乳杆菌乳糖酶的基因异源表达及酶学性质分析

采用简并引物PCR和TAIL-PCR方法,从乳杆菌Lactobacillus sp. B164中克隆得到一个乳糖酶基因bg42-164。基因全长2 031 bp,编码676个氨基酸和一个终止密码子,预测分子量76 kDa,无信号肽序列。将bg42-164连接pET-30a(+)载体并转入大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达后可检测到乳糖酶活力。SDS-PAGE分析乳糖酶BG42-164的蛋白分子量为76 kDa,使用组氨酸标签亲和层析方法进行蛋白纯化,并对纯化的乳糖酶BG42-164进行了酶学性质分析。该酶最适反应温度为50℃,经50℃处理30 min后,剩余酶活力保留80%以上,pH 6.0时该酶的水解活力最高。牛奶水解试验表明,乳糖酶BG42-164对乳糖的水解效果良好,5 mL牛奶中添加250 U酶蛋白,在50℃条件下2 h乳糖水解率为100%。该酶温度范围宽,乳糖水解效果好,为其在低乳糖奶生产中应用奠定了理论基础。     

黄顶菊叶片凋落物对绿豆、红豆种子萌发和幼苗生长的影响

为了解黄顶菊(Flavera bidentis)的化感效应,研究了不同浓度黄顶菊的落叶水浸提液对绿豆、红豆种子的萌发和幼苗生长的影响。结果表明,黄顶菊落叶水浸提液对绿豆和红豆种子发芽率均产生了显著的抑制作用,且随着水浸提液浓度的增加抑制作用也随之增强,但对绿豆和红豆的抑制作用是有差异的。因此,黄顶菊也可通过其叶片凋落物释放化感物质,从而为防控黄顶菊提供理论依据。     

阳离子交换树脂固定化乳糖酶的研究

[目的]以阳离子交换树脂为载体,研究黑曲霉来源乳糖酶固定化条件,以期改善乳糖酶性质,使黑曲霉乳糖酶更适于低乳糖乳的连续生产。[方法]以吸附率最高的阳离子交换树脂D151为载体,通过先吸附后交联的方法固定乳糖酶,优化固定化条件。[结果]结果表明,加酶量为50．0U／g（载体）,吸附pH值为4．0,吸附温度是25℃,吸附时间24h,交联剂戊二醛浓度为4％,交联温度是30℃,交联时间是6h,固定化效果最好。获得的固定化酶活力可达11．8U／g（载体）,固定酶回收率为37．2％。[结论]该研究为工业化利用固定化乳糖酶连续生产低乳糖乳提供了技术依据。     

黑曲霉DL116产乳糖酶发酵条件的研究

为确定产高温乳糖酶的黑曲霉菌株DL116的最佳发酵培养条件,研究了突变菌株产乳糖酶的发酵培养基成分及培养条件。结果表明:DL116产乳糖酶的最佳培养基成分为:果胶2.5%,豆粕粉6%,玉米浆9%,(NH4)2SO40.1%,K2HPO41%,Tween-80 0.3%;最佳培养条件:温度30℃,初始pH 5.0,装液量30 mL/250 mL,接种量104个/mL。在此条件下培养,β-半乳糖苷酶酶活力达83.89 U/mL,是初始发酵条件下酶活力的1.89倍。     

凹凸棒土—壳聚糖耦合固定化乳糖酶及其在低乳糖乳制备中的应用

采用凹凸棒土吸附与壳聚糖溶液包埋耦合的方法进行乳糖酶的固定化.结果表明,当凹凸棒土∶壳聚糖为5∶1、吸附时间为4 h、加酶量为260 U.g-1时,固定化酶活力达107.6 U.g-1、酶回收率为50.6%;所制得固定化乳糖酶的适宜温度和pH值分别为40~45℃及6.4~6.8;用固定化乳糖酶水解牛奶中的乳糖,在温度为45℃时间为1.5 h时乳糖水解率即达69.5%,38℃、3 h水解率为71.3%.     

