黄色结缔组织）的乙醇脱氢酶（ADH）、山梨醇脱氢酶（SDH）、酯酶（EST）、过氧化氢酶（CAT）、天冬氨酸转化酶（AAT）、苹果酸脱氢酶（MDH）和苹果酸酶（ME）等7种同工酶的活性和分布,并对其酶谱的表型进行了分析.结果表明,中国鲎的同工酶系统存在不同程度的组织特异性.乙醇脱氢酶在鳃和黄色结缔组织中不表达;山梨醇脱氢酶在鳃中不表达;酯酶、过氧化氢酶和苹果酸脱氢酶在6种组织器官中均有表达,但表达活性存在差异;而天冬氨酸转化酶Aat-1位点在鳃中不表达.     

日本鳗鲡不同组织器官的抗菌活性比较

用10%醋酸提取日本鳗鲡肝脏、鳃、脾脏、胆汁、肾脏和血清中的抗菌活性物质,检测其对养殖鳗鲡常见的4种致病菌,即肠杆菌Enterobacter sp.（B01）、迟缓爱德华氏菌Edwardsiella tarda（B09）、气单胞菌属Aeromona sp.（B18）和嗜水气单胞菌Aeromona hydrophila（B27）的抑杀作用.结果显示：1）肝脏、脾脏、胆汁和鳃的样品对4株试验菌株均有明显的抑菌作用,肾脏对B18、B27和B01三株致病菌有抑菌作用,血清仅对B18有抑菌作用.2）不同样品对同一种致病菌的抗菌活性差异显著（P〈0.05）,按平均抑菌圈半径计算,其抗菌活性大体呈现为：肝脏〉鳃〉脾脏〉胆汁〉肾脏〉血清;同一样品对不同细菌的抑杀作用差异显著（P〈0.05）.采用反相高效液相色谱法分析上述各组织/器官的醋酸提取物中的活性组分,结果显示：肝脏、脾脏、胆汁和鳃样品中的活性组分（以杀伤指数大于50%计）主要集中于乙腈洗脱质量分数为19.4%～35.4%时,肾脏和血清中没有明显的抗菌作用（杀伤指数小于50%）.     

枳子、葛根花和苦参混合药物对小鼠急性酒精中毒的防治作用

[目的]探讨中药枳子、葛根花和苦参混合药物对小鼠急性酒精中毒的防治作用。[方法]采用酒精灌胃法建立小鼠急性酒精中毒模型,灌喂低、中、高3种剂量的药物,进行先药后酒的预防醉酒和先酒后药的治疗醉酒试验,统计醉酒小鼠数目和小鼠睡眠时间,并通过检测小鼠肝组织中的丙二醛（ MDA）、还原型谷胱甘肽（GSH）及血清甘油三酯（TG）的含量,研究药物对小鼠肝的保护作用。[结果]药物的作用具有剂量依赖性,高剂量组药物较模型组能明显减少醉酒小鼠的数目,中剂量和高剂量药物组缩短醉酒小鼠的睡眠时间,并可以显著降低小鼠肝组织内丙二醛（ MDA）、血清甘油三酯（TG）的含量,低、中、高剂量组都能升高还原型谷胱甘肽（GSH）的含量。[结论]枳子、葛根花和苦参具有预防和治疗醉酒的功效,而且对酒精引起的肝损伤具有一定的防治作用。     

