不同保存方法对武汉单极虫DNA提取和PCR扩增的影响

为探讨不同保存方法对武汉单极虫Thelohanellus wuhanensis DNA提取和PCR扩增的影响,将从患武汉单极虫病的异育银鲫Carassius auratus gibelio鱼苗上分离出含有孢子的孢囊,分别置于100%乙醇、70%乙醇、2.5%戊二醛、10%福尔马林、Bouin's液、Carnoy's液和Müller's液中保存50 d,经计数调整孢子等量后分别进行DNA提取、常规PCR和巢式PCR扩增。结果表明:100%乙醇和70%乙醇保存方法对武汉单极虫孢子DNA提取、常规PCR和巢式PCR扩增均无任何影响,等同于新鲜孢子,可作为孢子的保存方法;2.5%戊二醛和Bouin's液保存方法只对孢子DNA提取有影响,但均能在常规PCR和巢式PCR扩增后出现特异电泳条带,可作为用于常规PCR和巢式PCR扩增的孢子保存方法;10%福尔马林和Müller's液保存方法对孢子DNA提取和常规PCR扩增均有影响,但均能在巢式PCR扩增后出现特异电泳条带,故只能作为用于巢式PCR扩增的孢子保存方法;Carnoy's液保存方法无论在孢子DNA提取还是进行常规PCR和巢式PCR扩增均无阳性结果,故不能用作孢子核酸分子生物学研究的保存方法。研究表明,除100%乙醇和70%乙醇保存方法外,其他保存方法对孢子DNA提取、常规PCR和巢式PCR扩增均有不同程度的影响。     

基于数字图像处理技术的鱼类寄生碘泡虫分类研究

针对采用传统的形态学分类方法进行鱼类寄生碘泡虫的分类时需要手动测量各种参数以作为分类依据的效率问题,提出了一种全新的基于数字图像处理技术的孢子虫参数提取方法,从而实现了孢子虫的分类操作。选取丑陋圆形、山东、野鲤、异形等4种碘泡虫作为研究对象,通过碘泡虫在显微镜下的图片样本进行形态学特征参数的计算,从而依据各类参数进行碘泡虫的区分。首先通过Canny边缘提取算法对单个碘泡虫图像进行边缘提取,再对最外层边缘进行椭圆拟合,得到碘泡虫的偏移角度作为将碘泡虫摆正位置的依据,从而计算孢子的长宽与面积。摆正孢子位置后寻找2个极囊的种子点,根据种子点进行改进的区域生长算法得到2个极囊的图像,再通过Canny算法计算得到极囊边缘的同时计算极囊的长宽与面积,最后对2个极囊边缘做椭圆拟合得到2个极囊之间的夹角和囊间突的位置。将所有得到的参数投入分类器进行分类操作,可准确地将4种碘泡虫区别开。     

中国淡水鱼类单极虫病的研究Ⅰ.河南信阳鲤鱼单极虫病的研究

1993年作者对河南信阳市南湾水库网箱养殖鲤鱼肠道单极虫病进行了系统研究。该地区发病率高达 90 %以上 ,发病鲤鱼肠壁上寄生了大量单极虫孢囊 ,破坏肠道组织 ,吸收鱼体营养 ,病鱼失去光泽 ,体色呈暗黑色 ,肠管呈紫红色 ,充满脓血粘液 ,大型孢囊集中在中、后肠 ,孢囊形态大多为椭球形 ,最大个体为 4 .5× 2 .5cm ,肠管膨大一倍以上 ,肠壁变薄 ,肠道完全被堵塞 ,停止进食而死亡。经比较研究 ,该病原体被定为信阳单极虫新种 (Thelohanellusxinyangensissp .nov .)。作者对感染和未感染鲤鱼血清进行了免疫试验 ,发现病鲤血清蛋白带比未感染粘孢子虫鲤鱼血清多 5— 7条 ,该血清与单极虫孢子经交叉免疫电泳发生沉淀反应 ,表明病鲤血清具有特异性抗体产生。作者在病鲤血液中还发现“未明血液生物体”(UBO) ,对肝、肠组织亦进行了病理学研究     

茚虫威降解菌海藻酸钠微球制剂研制及应用效果

[目的]以海藻酸钠为载体制备降解菌斯氏假单胞菌(Pseudomonas stutzeri)ACCC 02521菌株微球制剂,确定该制剂降解农田土壤茚虫威的应用条件.[方法]通过微滴包埋成球法,将湿菌体重悬后加入海藻酸钠溶液,混匀后逐滴滴至CaCl2溶液造粒,低温固定后,以0.9％NaCl溶液洗涤,测定降解菌微球的传质性...     

