培氟沙星抗体的制备

为了制备培氟沙星(PFLX)抗体,采用N-羟基琥珀酰亚胺活性酯(NHS)法将培氟沙星分别与牛血清白蛋白(BSA)、卵清白蛋白(OVA)偶联,制备免疫抗原PFLX-BSA和检测抗原PFLX-OVA,用PFLX-BSA免疫小鼠以获得高效价的抗体。结果显示,免疫抗原PFLX-BSA紫外光谱具有药物和蛋白的叠加特性,其最大吸收峰在277.5nm处,说明载体蛋白BSA与PFLX成功偶联,可用于动物免疫。检测抗原PFLX-OVA最大吸收峰在275nm处,说明载体蛋白OVA与PFLX成功偶联,可用作检测抗原进行包被。间接ELISA检测结果表明,所得小鼠抗血清效价较高,均达1∶32 000以上,说明有特异性抗体产生。该研究成功制备了抗培氟沙星抗体,也进一步证明药物偶联成功。     

二氟沙星抗体的制备

[目的]制备二氟沙星(DIF)抗体。[方法]采用N-羟基琥珀酰亚胺活性酯(NHS)法,将二氟沙星分别与牛血清白蛋白(BSA)、卵清白蛋白(OVA)偶联,制备免疫抗原DIF-BSA和检测抗原DIF-OVA,并用DIF-BSA免疫小鼠以获得高效价的抗体。[结果]免疫抗原DIF-BSA的紫外光谱具有药物和蛋白的叠加特性,其最大吸收峰在波长277 nm处,说明载体蛋白BSA与DIF成功偶联,可用于动物免疫。检测抗原DIF-OVA的最大吸收峰在波长276 nm处,说明载体蛋白OVA与DIF成功偶联,可用作检测抗原进行包被。间接ELISA检测结果表明所得小鼠抗血清效价较高,均达1∶32 000以上,说明有特异性抗体产生。[结论]成功制备了抗二氟沙星抗体,也进一步证明了药物偶联成功。     

鼠源环丙沙星多克隆抗体的制备

为了制备环丙沙星(CPLX)多克隆抗体,将修饰成功的CPLX-NH2分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联,制备完全抗原—CPLX-NH2-BSA和CPLX-NH2-OVA,用CPLX-NH2-BSA免疫小鼠,获得了高效价的环丙沙星多克隆抗体.     

四环素全抗原的合成及多克隆抗体的制备

利用Mannich反应合成四环素(Tc)与BSA(牛血清白蛋白)的完全抗原,由紫外光谱确定是否偶联成功;同理,制备四环素OVA抗原作为包被抗原,以制备的完全抗原TC-BSA免疫清洁级新西兰兔制备多克隆抗体,运用间接ELISA法测定血清抗体效价。试验结果表明,紫外光谱确定偶联成功,血清抗体效价为105,间接竞争法测定抗体50%抑制率(IC50)检测限为200ng/mL,最低检测限量可达到20ng/mL,特异性好。     

抗阿莫西林多克隆抗体的制备

[目的]为研究阿莫西林残留的免疫学检测方法奠定基础。[方法]采用N-羟基琥珀酰亚胺活性酯(NHS)法将阿莫西林分别与牛血清白蛋白(BSA)、卵清蛋白(OVA)偶联,制备免疫抗原AMX-BSA和检测抗原AMX-OVA,用AMX-BSA免疫成年兔以获得高效价的多克隆抗体。[结果]免疫抗原AMX-BSA紫外光谱具有药物和蛋白的叠加特征,其最大吸收峰在276 nm处,说明载体蛋白BSA与AMX成功偶联,可用于动物免疫。检测抗原AMX-OVA最大吸收峰在275 nm处,说明载体蛋白OVA与AMX成功偶联,可用作检测抗原进行包被。间接ELISA检测结果表明,2只兔抗血清效价较高,均达1∶32 000以上,说明有特异性抗体产生。[结论]该研究成功制备了抗阿莫西林多克隆抗体,也进一步证明药物偶联成功。     

