氮源对蛹虫草产量及药效物质产量影响的研究

为研究氮源对蛹虫草产量及药效物质产量的影响,本试验测定了添加不同量氮源时蛹虫草的产量情况,同时测定了蛹虫草中腺苷、虫草素、虫草多糖和虫草酸的含量。结果表明,PDA培养基添加10%的蚕蛹粉时蛹虫草的产量以及腺苷、虫草素和虫草酸的产量最高,PDA培养基添加15%的蚕蛹粉时蛹虫草的虫草多糖产量最高,综合考虑蛹虫草的药效价值最高,选用PDA培养基添加10%的蚕蛹粉为蛹虫草的最佳培养条件。     

以虫草素和腺苷含量为指标优化蛹虫草人工栽培

为提高人工栽培蛹虫草中主要活性成分的含量,以虫草素和腺苷含量为检测指标进行蛹虫草优化栽培研究,在采用Cm-1菌株、以20%豆粕为氮源、水料比为1.4的条件下,可获得子实体产量为每瓶42.2 g、子实体中虫草素含量为4.46 mg.g-1的栽培效果,虫草素含量超过了以蚕蛹为寄主的蛹虫草(2.83 mg.g-1),表明植物蛋白完全可以用作栽培蛹虫草的氮源,同时证实采收子实体后的培养基中仍含有大量虫草素,可作为提取虫草素的原料。     

不同氮源对蛹虫草菌丝及子实体生长状况的影响

为研究蛹虫草液体菌种制备及发菌出草等人工栽培全过程中所必需的适宜氮源,比较观察了常见无机氮源硝酸钾、尿素及常见有机氮源蚕蛹粉、蛋白胨、蛋清液、鱼粉对菌种质量、菌丝生长状况、发菌及出草情况的影响。结果表明,各种氮源对蛹虫草菌丝体生长均有一定的促进作用,有机氮源显著优于无机氮源,液体菌种生长以蛋白胨为佳;发菌出草培养基最佳氮源依次为蚕蛹粉、蛋白胨、鱼粉、蛋清液等有机氮源,其中,蚕蛹粉具有较好的促进出草作用,但抗感染能力弱于其他有机氮源。蛋白胨、蛋清液、鱼粉等有机氮源氮素营养全面、丰富,营养容易被菌丝吸收,菌丝生长健壮;制备液体菌种氮源以蛋白胨为佳,发菌出草以包括蚕蛹粉的复合氮源为佳。     

不同配方下固体培养蛹虫草活性成分含量比较

以蚕蛹、黄豆、玉米糁、蛋白胨为原料固体栽培蛹虫草,研究不同配方培养基对蛹虫草虫草素、腺苷、多糖、虫草酸含量的影响。结果表明,配方5下蛹虫草虫草素含量最高,配方1下腺苷含量最高,配方4下多糖、虫草酸含量最高,在纯蛹培养基中添加适量黄豆、玉米糁、蛋白胨有利于蛹虫草活性物质的提高。     

金针菇在藜麦固体培养基上发酵条件的探讨

为提高藜麦营养价值,本研究利用金针菇发酵藜麦,通过正交试验设计探讨碳源种类、氮源种类、碳氮源添加比例、时间等因素对发酵产物的影响。最终得出多糖最适发酵条件为:蔗糖、蛋白胨、碳氮源添加比例5:1、发酵时间15 d;多酚最适发酵条件为:葡萄糖、蛋白胨、碳氮源添加比例15:1,发酵时间15 d。金针菇与藜麦的发酵产物中多糖、多酚含量分别为130.46±5.42 mg·g~(-1)和4.89±0.02mg·g~(-1),与未发酵藜麦相比,均有显著提升。表明食用菌发酵可以有效提高藜麦营养成分,本研究为食用菌与藜麦发酵产物在食品行业的运用提供了有效的数据支持。     