洪湖碘泡虫多克隆抗体的制备及免疫特性分析

利用蔗糖密度梯度离心法分离纯化洪湖碘泡虫,经反复冻融、液氮研磨提取可溶性蛋白,免疫小鼠制备得到多克隆抗体,并采用间接酶联免疫吸附法(ELISA)、间接免疫荧光试验(IFAT)、免疫印迹分析(Western blotting)对多克隆抗体的免疫特性进行分析。间接ELISA法测定多抗血清的效价为1∶25 600;IFAT荧光定位显示洪湖碘泡虫的抗原主要位于极丝、孢子壳瓣的四周及底部一特定位置;Western blotting印迹分析显示该多抗血清与洪湖碘泡虫可溶性蛋白中约10条带发生反应,该可溶性蛋白中具有免疫原性的蛋白分子质量大小分别约为180、130、78、75、62、52、42、36、34、28ku。该多抗血清与碘泡虫属及单极虫属的一些粘孢子虫种类存在一定程度的交叉反应。     

5种杀虫剂对棉花粉蚧的防治效果评价

[目的]筛选可用于棉花粉蚧Phenacoccus solenopsis Tinsley化学防治的高效药剂.[方法]采用喷雾法测定了22％氟啶虫胺腈悬浮剂、22.4％螺虫乙酯悬浮剂、30％烯啶虫胺水分散粒剂、60％烯啶虫胺·吡蚜酮水分散粒剂、40％噻虫啉悬浮剂5种农药制剂3个浓度对棉花粉蚧3龄若虫的防效.[结果]5种药剂防效在7 d内随时间延长总体呈上升趋势.处理后7 d,22％氟啶虫胺腈悬浮剂3000倍液对棉花粉蚧的防效达91.67％,22.4％螺虫乙酯悬浮剂500倍液的防效达92.08％,30％烯啶虫胺水分散粒剂1000倍液、60％烯啶虫胺·吡蚜酮水分散粒剂2500倍液、40％噻虫啉悬浮剂1000倍液的防效分别为98.67％、94.53％、92.83％.[结论]22％氟啶虫胺腈悬浮剂、22.4％ 螺虫乙酯悬浮剂、30％烯啶虫胺水分散粒剂、60％烯啶虫胺·吡蚜酮水分散粒剂、40％噻虫啉悬浮剂5种农药制剂对棉花粉蚧均具有良好防效,可用于该蚧的防治.该研究为棉花粉蚧的化学防治提供了依据和指导.     

安氏隐孢子虫ITS-1基因PCR检测方法的建立

[目的]建立针对安氏隐孢子虫的PCR快速检测方法,为安氏隐孢子虫的检测和分子流行病学调查提供技术支撑.[方法]根据GenBank中安氏隐孢子虫的ITS-1基因序列设计1对特异性引物,建立基于ITS-1基因的PCR方法,并通过特异性试验、敏感性试验、临床检测以及与经典巢式PCR检测方法进行比较等,验证其可行性.[结果]基于ITS-1基因的PCR检测方法能扩增出安氏隐孢子虫的特异条带,而对猪源隐孢子虫、贝氏隐孢子虫、微小隐孢子虫、牛泰勒氏虫、牛巴贝斯虫、伊氏锥虫、食道口线虫的扩增结果均为阴性;将测序结果进行BLAST比对,发现其与GenBank中安氏隐孢子虫的同源性均在99%以上.敏感性最低可检测每克牛粪中5个卵囊;用于检测广西不同地区的1613份牛粪样品时,与经典巢式PCR检测方法相比,发现两者的阳性检出率均为11.72%,且吻合率达100%.[结论]安氏隐孢子虫ITS-i基因PCR检测方法具有快速、敏感、特异的特点,适用于安氏隐孢子虫的检测和分子流行病学调查分析.     