八种氟喹诺酮类药物人工抗原的合成及鉴定

建立诺氟沙星(Enrofl oxacin,NOR)、环丙沙星(Ciprofl oxacin,CIF)、恩诺沙星(Enrofl oxacin,ENR)、沙拉沙星(Sarafl oxacin,SAR)、氧氟沙星(Ofl oxacin,OFL)、双氟沙星(Difl oxacin,DIF)、培氟沙星(Pefl oxacin,pef)和氟罗沙星(Fleroxacin,FLX,)8种氟喹诺酮类药物人工抗原的合成及鉴定方法。采用碳二亚胺(EDC)法将8种氟喹诺酮类药物与载体蛋白进行偶联,用于制备免疫抗原与包被抗原,通过紫外扫描和SDS-PAGE对人工抗原进行鉴定,免疫原免疫Balb/c小鼠,获得抗体。试验结果表明,采用间接ELISA方法检测小鼠血清抗体效价均达到1:8000以上。为进一步制备抗氟喹诺酮类药物单克隆抗体提供了良好的免疫原。     

丙烯酰胺人工抗原的合成及其多克隆抗体的制备

摘 要：利用偶联方法合成丙烯酰胺人工抗原,通过免疫方法获得抗丙烯酰胺多克隆抗体;应用戊二醛法将丙烯酰胺与牛血清白蛋白(BSA)进行偶联,并对这两种物质及其复合物进行紫外扫描,并用此复合物免疫兔子,利用间接酶联免疫吸附法测定抗体的效价;应用牛血清白蛋白与丙烯酰胺偶联人工抗体成功,抗体效价大于8100;应用人工抗原免疫成功制备抗丙烯酰胺多克隆抗体。     

重氮化法合成全抗原的研究

[目的]制备氯霉素全抗原,探索氯霉素合成的方法,为动物免疫试验作准备。[方法]采用重氮化法合成氯霉素卵清蛋白全抗原,通过紫外法和红外光谱法测定合成的偶联效果。[结果]重氮化法可用于制备较高偶联率的氯霉素全抗原,用于免疫动物制备抗体。[结论]该研究为合成高效价的抗体奠定了基础。     

SW人工抗原的合成与鉴定

【目的】探索高效苦马豆素(SW)人工抗原SW-BSA的合成方法。【方法】设计新的技术路线,合成SW人工抗原制备的关键中间产物SW-对甲基苯甲酸,并进行波谱分析。应用EDC法将SW-对甲基苯甲酸分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)连接,制备免疫抗原SW-BSA和包被抗原SW-OVA,通过小鼠免疫试验检测所合成的SW-BSA的免疫原性。【结果】合成的SW-对甲基苯甲酸的结构与预期目标产物一致;合成的SW-BSA可刺激小鼠产生针对SW的抗体;通过薄层层析技术可对反应进程进行即时检测。【结论】SW-BSA人工抗原合成成功,该人工抗原具有良好的免疫原性。     

磺胺母核抗原合成及多克隆抗体的制备

制备磺胺类药物母核结构的半抗原(H),通过免疫家兔得到多克隆抗体,为制备针对多种磺胺类药物的单抗和磺胺药检测免疫胶体金试纸条研制奠定基础。以对乙酰氨基苯磺酰氯(ASC)和对氨基苯甲酸甲酯(PA-BA)合成磺胺母核的半抗原(H);以牛血清白蛋白(BSA)、卵清蛋白(OVA)为载体,采用混合酸酐法,合成了免疫原H-BSA和包被原H-OVA通过紫外光谱定性证明偶联物偶联成功与否,以H-BSA免疫家兔,制备多克隆抗体,ELISA法对其特异性及效价进行检测。成功合成了磺胺母核人工抗原即免疫原H-BSA和包被原H-OVA,二者的蛋白浓度分别为8.46 mg/mL和10.53 mg/mL,结合比分别为13∶1和9∶1;制备的多克隆抗体特异性良好,血清效价为1∶256 000。     