三角帆蚌钙调蛋白(CaM)基因的cDNA序列克隆与表达分析

[目的]研究三角帆蚌钙调蛋白(CaM)基因在育珠和非育珠蚌各组织中的表达和不同Ca2+浓度下外套膜中的表达变化。[方法]通过RACE技术,以我国重要的淡水珍珠贝——三角帆蚌为研究客体,克隆了CaM的cDNA全长,并通过Real-Time Q-PCR技术分析了该基因在育珠和非育珠蚌各组织中的表达和不同Ca2+浓度下外套膜中的表达变化。[结果]三角帆蚌CaM基因cDNA全长659bp,包括70 bp的5'UTR,299 bp的3'UTR和447 bp的ORF,编码149个氨基酸,预测其分子量为16.8 kDa,等电点为4.14。cDNA序列比对信息表明三角帆蚌与池蝶蚌、合浦珠母贝间均具有57%的相似度,而其蛋白具有高度的保守性,除斑马鱼外,各生物CaM相似率达97%。定量数据表明,CaM基因广泛表达于三角帆蚌各组织,外套膜内膜与腮中表达量显著升高(P0.05),其次是外套膜外膜和内脏团组织。插核育珠能增加该基因在各组织的表达,特别是在外套膜外膜和鳃组织中,育珠蚌该基因的表达显著高于非育珠蚌(P0.05)。此外,水体Ca2+浓度的增大对CaM基因表达有显著的影响,外套膜内膜该基因的表达随Ca2+浓度升高而增加,而外套膜外膜1.25 mmol/L Ca2+浓度下该基因的表达水平显著高于0.50 mmol/L、3.00 mmol/L组(P0.05)。[结论]为进一步深入研究钙调蛋白基因的在珍珠生长过程中的功能及其调控机理奠定了分子基础。     

美洲鲥形态特征及其两种同工酶的组织特异性分析

[目的]从形态特征和生化遗传层面丰富美洲鲥种质资源研究内容,同时为筛选出鉴定美洲鲥种质的生化遗传标记打下基础.[方法]通过形态测量获取美洲鲥的可数性状和可量性状,并采用聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳对美洲鲥6种组织(心脏、眼睛、肌肉、肝脏、肾脏和鳃)的乳酸脱氢酶(LDH)和苹果酸脱氢酶(MDH)进行检测分析.[结果]美洲鲥体侧扁,呈纺锤形,背、腹缘呈浅弧形,背部灰黑色,略带蓝绿色金属光泽,体侧和腹部均为银白色;其鳍式为背鳍D.iii-13~15,胸鳍P.i-14~17,腹鳍V.i-7~9,臀鳍A.i~ii-16~20,尾鳍C.21~25.美洲鲥鳃耙近7字形,左侧第一鳃弓外侧鳃耙数24~37+47~64.LDH和MDH在美洲鲥心脏、眼睛晶状体、肌肉、肝脏、肾脏和鳃组织中的酶带数目及其活性各不相同,呈明显的组织特异性,且美洲鲥个体间也存在差异.[结论]美洲鲥同工酶表达的组织特异性受遗传基因调控,同时与各器官组织的生化代谢活动相关.实际生产中,建议选取鳃LDH作为鉴定美洲鲥种质的生化遗传标记.     

汞暴露对草鱼氧化损伤及抗氧化能力的影响

将草鱼分为对照组和处理组,对照组试验期内置于正常养殖用水中饲养,处理组先暴露在Hg2+浓度为0.5 mg·L-1水体中,24 h后置于正常养殖用水中进行恢复饲养。各组分别于恢复饲养0（即Hg2+暴露24 h）、5、12、21 d取样,测定鳃、肝胰脏、脾脏和肾脏组织中超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、过氧化氢酶（catalase,CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathion and peroxidase,GPx）活性,以及还原型谷胱甘肽（glutathione,GSH）和丙二醛（malondialdehyde,MDA）的含量。结果显示,与对照组相比,处理组鳃SOD、GPx活性（0、5 d）和CAT活性（0、5、12 d）,以及GSH（5 d）、MDA（5、12、21 d）含量显著上升（P<005）,GPx活性（12、21 d）和GSH、MDA含量（0 d）显著下降（P<005,P<001）;肝胰脏SOD、CAT、GPx活性（0 d）和GSH（21 d）、MDA（0、5 d）含量显著上升（P<0.05）,CAT（5、12 d）活性、GSH（0、5、12 d）和MDA（12、21 d）含量显著下降（P<0.05）。处理组脾脏SOD、CAT、GPx活性在试验期内与对照组相比无显著变化（P>0.05）,GSH含量（0 d）极显著下降（P<001）,GSH（12 d）和MDA（0 d）含量显著上升（P<0.05）;肾脏SOD（0、5、12 d）、GPx（0 d）活性和GSH（12 d）、MDA（0 d）含量显著上升（P<0.05）,CAT（0、5、12 d）活性和GSH（0、5 d）含量显著下降（P<0.05）。试验期内,处理组各组织SOD、CAT活性均恢复到对照组水平,肝胰脏GSH含量得到反弹性恢复,MDA含量降到了较对照组更低的水平,鳃GPx活性及MDA含量一直未恢复至对照组水平。