温度对樱桃番茄花粉活力及萌发率的影响

为探究外界环境温度对番茄花粉活力及萌发率的影响,以樱桃番茄西大樱粉1号父本YA-4-3-1-8花粉为研究对象,利用红墨水染色法、液体培养基离体萌发法检测花粉活力及萌发率.采用相关分析和回归分析法,分析了最高温度、最低温度、温差对番茄花粉活力及萌发率的影响.结果表明,樱桃番茄花粉的萌发率与最高温度、最低温度和温差均存在极显著的相关性,而活力则与最高温度、温差呈现出极显著相关.花盛开前第2天的最高温度、最低温度和温差对番茄花粉萌发率的影响最大,具有显著的负相关关系;花盛开当天的最高温度、盛开前第2天的最低温度和温差对花粉活力的影响最大.同时,活力与最高温度、温差存在显著负相关性,与最低温度具有显著正相关关系.可见,环境温度的变化会对花粉活力及萌发率受产生不同程度的影响,高温条件下,极易使花粉活力及萌发率下降.此外,花朵盛放前和当天的温度变化,与花粉活力及萌发率的相关性也存在一定的差异.其中,开放前的温度对花粉萌发率的影响更加突出.花粉活力及萌发率不仅只受当天温度的影响,开放前的温度变化也会对其造成显著的影响温度过高或过低都会影响花粉的发育,最终导致番茄产量下降.     

秸秆纤维素降解细菌的筛选及其产酶条件的研究

用稀释平板法在羧甲基纤维素平板培养基和纤维素刚果红平板培养基上,从土壤中分离出1株纤维素酶活力较高的耐热细菌H-5,初步鉴定为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis).对该菌株的液体发酵产纤维素酶的条件经行了研究,结果表明:菌株H-5产纤维素酶的最适培养温度为40℃,内切酶活力(CMCase)和滤纸酶活力(FPase)最高可达27.14U和22.17U.最佳培养时间为3d,内切酶活力(CMCase)和滤纸酶活力(Fpase)最高可达26.38U和20.14U,最适初始pH值为6～6.5,内切酶活力(CMCase)和滤纸酶活力(FPase)最高可达24.08U和21.96U,最适摇床转速为150 r·min-1,内切酶活力(CMCase)和滤纸酶活力(FPase)最高可达25.34U和20.67U.     

pH值对绿豆种子萌发和幼苗生长的影响

[目的]研究不同pH值溶液及其不同浸泡时间对绿豆种子萌发和幼苗生长的影响,为在南方地区通过科学育苗减少土壤酸胁迫提供科学依据.[方法]用pH值6.0~8.0溶液分别浸泡绿豆种子6、12 h,观察绿豆种子萌芽及幼苗生长状况.[结果]当溶液pH值为7.5时,绿豆种子萌发速度最快、数量最多,2d后浸种6、12h的发芽率分别为87.5%和92.5%;浸种6、12h,播种4d后分别以pH值7.5和7.0处理的幼苗株高最高.浸种6、12h时,分别以pH值6.5、7.0处理的绿豆幼苗鲜重最高,而均以pH 8.0处理的幼苗干重最高.[结论]在广西贺州地区,适宜绿豆发芽及苗期生长的浸种溶液pH值为7.0~7.5,pH过高或过低均不利于绿豆的萌发和生长.     

绿豆核酸酶的提取及活力测定

[目的]优化绿豆核酸酶的提取条件并测定其活力。[方法]利用单因素和正交试验,考察提取时间、料液比、p H、芽长几个因素对从绿豆芽中提取核酸酶的影响,优选出各影响因素的最佳水平,并进行活力测定。[结果]提取时间20 h,料液比1∶12(g∶m L),p H 3.0,芽长是绿豆长的4倍时,绿豆核酸酶酶活最高为478.86 U/m L。影响绿豆核酸酶提取的因素主次顺序依次为提取时间、p H、料液比、芽长。采用饱和度为80%的硫酸铵盐析沉淀后,酶活达1 569.6 U/m L,较提纯前提高了2.28倍。[结论]该研究可为核酸酶的开发利用提供参考。     

蒙农红豆草种子土表萌发特性初探

试验对蒙农红豆草种子的吸水特性及适宜萌发环境等进行了研究,结果表明:在25℃时,蒙农红豆草(Ono-brychis viciifolia Scop.cv.mengnong)种子吸水萌发速度快;在土壤水分为20%,空气相对湿度为100%,播后镇压的条件下,有利于播于土表种子的萌发及成苗。     