硒锗组合对蛹虫草主要活性成分的协同效应

为了探讨微量元素硒锗组合对蛹虫草(Cordyceps militaris)中主要活性成分虫草素、腺苷和虫草多糖产生的协同效应,选择Na_2SeO_3质量浓度依次为5、10、15 mg/L,GeO_2质量浓度依次为100、200、300、400 mg/L,正交设计配制成12个硒锗组合质量浓度组,按照常规固体培养蛹虫草的方法,分别添加在基本培养基中,观察蛹虫草子实体在硒锗组合影响下的生长情况,再分别使用高效液相色谱和苯酚-硫酸法测定虫草素、腺苷和虫草多糖的含量。结果表明:经过不同质量浓度的硒锗组合处理,所有样品组的子实体生长发育都很健壮旺盛,绝大部分都呈金黄色,而且比空白对照组粗壮、色深。在生物量方面,相同条件下的鲜质量与干质量都明显大于对照组,干质量增长率最高可达14.50%。所有样品处理组的虫草素、腺苷和虫草多糖含量都高于对照组。当硒锗组合质量浓度为10 mg/L×300 mg/L时,子实体中虫草素含量达到最高,为1.12%,是对照组的2.89倍;当硒锗组合质量浓度为15 mg/L×100 mg/L时,子实体中腺苷含量最高为0.116%,是对照组的2.7倍;当硒锗组合质量浓度为10 mg/L×200 mg/L时,虫草多糖的合成量达到最高(5.72%),为对照组的1.93倍。硒、锗2种微量元素能显著影响蛹虫草子实体的生长发育及其主要生理活性物质的含量,硒、锗同时添加时具有明显的协同效应,有利于蛹虫草子实体生物量的增加以及虫草素、腺苷和虫草多糖的生物合成。     

不同培养液对蛹虫草多糖及虫草酸含量的影响

[目的]明确不同碳氮源培养液对蛹虫草多糖及虫草酸含量的影响。[方法]以不同碳氮源培养液振荡培养蛹虫草,用苯酚-硫酸法测定虫草多糖含量,用高碘酸钠法测定虫草酸含量。[结果]培养液中多糖含量以米蛹配方最高,为6.48mg/ml,其次为玉米糁蛹的5.87mg/ml;虫草酸含量以玉米糁蛹配方最高,为5.21mg/ml,其次为米蛹的4.94mg/ml;菌丝体中多糖含量以玉米糁蛹配方最高,为68.32mg/g,其次为米蛹的57.91mg/g;虫草酸以麦米蛹配方最高,达186.29mg/g,其次为小麦蛹的180.32mg/g。[结论]选择适宜碳氮源进行蛹虫草的液体培养,可获得多糖和虫草酸含量很高的培养物。     

人工栽培蛹虫草虫草素含量HPLC检测方法研究

应用高效液相色谱法检测蛹虫草子实体及其固体培养基中的虫草素含量,优化了样品前处理条件,色谱柱为MP-C18 (4.6 mm ×150 mm,5 μm),流动相为V(甲醇):V(水)=15:85,流速1 ml/min,柱温25 ℃,样品回收率范围为95.1%～104.2%;同时对比使用3种不同的培养基(大米、小麦、蚕蛹粉)栽培的蛹虫草子实体中虫草素的含量,结果表明生长在大米培养基上的蛹虫草子实体中虫草素含量最高.     

