小鱼眼球视网膜组织石蜡切片的制作方法

目的观察小鱼眼球(直径在0.3cm左右)视网膜组织石蜡切片的制作方法。方法鲻鱼和罗非鱼各5条,采得眼球20个,用体积分数(下同)95%乙醇85mL 10%中性甲醛10mL 冰醋酸5mL混合而成的FAA固定液进行固定;脱水前先用医用7号针头刺破眼球后再进行脱水、透明、石蜡包埋、切片和HE染色,最后在光镜下观察结果。结果20个眼球的视网膜组织结构和层次均基本保持完整,细胞形态清晰。结论0.3 cm左右直径的鱼类小眼球用FAA固定液固定和针刺破眼球后脱水法制作石蜡切片方法是可行的。     

蜜蜂卵3种组织切片制作方法比较

本试验分别采用常规石蜡切片、脂肪包卵石蜡切片和冰冻切片3种方法对意大利蜜蜂卵进行切片HE染色和显微镜观察。结果发现:(1)常规石蜡切片法难以制作出蜜蜂卵切片。(2)冰冻切片法可以制作出清晰完好的蜜蜂卵组织切片,对样本中的蛋白质和核酸保存较好,但也有切片较厚,难以连续切片,保存时间短等固有缺陷。(3)脂肪包卵石蜡切片制作法能制作出完整而清晰的蜜蜂卵组织切片,且切片较薄,卵切片组织的清晰度和完整度要优于冷冻切片,该方法制作出的卵切片也利于切片的长期保存,但卵的整体外观形态存在一定程度缢缩。     

脑组织冰冻切片漂片法与石蜡切片贴片法的免疫组化效果比较

目的:比较脑组织冰冻切片与石蜡切片免疫组化的效果。方法:健康雄性昆明小鼠20只,腹腔注射匹罗卡品诱导癫痫持续状态模型。24h后成功模型小鼠脑灌注固定,断头取脑,随机分别取8只行冰冻切片40μm(A组)与石蜡切片4μm(B组),采用羊抗鼠DCX(1:200)抗体,以SABC法进行免疫组化染色。结果:A组阳性神经元数目与B组比较差异有统计学意义(P0.05),且A组镜下视野切片染色更加清晰,对比良好。结论:脑组织切片免疫组化染色采用冰冻切片漂片法效果更为可靠。     

软骨组织切片不同制作方法的比较

采用正丁醇脱水及脱钙处理制作软骨石蜡切片和冰冻切片,并用阿利辛蓝、甲苯胺蓝和Masson三色法对软骨细胞进行特异性染色,对软骨切片制作方法进行了比较研究.结果表明,软骨组织改良石蜡切片优于普通石蜡切片;冰冻切片较石蜡切片快速、简便,但保存时间短;石蜡切片操作复杂、时间长,但切片保存效果较好.3种染色方法对软骨细胞均能特异性着色.由此证明,使用冰冻切片和阿利辛蓝、甲苯胺蓝和Masson三色染色法可以制作良好的软骨组织切片.     

一种用于观察木薯显微结构的冰冻切片技术

采用直接包埋法冰冻切片、蔗糖保护法冰冻切片和石蜡切片3种方式对木薯的根、茎、叶等组织进行切片,并在显微镜下观察和拍照。结果表明,在合适的蔗糖浓度下,蔗糖保护法用于木薯不同器官的冰冻切片,可以真实的反映细胞的显微结构,且切片组织完整性和图片清晰度效果良好。     

大豆根部冰冻切片最佳方法试验

通过对不同品种大豆根部冰冻切片技术的各个环节及参数的研究.建立了一种适合于大豆根部的冰冻切片技术,即材料固定、速冻、冷冻保护、包埋后进行冰冻切片.筛选出适合于大豆根部冰冻切片的温度、包埋剂、保护液、固定剂.探索出影响切片质量的关键因素.从而为大豆根部的细胞生物学提供了简便、快速、高效的切片技术.     