蚧虫初孵若虫采集、保存和玻片标本制作

蚧虫初孵若虫用FAA固定液固定有利于玻片制作和长期保存。在虫体软化、脱水、染色和清洗过程中,使用自制转移虫袋,使得虫体转移更为简易,并可以进行批量处理。用丁香油替代二甲苯、Euparal替代中性树脂或加拿大树胶,使制作过程更具有安全性。     

鸡球虫的分离与感染试验

[目的]为探讨长期有效的鸡球虫病防控方法奠定基础.[方法]分离并培养鸡球虫卵囊,通过感染雏鸡试验研究其卵囊发育和感染的过程.[结果]分离到的球虫卵囊大多形态饱满,为宽椭圆形,少数为卵圆形,壁光滑,中间明显可见1个圆形核,原生质呈淡褐色,卵囊大小约为18.5～25.5 μm× 16.7～22.5 μm.正常的孢子化卵囊多能见到分化明显的4个孢子,18 h可看到部分卵囊孢子化,36h孢子化达80％.接种后发病雏鸡的体重缓慢增加,血便明显,死亡率较高,同时解剖可见盲肠病变明显,肠壁增厚,严重者因充满大量血液而盲肠肿大.[结论]根据卵囊的形态、发病鸡的临床表现、卵囊寄生部位和盲肠病理变化等特征,初步判断分离的球虫主要为柔嫩艾美耳球虫.     

新疆北疆部分地区鸡球虫病病原调查及分类鉴定

[目的]调查新疆北疆部分地区鸡球虫病病原分布情况,明确近年来新疆北疆地区鸡球虫病的致病种类情况.[方法]采用定点采样法,从沙湾、石河子、玛纳斯和昌吉等地采集病死禽的肠道直接进行粪便处理和病原学检查,收集新鲜粪样进行鸡球虫卵卵囊分离,进行孢子化卵囊培养和形态学观察,对鸡球虫进行虫种鉴定.[结果]鸡球虫的感染率为100;,共检出6种艾美耳球虫,分别为柔嫩艾美耳球虫(Etenella)、巨型艾美耳球虫(E.maxima)、堆型艾美耳球虫(E.acervulina)、和缓艾美耳球虫(E.mitis)、哈氏艾美耳球虫(E.hagani)、布氏艾美耳球虫(E.Brunetti).其中柔嫩艾美尔球虫、巨型艾美耳球虫和堆型艾美耳球虫为新疆北疆地区鸡球虫病病原的优势虫种.[结论]研究对新疆部分北疆地区的鸡球虫原分布及其构成进行了初步确定,了解其病原水平,从而为该病防治中抗球虫药物的选择及代化用药方案提供必要数据,今后北疆地区预防和控制该病提供依据.     

梅干菜提取物保鲜草莓的研究

[目的]探讨梅干莱乙醇提取物对草莓涂膜保鲜的效果。[方法]用95％乙醇对购自江西的梅干菜进行60℃振荡浸提,得到乙醇提取物浓缩液,然后加入l％黄原胶溶液配制成不同浓度的涂膜液,将新鲜草莓分别浸渍在梅干菜提取物浓度为0、0．5％、1．O％和2．0％的涂膜液中,2min后测定草莓的品质指标。[结果]草莓采后用不同浓度的梅干菜提取物进行浸泡涂膜处理均可显著降低果实的腐烂率和失重率,延缓草莓中vc、可滴定酸和可溶性糖等营养成分的消耗,延缓果实在贮藏期间的品质降低,提高草莓的保鲜效果。梅干莱提取液的浓度越大对草莓的保鲜效果越明显。2％梅干菜提取物涂膜可使草莓腐烂时间延长至1周。[结论]用梅干菜提取物作为草莓的保鲜剂安全、无毒、保鲜效果好。     