培养基渗透压对铁皮石斛原球茎生长和多糖含量的影响

以无菌铁皮石斛原球茎为材料,于培养液中分别添加不同浓度的甘露醇以调节其渗透压,研究不同甘露醇浓度对铁皮石斛原球茎生长及多糖含量的影响。结果表明:添加低浓度的甘露醇可促进铁皮石斛原球茎生长及增加多糖含量,添加高浓度的甘露醇能明显抑制铁皮石斛原球茎生长及降低多糖含量。在不同的培养时间,当甘露醇质量浓度为0~20g·L~(-1)时,原球茎活力、生长量、多糖含量和多糖产量总体呈上升趋势,当甘露醇质量浓度超过20g·L~(-1),原球茎活力、生长量、多糖含量和多糖产量呈下降趋势。培养后35d,各处理的原球茎干重、多糖含量和多糖产量均达最大值,且甘露醇质量浓度为20g·L~(-1)的处理其干重、多糖含量和多糖产量均高于对照和其他处理,分别为17.30g·L~(-1)、361.52mg·g~(-1)和6 255.38mg·L~(-1)。     

4种虫草真菌生长适宜碳、氮源的研究

通过平皿筛选的方法,比较分析了4种虫草真菌在不同碳、氮源培养基上的生长面积和生长情况,从而筛选出它们生长适宜的碳、氮源.结果表明:蛹虫草菌种生长的最适碳源为大米粉,最适氮源为脱脂奶粉和蚕蛹粉;蝙蝠蛾拟青霉菌种生长的最适碳源为大米粉和葡萄糖,最适氮源为花生粉、脱脂奶粉和蛋白胨;虫草被孢霉菌种生长的最适碳源为葡萄糖,最适氮源为蛋白胨;中国被毛孢菌种生长的最适碳源为葡萄糖和蔗糖,最适氮源为蛋白胨、酵母膏和脱脂奶粉.     

不同碳源下蛹虫草的产量及虫草素和腺苷含量

为获得提高蛹虫草产量及虫草素和腺苷含量的最佳碳源及添加量,以蛹虫草菌株CM-16为研究对象,小麦为主要栽培基质,采用单因素分析法,研究不同碳源对蛹虫草的子座产量及虫草素和腺苷的影响。结果表明:在栽培基质中添加9g/L可溶性淀粉,蛹虫草子座产量及虫草素和腺苷的含量有显著提高,此时子座产量(以干质量计)达43.28g/盒,蛹虫草子座中虫草素和腺苷的含量最高,分别为3.43mg/g和2.38mg/g,而添加葡萄糖及蔗糖对其影响较小。碳源是影响蛹虫草子座产量及虫草素和腺苷含量的重要因素,当以小麦为主要原料栽培蛹虫草时,淀粉为最优碳源。     

8种物质对蛹虫草液体发酵中虫草素及多糖含量的影响

【目的】研究不同前体物及营养物对蛹虫草液体发酵中虫草素和虫草多糖含量的影响,筛选提高虫草素及虫草多糖的最适添加物及其添加质量浓度。【方法】将不同质量浓度的腺苷、核糖、次黄嘌呤、谷氨酰胺、甘氨酸、核黄素、苯丙氨酸及甲硫氨酸8种物质添加到蛹虫草液体发酵培养基中,提取菌丝体中的虫草素与多糖,分别用HPLC法、硫酸-苯酚法对其含量进行检测。【结果】在8种添加物中,腺苷、核糖、谷氨酰胺、甘氨酸均能明显提高虫草素及虫草多糖的含量,其最适添加量分别为4.0,2.0～3.0,0.5～1.0,0.5mg/mL;苯丙氨酸、甲硫氨酸、次黄嘌呤对蛹虫草液体发酵中虫草素和多糖含量的促进作用不明显;核黄素对虫草素与多糖合成有抑制作用。【结论】蛹虫草发酵过程中添加腺苷合成途径中的前体物能明显提高其中的虫草素与虫草多糖含量。     