观察植物木质部的3种切片方法比较

为探讨出一种能更清楚有效地观察植物木质部结构的细胞学切片方法,以甘蓝型油菜N529及拟南芥野生型col-4为材料,利用快速冷冻切片法、石蜡切片法及徒手切片法制备植物茎组织切片.切片经组织化学染色:1%间苯三酚和25%盐酸处理,并通过Nikon倒置显微镜观察和比较3种不同切片的植物细胞形态结构.结果表明快速冷冻切片法处理的植物细胞结构保存较完好,木质素染色清晰,且操作方法简便、快速、有效.     

观察植物木质部的3种切片方法比较

为探讨出一种能更清楚有效地观察植物木质部结构的细胞学切片方法,以甘蓝型油菜N529及拟南芥野生型col-4为材料,利用快速冷冻切片法、石蜡切片法及徒手切片法制备植物茎组织切片。切片经组织化学染色：1%间苯三酚和25%盐酸处理,并通过Nikon倒置显微镜观察和比较3种不同切片的植物细胞形态结构。结果表明快速冷冻切片法处理的植物细胞结构保存较完好,木质素染色清晰,且操作方法简便、快速、有效。     

兔膝关节炎骨关节组织切片的制备方法

制备高质量骨关节组织的石蜡切片,是组织病理学评价相关动物骨关节炎的重要技术支撑.通过在兔一侧膝关节的股骨内侧髁关节面制造直径3 mm深度4 mm的全层关节软骨缺损,获得兔骨关节炎动物模型.术后4周,分离股骨髁,经过10%中性甲醛固定舜口混合酸脱钙后制备组织石蜡切片,并行苏木精-伊红(HE)和番红-固绿染色.结果显示:造模侧损伤填充区细胞表现为软骨样细胞特征.该法制备的骨关节组织切片,标本平坦完整,软骨和骨组织结构分明.是一种快速有效的骨关节组织石蜡切片的制备方法,为骨关节炎相关动物的组织病理学评价奠定基础.     

用改进石蜡切片法观察大鳞副泥鳅皮肤虹彩细胞

以大鳞副泥鳅为研究对象,针对常规石蜡切片无法观察到鱼类皮肤虹彩细胞的不足,固定液改用10%中性福尔马林,脱水前使用1.5%琼脂糖对组织进行预处理,染色使用3%伊红。结果发现:大鳞副泥鳅新鲜皮肤组织选用10%中性福尔马林进行固定,在梯度脱水前用1.5%琼脂糖对组织进行预处理,并用3%伊红进行染色,即可以得到组织结构完整、虹彩细胞清晰的皮肤组织切片。表明改进后的石蜡切片法可以用于鱼类皮肤虹彩细胞观察。     

固定液保存对粘孢子虫形态的影响

[目的]探讨固定液对粘孢子虫形态的影响,确定统一的形态学测量条件,提高粘孢子虫分类鉴定的正确性.[方法]比较以0.9％生理盐水、蒸馏水制作水浸片及2.5％戊二醛、10％福尔马林、100％酒精、Bouin氏液、Carnoy氏液、Dafano氏液、Muller氏液、Schaudinn氏液等8种固定液保存24h和30 d后武汉单极虫（Thelohanellus wuhanensis与咽碘泡虫（Myxobolus pharynae）的形态变化,测量指标包括孢子长、孢子宽、孢子厚、极囊长和极囊宽.[结果]以0.9％生理盐水制作水浸片对武汉单极虫与咽碘泡虫的孢子长、孢子宽、孢子厚、极囊长和极囊宽稍有变化,但差异不显著（P＞0.05,下同）;以蒸馏水制作水浸片,两种成熟孢子的孢子厚、极囊长和极囊宽显著膨胀（P＜0.05,下同）.经8种固定液分别保存24 h和30 d后均会对两种粘孢子虫产生不同程度的影响,影响最大的是100％酒精,其总变化率高达8.38％和7.94％、9.05％和6.79％;2.5％戊二醛与10％福尔马林对粘孢子虫的收缩作用相对较小,保存24 h和30 d后的总变化率均小于3.00％,但对个别指标也会产生显著的收缩作用.[结论]经固定液保存后的粘孢子虫不适合作为形态学鉴定测量样品,实际生产中可采用新鲜成熟孢子与0.9％生理盐水制作孢子水浸片进行形态观察和测量.     