不同品种绿豆SOD提取工艺优化及活性的研究

研究超声波法提取绿豆超氧化物歧化酶(SOD)的最佳提取工艺并对不同品种的绿豆SOD活力进行比较分析。以来自全国不同地区的十二个品种的绿豆为研究对象,先利用单因素试验对影响榆绿1号SOD提取率的7个因素进行评价,用正交试验优化出4个因素的最佳参数,再利用最佳条件对十二个品种绿豆中SOD活性进行分析比较其SOD活性成分的差异。结果表明,超声波提取SOD的最佳工艺参数为:液固比20∶1(mL·g~(-1)),缓冲液pH为7.0,超声功率140 W,超声时间25 min,超声温度40℃,水浴浸提时间1.5 h,水浴浸提温度60℃。其中液固比、超声提取功率、磷酸缓冲液、水浴浸提温度是影响试验指标的主要因素,而磷酸缓冲液pH对SOD活力影响最大。对于十二个品种绿豆SOD活力的研究表明,冀绿7号SOD活力最高为197.91 U·g~(-1),苏拉2号SOD活力最低为30.03 U·g~(-1),不同品种绿豆SOD含量存在不同程度的显著差异。     

豆类萌发期蛋白质和氨基酸含量的比较分析

对绿豆（Phaseolus radiatus Linn)、大豆（Glycine soja Sieb.et Zucc.）、黑大豆（Glycine max Linn.）萌发期蛋白质和氨基酸含量变化规律进行了研究。结果表明：大豆、绿豆蛋白质含量在戎发期达最大值，分别为47.339%和26.889%，黑大豆蛋白质含量在萌发期达最小值为36.080%，绿豆、大豆、黑大豆在萌发期氨基酸含量达最大值，分别为15.222%，42.379%，30.238%，豆类在萌发期谷氨酸含量最高，为2.904%-8.757%。     

黑曲霉乳糖酶固定化前后酶学性质比较研究

[目的]为低乳糖乳制品的工业化生产提供技术支持。[方法]以阳离子交换树脂D151为载体,采用吸附交联法对黑曲霉乳糖酶进行固定化,进而研究了固定化乳糖酶的酶学特性。[结果]固定化乳糖酶和游离酶的最适温度分别为60和70℃。在低于50℃的条件下对固定化乳糖酶和游离酶进行保温处理,酶活力没有损失;在高于50℃的条件下对固定化乳糖酶和游离酶进行保温处理,其酶活力呈现下降趋势,且固定化乳糖酶的活力下降更为迅速。固定化乳糖酶和游离酶的最适pH值分别为4．5和4．0,其pH值稳定范围分别为2．5—4．5和5．0～7．0。pH=6．5时,固定化乳糖酶和游离酶的活力分别为其最适pH值下的87．5％和3．8％。固定化乳糖酶和游离酶的半衰期分剐为24和9d。[结论]在牛奶的天然pH值下,固定化乳糖酶比游离酶更适用。     

硝基苯胁迫对豆类种子萌发及幼苗生长影响的研究

通过生物测定的方法研究了硝基苯对豆类种子萌发及幼苗生长的影响。结果表明:硝基苯浓度为1mg·kg-1时,对豆类作物出苗率影响不大;当硝基苯浓度高于5mg·kg-1时,在绿豆、红豆及小粒大豆播后的2～5d,对其出苗率抑制明显;播种4d后,硝基苯浓度为40mg·kg-1,绿豆、红豆及小粒大豆的出苗率与对照相比分别相差38.10%、40.95%、48.17%,但是5d后,处理与对照出苗率差距逐渐减少。硝基苯抑制绿豆、红豆及小粒大豆株高、根长、地上部分鲜重及根鲜重,并且随着硝基苯浓度的增大而增大。在硝基苯胁迫下,豆类作物根部畸形生长,须根数增多。3种豆类对硝基苯的敏感性顺序为小粒大豆>红豆>绿豆,硝基苯对豆类的影响顺序为地下部分>地上部分。     