不同培养基质和培养时间对蛹虫草子实体生物量和蛋白质氨基酸组成的影响

研究了不同培养基质和不同培养时间对蛹虫草栽培菌株CM-H0810子实体生物量和氨基酸含量、组成的影响,以期为蛹虫草的生产及充分开发利用提供参考。结果表明:使用培养基E(蚕蛹)栽培获得的子实体生物量最低,但氨基酸总量最高,且必需氨基酸和非必需氨基酸比值以及必需氨基酸和氨基酸总量比值较为理想;与培养基C(米饭)比较,培养基A(麦粒)栽培获得的子实体生物量、蛋白质含量、氨基酸总量均较高;在培养基A(麦粒)或C(米饭)中添加10%蚕蛹粉后,子实体生物量变化不明显,但蛋白质含量和氨基酸总量显著高于未添加蚕蛹粉的处理;培养基A(麦粒)接种后第55天子实体生物量最高,第60天氨基酸总量最高;各供试培养基栽培的蛹虫草子实体,虽均以Leu为限制氨基酸,但氨基酸比值系数排序有所不同;不同培养时间的子实体样品中,氨基酸比值系数排序均为ThrPhe+TyrLysValIleLeuMet+Cys。     

促进桑黄次生代谢物累积的碳氮比及碳氮源优化研究

为促进桑黄次生代谢物累积,以仅添加碳源和氮源的培养基培养桑黄菌丝体,采用比色法测定菌丝中黄酮、多酚、甾醇以及三萜含量。结果表明:碳氮比在60∶1～100∶1的试验范围内,黄酮、多酚和甾醇含量均在碳氮比为80∶1时达到最高,其单位含量分别为168.27,6.70,7.95mg·g~(-1),而三萜含量在碳氮比为100∶1时达最高,为4.17mg·g~(-1);在此基础上,优化了蔗糖、果糖、葡萄糖和乳糖为碳源和硝酸铵、碳酸铵和硝酸钠作为氮源的碳氮组合,黄酮、多酚和甾醇含量均在葡萄糖和碳酸铵组合下达到最高,其单位含量分别为251.45,4.68,10.48mg·g~(-1),而三萜含量在乳糖和碳酸铵组合下达到最高,为35.78mg·g~(-1)。由上述结果可知,适合桑黄菌丝次生代谢物积累的碳氮比为80∶1,最佳碳源和氮源分别为葡萄糖和碳酸铵。     

蚕蛹虫草中虫草素和腺苷含量影响因素研究

以双蒸水为溶剂,用反相高效液相色谱-紫外检测法测定蚕蛹虫草样品中虫草素和腺苷含量,并用该方法测定了19-3、17-3、MS、1-1以及1-Y等12种不同虫草菌株栽培的蚕蛹虫草、不同品质的蚕蛹虫草以及蚕蛹虫草不同组织中的虫草素和腺苷的含量。结果表明:1-Y菌株的虫草素和腺苷含量均最高,质量分数达15.45 mg/g和4.40 mg/g;不同品质的蚕蛹虫草中虫草素则以感染而未出草的僵蚕最高;蚕蛹虫草的僵蚕体对虫草素的富集能力高于子座,蚕蛹虫草的子座对腺苷的富集能力高于僵蚕体。该结果可对探求高虫草素含量和高腺苷含量的虫草材料提供理论依据。     

响应面法优化蛹虫草液体培养条件

研究了碳氮源种类及其浓度对蛹虫草液体培养的影响,得出葡萄糖和蛋白胨为蛹虫草培养的最佳碳氮源。利用响应面分析法,对葡萄糖浓度、蛋白胨浓度、培养时间3个因素进行优化,得到蛹虫草液体培养的最佳的培养条件为：葡萄糖浓度33.30g/L、蛋白胨浓度12.50g/L、发酵时间为8d,在此条件下菌丝体生物量达到18.05g/L,多糖产量为1.13g/L。     

高产活性成分蛹虫草菌株的筛选

对7株不同的蛹虫草菌株进行比较分析,以期筛选得到高产活性成分的优质蛹虫草菌株。通过对7株蛹虫草菌株子实体的形态、产量、子实体中活性成分(虫草素、虫草酸、腺苷、虫草粗多糖)的含量等进行对比研究。结果表明,菌株H05综合品质最好,子实体产量可达20.4g·瓶-1,虫草素含量为0.523%、腺苷含量为0.556%、虫草酸含量为4.97%,虫草粗多糖含量为9.89%。此菌株子实体产量高,活性成分含量也较高,经济价值高,值得开发利用。     