芝麻染色体常规制片技术关键因子的优化研究

为了探索最佳的染色体制片方法,以芝麻活体种子根尖为材料,研究根尖预处理方法、解离时间、取材长度和染色方法等关键因子对芝麻染色体制片的影响.结果表明,预处理方法为40 mg/L的放线茵酮溶液处理3h、饱和对二氯苯溶液处理4h或0.002 mol/L 8-羟基喹啉溶液处理3h;取材长度为0.5～1.0 mm;在V无水酒精∶...     

松栎柱锈菌春孢子显微计数方法的筛选1）

为了选出松栎柱锈菌（ Cronartium guercuum）春孢子破壁前的显微计数的最佳方法。通过对4种孢子计数方法的比较,筛选出了适宜的预处理方法和计数方法。结果表明：100 mL水中加入15 g无水硫酸锌（ ZnSO 4）制成的硫酸锌溶液与无水乙醇（ C2 H5 OH）体积比为5∶1时对松栎柱锈菌春孢子分散效果最好。方法三最适合用于该菌锈孢子显微计数。     

大鼠Crohn病模型制备的改进

目的：用三硝基苯磺酸(TNBS)和乙醇建立Crohn病(CD)的二种大鼠模型,并比较不同乙醇用量对模型的影响。方法：肠道灌注含TNBS 30mg的溶液(5％TNBS0．6mL 无水乙醇0．3mL),建立大鼠CD模型(称为TNBS／E1实验组),分别于1,3,7,14,21,28d处死。观察各时点结肠大体形态和组织学改变。设肠道灌注生理盐水(0.9mL)、5％TNBS(0.6mL) 50％乙醇(0.3mL)两个对照组(分别称为盐水对照组及TNBS／E2对照组),分别于1、14d处死。结果：TNBS／E1实验组大鼠致炎后第1周主要表现为肠壁高度水肿、出血、糜烂、溃疡形成及大量中性粒细胞浸润的急性炎症;第2周后有类似于铺路石样征,甚至节段性炎症,光镜发现在粘膜下出现淋巴细胞聚集。裂隙溃疡、肉芽肿形成;21d后溃疡开始愈后,炎症慢性化,大体形态开始恢复正常。但光镜下仍有明显炎症反应。TNBS／E2对照组大鼠的个体差异很大。在第14天时大部分肠壁形态基本恢复正常,光镜下炎症表现差别较大。结论：5％TNBS0．6mL 无水乙醇0.3mL灌肠造成的模型与人类CD近似,炎症持续时间较长。是一种研究CD发病机制和评估药物疗效的工具。     

甘蔗糖蜜发酵液中维生素B12提取方法的比较

[目的]筛选出适合提取甘蔗糖蜜发酵液中维生素B12的方法,解决糖蜜发酵液中菌体难破碎的问题.[方法]针对谢氏丙酸杆菌和维生素B12的特性,分别采用煮沸法、微波加热法及Na2HPO4加压法对谢氏丙酸杆菌菌体进行破碎,比较不同细胞破碎方法对菌体维生素B12提取率的影响.[结果]使用煮沸法、微波加热法、Na2HPO4加压法破碎细胞提取维生素B12的最佳工艺条件：煮沸法为100℃处理30 min,微波加热法为140 W处理6 min,Na2HPO4加压法为Na2HPO4提取剂添加量25 mL/g、121℃处理10 min,对应的甘蔗糖蜜发酵液中维生素B12提取率分别为92.25％、95.67％和89.36％.[结论]煮沸法是提取菌体内维生素B12时细胞破碎的首选方法.     

新疆野苹果组织培养体系的建立

以新疆野苹果带腋芽的幼嫩茎段为外植体进行组织培养研究,采用在木本植物组织培养上经常采用的消毒方法,并进行外植体消毒方法的比较研究,结果表明:新疆野苹果带腋芽的幼嫩茎段组织经70%乙醇15 s、1‰氯化汞10 min、70%乙醇10 s消毒后效果最好;初代诱导培养最佳培养基为改良MS+0.5 ms/L6-BA+0.1 m...     