芝麻蒴果发育规律研 究

[目的]研究芝麻纵向不同部位的开花结蒴的规律以蒴果的发育特性。[方法]以郑芝98N09为研究对象,于芝麻盛花期将其纵向划分为下部节位（8节位以下）、中部节位（9～20节位）和上部节位（20节位以上）,测定不同部位开花和结蒴数目、蒴果长度、宽度、鲜重、籽粒鲜重和干重、以及果皮干重。[结果]随着节位的增加,郑芝98N09开花和结蒴数目呈先增加后下降的变化趋势。其中,在第15节位开花数目达最大值,为9.3朵/节;第12节位结蒴数目达最大值,为4.2个/节位。不同部位结蒴能力比较,中部节位结蒴能力最高,开花结蒴率为45.1%,上部节位次之,为30.1%,下部节位仅为25.0%。中部蒴果的长度、宽度、鲜质量和籽粒的鲜质量、干质量以及果皮干质量均高于下部蒴果和上部蒴果;下、中、上部蒴果平均灌浆速率分别为0.0035、0.0044、0.0031 g/（蒴＆#183;d）,表明在蒴果发育过程中光合物质优先供应中部蒴果。[结论]该研究结果为芝麻高产栽培提供理论依据。     

绿豆尾孢菌叶斑病田间药剂防治试验

试验研究了3种杀菌剂10种处理对绿豆尾孢菌叶斑病的防治作用,结果表明,用25%嘧菌酯悬浮剂500倍液浸种2 h+25%嘧菌酯悬浮剂600倍液喷雾、25%多.霉威悬浮剂500倍液浸种2 h+25%多.霉威悬浮剂600倍液喷雾、25%戊唑醇乳油500倍液浸种2 h+25%戊唑醇乳油600倍液喷雾,相对防效分别为87.23%,84.85%,82.29%,防治效果较好,是防治绿豆尾孢菌叶斑病较理想的药剂,且具有一定的增产效果。建议生产上配合其他药剂交替使用。     

内生细菌对黄瓜灰霉病的防治研究

［目的］为黄瓜灰霉病的生物防治提供参考依据。［方法］以黄瓜叶片内生细菌B12、B13为供试菌株,通过孢子萌发试验研究了菌株发酵液及发酵滤液对灰霉菌分生孢子萌发的影响。［结果］菌株B12、B13的发酵原液对孢子萌发的抑制率分别为94.4%和91.3%,对芽管生长的抑制率分别为84.2%和79.7%,稀释10倍后其孢子萌发抑制率分别为87.2%和78.2%。菌株B12、B13的发酵滤液对孢子萌发的抑制率分别为90.0%和84.4%,对芽管生长的抑制率分别为82.6%和76.7%。50℃下,菌株B12、B13的发酵滤液的抑制率分别为84.7%和83.1%,经100℃沸水浴处理后其抑制率分别为78.9%和73.9%,经121℃高温处理后其抑制率分别为35.7%和27.2%。pH值为3时,B12和B13的发酵滤液的抑制率分别为11.3%和9.3%;pH值为12时,其抑制率分别为31.4%和25.4%。［结论］内生细菌B12、B13可用于防治黄瓜灰霉病。     

利用冷冻切片法与石蜡切片法对水貂组织切片进行优化研究

应用冷冻切片法和石蜡包埋切片法,对水貂体组织进行切片后HE染色观察;并在冷冻切片方法中应用3种不同的固定剂,对固定剂的同定效果进行对比分析。结果表明,石蜡切片法更适合于脑组织,而冰冻切片法更适合于皮肤组织。冰冻切片方法中3种固定剂的固定效果比较,同定NA（无水乙醇80mL、甲醛10％10mL、冰醋酸10mL）优于固定剂C（10％的福尔马林溶液）与固定剂B（甲醛40％15mL、无水乙醇85mL）。     