猪免疫旋毛虫抗原和感染后的抗体应答

为了明确猪在免疫旋毛虫抗原和感染旋毛虫肌幼虫后的抗体应答反应,应用 ELISA 法,肌幼虫凝胶层析纯化抗原、新生幼虫和成虫可溶性抗原,对用肌幼虫可溶性抗原、肌幼虫 ES 抗原、成虫可溶性抗原、成虫 ES 抗原、灭活新生幼虫抗原制备的免疫原免疫后猪血清抗体以及攻击感染后的猪血清抗体进行了检测。用肌幼虫纯化抗原检测时,感染猪在感染后7d 抗体即出现变化,第14～21d 时上升较快,第28d 达最高值,抗体可持续6个月以上;各免疫组在第1次免疫后抗体滴度有不同程度升高,第2次免疫后上升较快,其中肌幼虫可溶性抗原及其 ES 抗原免疫组抗体应答较其它几种抗原免疫组强。用成虫可溶性抗原检     

兔抗褪黑激素高免血清的制备、提取和纯化

运用Mannich法,将褪黑激素(MLT)与牛血清白蛋白(BSA)偶联制备成完全抗原.经UV-260紫外分光光度仪测定,MLT与BSA的连接比为121.5只新西兰大耳兔用此抗原免疫6次后,ELISA和RIA抗体效价分别平均114000和1150000.抗血清经Na2SO4沉淀和Sephedex-G-200层析后收集纯化抗体,用721分光光度计测其蛋白浓度.通过5-羟色胺阻断试验证明抗体特异性较高.     

T2毒素人工抗原的合成及鼠源多克隆抗血清的制备

合成并鉴定T 2毒素人工抗原,通过动物免疫制备敏感性高、特异性好的鼠源T 2毒素多克隆抗血清。采用琥珀酸酐法将T 2毒素活化为T 2HS,T 2HS在碳二亚胺(EDC)作用下与牛血清白蛋白(BSA)或卵清白蛋白(OVA)偶联,合成免疫抗原T 2 BSA和检测抗原T 2OVA,经鉴定后,分别按30、50μg/只的剂量免疫BALB/c小鼠,共免疫4次,每次间隔4周,最后1次免疫10d后,断尾采血,制备多抗血清。利用间接ELISA方法测定抗血清效价,间接竞争ELISA测定其敏感性和特异性。结果表明,免疫的6只小鼠效价均达到了1∶104以上,2号小鼠多抗血清的敏感性最好,其半数抑制质量浓度(IC50)为324ng/mL,且具有良好的特异性。成功合成了T 2毒素人工抗原,制备了多克隆抗体血清,为T 2毒素单克隆抗体的制备及其免疫学快速检测方法的建立奠定了基础。     

红景天苷人工抗原的合成与鉴定

合成红景天苷人工抗原,为进一步建立免疫学分析方法提供依据,采用高碘酸钠氧化法分别将红景天苷(Salidroside)、牛血清蛋白(BSA)与卵白蛋白(OVA)人工偶联成免疫抗原(SAL-BSA)和包被抗原(SAL-OVA),并利用紫外光谱法、SDS-PAGE法鉴定。用制备的人工免疫抗原免疫小鼠,用间接酶联免疫法测定抗体效价。结果成功制备了SAL-BSA、SAL-OVA两种抗原,SAL-BSA偶联比可达到7∶1,在免疫后的小鼠血清中检出了抗红景天苷的抗体,效价为1∶4 000。成功合成红景天苷人工抗原,为下一步单克隆抗体的制备及建立相应的免疫学分析方法奠定了基础。     

诺氟沙星与牛血清白蛋白及卵清蛋白结合物的合成

采用碳二亚胺法制备诺氟沙星与牛血清白蛋白（BSA）的结合物，作为诺氟沙星酶联免疫用的免疫原。经紫外光谱法测定，每分子牛血清白蛋白连接的诺氟沙星分子数为16.1个。分别用碳二亚胺法和混合酸酐法制备诺氟沙星与卵清蛋白（OA）的结合物，作为诺氟沙星酶联免疫测定用的包被抗原。经紫外光谱法测定，每分子卵清蛋白连接的诺氟沙星分子数分别为5.8和1.9个。     