植物生长调节剂对甘蓝型油菜愈伤组织诱导和生长的影响

利用植物组织培养方法,探讨甘蓝型油菜种子的最佳消毒方式以及叶片和茎段在附加不同质量浓度KT,6-BA,NAA,2,4-D的MS培养基中愈伤组织诱导的影响。结果表明,对于不同品种甘蓝型油菜种子采用2种消毒方式进行培养,污染率都较低。B1,B10,A5品种的第Ⅱ种消毒方式(75%酒精2 min+0.1%HgCl220 min)较好;B4品种的2种消毒方式(75%酒精2 min+0.1%HgCl2 20 min和75%酒精3 min+0.1%HgCl230 min)差别不大。B1,B4,B10,A5品种的甘蓝型油菜叶片和茎段愈伤组织诱导的结果表明,不同激素组合对叶片和茎段愈伤组织诱导及生长都有很大的影响,其中,MS+6-BA 2 mg/L+NAA 0.5 mg/L培养基有利于愈伤组织诱导及生长。     

睾丸和卵巢打点注射pIRES2-EGFP质粒生产转基因兔的研究(英文)

为探讨直接用注射器对睾丸和卵巢打点注射pIRES2-EGFP质粒转染兔的精子细胞和卵母细胞,建立操作方便、效率高、成本低、可批量生产转基因兔的可行性。选择5只成年新西兰雄兔、29只经产新西兰雌兔,每侧睾丸和卵巢内分别打点注射0.5~0.8 mg/mL质粒0.25 mL。①第3周随机取一只雄兔睾丸做冰冻切片,于荧光显微镜下观察转染情况。②(Ⅰ:1#♂×7♀、Ⅱ:2#♂×7♀、Ⅲ:3#♂×7♀、Ⅳ:4#♂×7♀)其它雄兔于第6周和第7周与3日前做过卵巢注射并超排处理的雌兔配种,最后采集新生仔兔耳组织,提取基因组DNA,经PCR和Southern杂交检测阳性率。结果显示雄兔睾丸冰冻切片于荧光显微镜下可见绿色荧光,统计所得后代转基因阳性率,并进行差异分析,其中Ⅰ组后代阳性率最高,PCR和Southern杂交检测阳性率为93.55%和83.87%,Ⅳ后代阳性率最低,依次为80.65%和70.97%,但是各组之间差异不显著。上述实验结果表明,对睾丸和卵巢同时注射外源基因可获得较高阳性率的转基因后代,生产转基因的方法操作简便、高效,为日后大规模制备一些大型家畜的转基因后代奠定了基础。     

Response of Leaf Tissue Structure to Exogenous ABA in Korla Fragrant Pear

To study the effects of different concentrations of Abscisic Acid(ABA) on leaf tissue structure of Korla fragrant pear and lay the foundation for the cultivation and regulation of Korla fragrant pear. Using the paraffin section method, the leaf thickness, the epidermis thickness, the palisade tissue thickness and the sponge tissue thickness were measured; palisade spongy ratio, Cell Tightness(CT) and Cell Looseness(CL) were examined after treatments with exogenous ABA. Leaf thickness, leaf palisade spongy ratio and palisade tissue thickness increased significantly after exogenous ABA treatment compared with CK, while the effect on leaf epidermis was not obvious. The leaf thickness and palisade tissue thickness increased evidently after 70 mg · L~(-1) ABA treatment by 24.89% and 41.10%, respectively. The tissue structures of leaves were more compact, while CL was lower after 70 and 90 mg · L~(-1) ABA treatments. The effects of different concentrations of exogenous ABA could increase the leaf thickness, palisade tissue thickness of Korla fragrant pear and CT, reduced the thickness of spongy tissue and CL. Among those concentrations of exogenous ABA, the effect of spraying 70 mg · L~(-1) exogenous ABA was suitable for improving cold resistance of Korla fragrant pear.