伏毛铁棒锤根对小菜蛾杀虫活性初步研究

[目的]研究伏毛铁棒锤根的杀虫活性及其活性物质。[方法]以乙醇超声法提取伏毛铁棒锤根中的活性物质,采用浸虫法测试提取物对小菜蛾的触杀活性;并采用液-液分配萃取法用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇对提取物依次萃取,且跟踪测试各萃取物的活性。[结果]0.05 g/ml伏毛铁棒锤根提取物对小菜蛾有较强的活性,施药72h后校正死亡率为95.0%;提取物分离后石油醚萃取物活性最强,氯仿萃取物次之,0.005 g/ml时施药72h后校正死亡率分别为94.0%和60.0%,而乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物及水层剩余物无活性。[结论]伏毛铁棒锤根对小菜蛾具有较强的触杀活性且杀虫活性物质为一类小极性的化合物。     

大叶紫薇总黄酮的提取工艺研究

[目的]为深入研究大叶紫薇总黄酮的生理功能,对其最佳提取工艺进行研究。[方法]采用单因素试验和多因子正交试验对大叶紫薇总黄酮的提取工艺进行初步研究,并比较不同季节对大叶紫薇叶总黄酮含量的影响。[结果]单因素试验表明提取工艺的最佳提取条件为料夜比1∶40、乙醇浓度为60%、浸提温度70℃、浸提0.5 h。正交试验表明最佳提取条件为:50%乙醇、料液比1∶40、60℃浸提1.5 h、此条件下提取率为6.71%;3～11月黄酮的含量分别为51.2、49.3、50.4、54.0、65.8、66.1、68.9、70.7和77.0 mg/g,其中11月的总黄酮含量最高。[结论]该研究得出最佳提取条件为50%乙醇、料液比1∶40、60℃下浸提1.5 h;11月黄酮的含量最高,为77.0 mg/g。     

菠萝蜜优良单株云热-206的选育研究

介绍了菠萝蜜优良单株云热-206的选育过程及其特征特性。该单株的产量、品质均优于其他单株及当地种植群体,果实椭圆形、中等大,平均单果重2 233.0 g,果皮青绿色;种子长2.957 cm、宽2.052 cm,每公斤果实的种子数较少(40.9粒);成熟时果苞金黄色,果苞长3.951 cm、宽3.256 cm,果苞重比率为72.40%,果苞清香味浓,综合性状优良。     

峨参胶囊的提取和成型工艺研究

[目的]对峨参胶囊的提取和成型工艺进行研究。[方法]根据峨参已知化学成分,用正交试验法优选出峨参醇提的工艺条件;进行了峨参脂溶性成分薄层色谱试验;对装胶囊前的颗粒进行流动性、堆密度、吸湿性试验的质量检查;对所制胶囊剂按照《中国药典》制剂通则规定,进行质量检查。[结果]醇提的最佳工艺为4倍量60%的乙醇提取1.5 h,提取3次;装胶囊的颗粒和胶囊剂均符合药典规定。[结论]该试验结果可为进一步开发以峨参为主料的保健食品打下基础。     

武汉单极虫巢式聚合酶链反应检测方法的建立与优化

应用巢式聚合酶链反应(nested PCR)建立了一种检测异育银鲫武汉单极虫(Thelohanellus wuhanensis)基因组DNA的方法,提取的DNA作为模板进行两次扩增,第一次扩增用单极虫18S rRNA序列通用引物:5'-CTGCGGACGGCTCAG TAAATCAGT-3'和5'-CCAGGACATCTTAGGGCATCACAGA-3',扩增长度为1 584 bp;第二次依据第一次扩增产物中武汉单极虫特有的高度保守区设计特异性引物:5'-ACCCACTTCTGTGGC CTTTC-3'和5'-AATCCGACCTACAACGCTGG-3',扩增长度为853 bp。结果表明,通过PCR反应体系中退火温度、dNTP、Mg2+、延伸时间、扩增循环数和模板浓度的优化,优化后的巢式PCR最低DNA检测量达10 fg,优化后比常规PCR检测的灵敏度高104倍。因此,本文所建立的巢式PCR检测方法适合于水环境或水生动物中武汉单极虫的微量检测,也为异育银鲫武汉单极虫病的诊断和流行病调查提供了一种高灵敏的检测技术。