不同食用方式下蝉花麦角甾醇、虫草素、腺苷和多糖的比较

开展对蝉花不同食用方式下其子实体、菌核、浸提液和浸提后蝉花,进行麦角甾醇、虫草素、腺苷和多糖的定量研究,以期得出有实用价值的差别性数据,为对蝉花进一步的综合利用提供理论数据。不同食用方式分为直接食用蝉花粉末、水煮后制剂和水煮后蝉花整食。根据市场上将蝉花质量高低按子实体大小划分,分别开发食用蝉花子实体、蝉花菌核、蝉花浸提液和浸提后蝉花。研究结果表明:(1)麦角甾醇。子实体中为0.34±0.05 mg·g~(-1),浸提蝉花中为0.31±0.03 mg·g~(-1),菌核中为0.07±0.01 mg·g~(-1),浸提液中未检出。(2)虫草素。子实体中为0.54±0.04mg·g~(-1),浸提蝉花中为0.28±0.02 mg·g~(-1),浸提液中为0.37±0.03 mg·g~(-1),菌核中为0.14±0.02 mg·g~(-1)。(3)腺苷。子实体中为0.61±0.04 mg·g~(-1),浸提蝉花中为0.35±0.05 mg·g~(-1),菌核中为0.30±0.06 mg·g~(-1),浸提液中为0.45±0.04 mg·g~(-1)。(4)多糖。菌核中为(14.84±1.79)%,浸提蝉花中为(13.34±0.95)%,子实体中为(13.17±1.02)%,浸提液中为(9.61±0.71)%。结果显示,蝉花子实体、菌核与浸提前后蝉花活性成分存在差异。     

蛹虫草栽培基质的模型优化研究

【目的】对蛹虫草人工栽培的栽培基质进行优化。【方法】以蛹虫草菌株CDM-003为供试材料,采用400mL玻璃罐头瓶为栽培容器,研究了蚕蛹粉、基质含水率、葡萄糖、蛋白胨和微量元素添加剂对蛹虫草子座生物学效率的影响。通过建立数学模型,确定蛹虫草人工栽培中上述几种常用基本基质用量与子座生物学效率之间的函数关系。【结果】确定了基质中各主要成分的最佳用量为:蚕蛹粉0.156g/g,葡萄糖12.19g/L,蛋白胨10g/L,基质含水率66.75%,微量元素添加剂25g/L。【结论】蚕蛹粉用量、基质含水率及栽培营养液中葡萄糖、蛋白胨、微量元素添加剂的含量对蛹虫草的生物学效率具有显著的影响。     

蛹虫草的营养生理研究

【目的】研究蛹虫草的营养生理特性。【方法】以蛹虫草菌株DS-16为材料,采用液体培养法测定其在不同培养基上的菌丝干重,比较不同的碳源、氮源、无机盐、维生素和植物生长调节剂对蛹虫草菌丝生长的影响效果。【结果】蛹虫草的碳源谱较宽,其中对蔗糖的利用效果最好,其次为葡萄糖;在供试氮源中其对复合氮源的利用效果最好,氨基酸类次之,无机氮源最差;矿物元素K、Na、Ca、Mg均可在一定范围内促进蛹虫草菌丝体生长;在维生素利用中,除VB6外均可不同程度地促进蛹虫草菌丝体生长,其中以烟酸的影响最为明显;植物生长调节剂(2,4-D、GA、6-BA、KT)在一定范围内都可以促进蛹虫草菌丝生长。【结论】蛹虫草菌丝生长的最适碳源为蔗糖,最佳氮源为蚕蛹粉;适量添加Ca、Fe、Cu及烟酸、、GA、2,4-D可以较好地促进蛹虫草菌丝的生长。