诺氟沙星与牛血清白蛋白及卵清蛋白结合物的合成

采用碳二亚胺法制备诺氟沙星与牛血清白蛋白（BSA）的结合物，作为诺氟沙星酶联免疫用的免疫原。经紫外光谱法测定，每分子牛血清白蛋白连接的诺氟沙星分子数为16.1个。分别用碳二亚胺法和混合酸酐法制备诺氟沙星与卵清蛋白（OA）的结合物，作为诺氟沙星酶联免疫测定用的包被抗原。经紫外光谱法测定，每分子卵清蛋白连接的诺氟沙星分子数分别为5.8和1.9个。     

环丙氨嗪人工抗原的合成与鉴定

本研究拟通过抗原合成、多克隆抗体制备等途径建立快速的环丙氨嗪酶联免疫检测方法.主要采用戊二醛桥连法,偶联半抗原环丙氨嗪和载体牛血清白蛋白(BSA)或卵清白蛋白(OVA),制备酶联检测的免疫抗原和包被抗原.经紫外光谱和气相-傅里叶-红外光谱鉴定,在紫外265 nm波长处得到环丙氨嗪-BSA吸收峰;在红外3 350～3 300 cm-1、1 660～1 500 cm-1和1 695～1 665 cm-1波长处分别得到环丙氨嗪-BSA和环丙氨嗪-OVA特征性偶联吸收峰,证实本试验人工合成的2对抗原均偶联成功.免疫抗原和包被抗原的偶联比分别达到25.9 ∶ 1、23.1 ∶ 1,为进一步制备抗血清和酶联检测方法的建立奠定了工作基础.     

抗DDA抗体的制备及其特性研究

制备抗DDA抗体,建立间接竞争酶联免疫吸附实验(Indrect Competitive Enzyme-linked Immunosorbent Assay,idc-ELISA)方法,以测定海水样品和海洋贝类中的有机氯农药滴滴涕(DDT)代谢产物.采用碳二亚胺法,将半抗原DDA分别与载体蛋白牛血清白蛋白(Bovine semm albumin,BSA)和卵清蛋白(Ovalbumin,OVA)偶联,得到完全抗原.以DDA-BSA为抗原,免疫BALB/c小鼠,制备抗DDA抗体.研究表明,5只鼠产生的抗体对DDA都能产生灵敏的特异性免疫反应,以DDA-OVA为包被抗原,用5#抗体建立间接竞争ELISA方法检测海水样品和海洋贝类中的有机氯农药DDT代谢产物DDA,最低检出限为:10.0 ng·mL-1,海水加标样平均回收率122%,批间变异系数30%,贝类加标样平均回收率为131%,批间变异系数22%.     

己烯雌酚人工抗原的合成和酶免疫检测方法的建立

通过化学方法合成己烯雌酚单羧甲基醚,并通过核磁共振和质谱进行鉴定;分别用混合酸酐法和碳二亚胺法将其与牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵清蛋白(OVA)偶联,合成己烯雌酚人工抗原,经紫外扫描、聚丙烯酰胺凝胶电泳和动物免疫试验证实人工抗原合成成功,并制备了抗己烯雌酚的特异性多克隆抗体,同时建立了己烯雌酚的酶免疫检测方法,这对动物性食品中己烯雌酚的残留检测有重要意义。     

改良重氮法合成米诺环素人工抗原及结果鉴定

分别采用重氮法、戊二醛法及改良重氮法将米诺环素半抗原与牛血清白蛋白(BSA)偶联制备免疫原,3种方法的偶联比分别为5∶1,10∶1和15∶1;紫外光谱、红外光谱、凝胶电泳对改良重氮法合成的人工抗原进行鉴定,成功合成了人工抗原;将改良重氮法合成的人工抗原MNC-BSA免疫BALB/C小鼠,用间接ELJSA法测定抗体效价及其特异性.结果表明:小鼠血清抗体效价均在1∶12800以上,为研究制备米诺环素单克隆抗体奠定了基础.