不同施磷水平下AM真菌对水稻/绿豆间作中植株生长及氮磷利用的影响

采用旱作水稻/绿豆间作的种植方式,研究不同施磷水平下,接种丛枝菌根(AM)真菌苏格兰球囊霉(Glomus coledonium),对水稻和绿豆的幼苗生长及氮磷素的转移和利用的影响.结果表明,10 mg/kg(以P计,下同)施磷处理[Ca(H2PO4)2·H2O]的水稻和绿豆的菌根形成率最高.不同磷水平处理下,接种丛枝菌根真菌(AMF)显著提高了水稻和绿豆叶片的叶绿素含量,随着施磷量的增加,水稻和绿豆叶片叶绿素、植株磷含量和吸收量增加;在不同施磷水平下,接种AMF显著增加植株吸磷量,绿豆增加量高于水稻,绿豆的增加量在10 mg/kg时达98.34％.旱作水稻/绿豆间作系统中,水稻和绿豆的根系活力和可溶性糖含量随施磷水平的提高而增大,接种AMF条件下,显著提高了水稻和绿豆的根系活力和可溶性糖含量.在水稻/绿豆间作系统中,土壤有效磷量含量显著影响丛枝菌根的形成和发育.在10 mg/kg施磷水平下,丛枝菌根对水稻/绿豆生长的促进效果最佳,显著促进了水稻和绿豆的生长,并显著提高了水稻和绿豆叶片的叶绿素含量、根系活力和可溶性糖含量.     

高温乳糖酶产生菌株的诱变选育

以产高温乳糖酶的黑曲霉菌株(Aspergillusniger)D2-26作为出发菌株,经1次紫外线和3次γ射线诱变后,获得1株产高温乳糖酶的黑曲霉突变株UCo-3,其菌落形态较出发菌株略有差异,菌落呈圆形年轮状,菌落背面只在接种处有明显的皱褶。该突变株产生的高温乳糖酶活力达16 27U mL。     

乳酸克鲁维斯酵母乳糖酶基因的克隆及原核表达

从乳酸克鲁维斯酵母(Kluyveromyces lactis)菌株k 538中克隆获得乳糖酶基因klac,并将其插入到表达栽体pET -30 a(+)上构建重组表达质粒pETlac 4.将pETlac 4电击转化到大肠杆菌BL 21中,分别研究了阳性转化子在28℃,37℃下经IPTG诱导3 h后的蛋白表达情况.表达产物的SDS-PAGE分析和酶活性测定表明,klac基因在大肠杆菌中获得活性表达,其中低温条件28℃下的表达水平明显高于37℃,28℃诱导的细胞经超声波破碎所测酶活力为0.475 U/mL,37℃仅为0.134 U/mL.     

Ca2+ Fe2+ Mg2+ Zn2+ Na+ K+对哺乳仔猪乳糖酶活力的影响

乳糖和矿质元素是哺乳仔猪十分重要的营养素,对7日龄的哺乳仔猪乳糖酶研究结果表明:哺乳仔猪乳糖酶的酶活力常数是65.825μg(ONP)/mL·min,矿质元素钠、铁和钙能促进乳糖酶的酶活力.     

Ca2+ Fe2+ Mg2+ Zn2+ Na+ K+对哺乳仔猪乳糖酶活力的影响

乳糖和矿质元素是哺乳仔猪十分重要的营养素,对7日龄的哺乳仔猪乳糖酶研究结果表明:哺乳仔猪乳糖酶的酶活力常数是65.825μg(ONP)/mL.m in,矿质元素钠、铁和钙能促进乳糖酶的酶活力。     

两种豆科作物的种子萌发对Cd~(2+)处理的不同响应

采用室内试验方法,研究了绿豆和箭舌豌豆的种子萌发对不同浓度Cd2+处理的响应.结果表明,较低浓度的Cd2+(低于50或100μmol@L-1)处理对这两种作物的种子发芽率和发芽系数无明显的影响,但影响其活力指数.较高浓度(大于100μmol@L-1)的Cd2+处理不仅影响两种作物的种子发芽率和发芽系数,而且还影响其活力指数,这与Cd2+处理降低蛋白水解酶活性和呼吸速率、增加膜透性等有关.相比之下,绿豆种子的萌发对Cd2+处理的响应较箭舌豌豆的明显,暗示后者在种子萌发时对Cd2+胁迫的忍耐性较强.