新城疫单抗酶联试剂盒对鸡群中强毒感染的监测试验

用新城疫（ＮＤ）单抗酶联试剂盒检测从疑有新城疫病毒强毒感染的鸡群中采集泄殖腔棉试样品６８份，检出阳性２０份。随机对其中１５份样品进行病毒分离，结果阳性符合率为１００％（１５／１５）。结果表明，该试剂盒特异性强，灵敏度高，诊断快速，易于基层推广应用。为ＮＤ的确诊和免疫鸡群中ＮＤＶ强毒感染的监测提供了新方法。     

免疫鸡群中新城疫强毒感染流行趋势的探讨

采用运用ND单抗酶联免疫试剂盒作为ND流行病学调查手段,对本地区部分免疫鸡群中ND强毒感染进行监测,结合测定个体HI抗体,探讨免疫鸡群中ND强毒感染流行原因和趋势,为制定合理的ND控制计划,尤其在改进免疫程序、降低群体感染水平方面提供依据。     

单抗夹心ELISA检测免疫鸡群新城疫病毒

用SPF鸡胚将送检的免疫鸡群泄殖腔棉拭样品盲传一代，再用新城疫单抗夹心ELISA对F1代尿囊液进行新城疫病毒(NDV)快速检测，同时用世界动物卫生组织(OIE)推荐的NDV分离及鉴定的方法加以验证。通过对3423份样品的检测，检出阳性样品453份，阴性样品2959份，可疑样品11份，两种方法的阳性符合率为99．3％，阴性符合率为99．7％。对全部阳性样品进行病毒分离，经血凝(HA)和血凝抑制(HI)试验证明均含有新城疫病毒(NDV)，再将全部阳性样品分离物进一步作毒力鉴定，结果有强毒力株、中等毒力株及弱毒力株，因此用新城疫单抗夹心ELISA检测免疫鸡群泄殖腔棉拭样品F1代尿囊液新城疫病毒快速、准确率高，呈阳性者不全是NDV强毒力株感染，还有NDV中等毒力株或弱毒力株感染。     

免疫鸡群新城疫病毒强毒株感染的实验研究

ＳＰＦ试验鸡在８、２５日龄时接受了２次新城疫（ＮＤ）基础免疫，６０日龄时分别以标准新城疫病毒（ＮＤＶ）强毒株、中等毒力和弱毒疫苗株人工感染攻毒。应用单抗ＥＬＩＳＡ试剂盒，对所有试验鸡泄殖腔棉拭样品进行了３０ｄ的连续检测。结果表明：从攻毒后第３ｄ起强毒株试验组检测出多例阳性，检出高峰分别在攻毒后第４～６ｄ和１１～１５ｄ，与鸡群症状表现的时间相一致；中等毒力和弱毒疫苗株对照组均呈检测阴性。本研究证明单抗ＥＬＩＳＡ试剂盒可以检测免疫鸡群中ＮＤＶ强毒感染，为ＮＤ的监测提供了新手段。     

鉴别PRRSV野毒感染与弱毒活疫苗TJM-F92免疫d120-ELISA方法的应用

本实验研究了免疫后攻毒的GST-d120特异性抗体血清动力学变化特点,d120-ELISA和IDEXX检测不同免疫状态临床样品S/P值之间的区别与联系,并根据结果判断免疫动物是否发生野毒感染或存在弱毒疫苗的母源抗体。血清动力学实验中,免疫组6头实验动物免疫弱毒活疫苗TJM-F92(简称TJM-F92),对照组4头实验动物注射等体积PBS,第28天2组分别注射强毒TJ F3,采集血清,绘制血清动力学曲线。d120-ELISA检测结果显示,免疫组中5头免疫及攻毒后均为阴性,1头免疫1d~28d为阴性,攻毒后血清抗体水平上升并在第14天转为阳性;对照组4头动物攻毒后17d左右出现抗体阳性转化。IDEXX检测结果显示,免疫组均在第10天左右出现血清阳性转化,抗体水平逐渐上升并维持较高水平,攻毒后血清抗体无较大变化;对照组在攻毒后7d左右出现阳性转化。结果表明,d120-ELISA检出抗体阳性的时间要晚于IDEXX试剂盒10d左右,但d120-ELISA能够检测出IDEXX试剂盒无法检出的免疫TJM-F92后发生强毒感染的动物。临床应用试验中,采集并检测HP-PRRSV的TJM-F92和弱毒活疫苗JXA1-R(简称JXA1-R)免疫14d和28d后的临床血清样品,以及疑似发生PRRSV感染和未发生感染的灭活疫苗免疫猪场的样品。试验结果显示,d120-ELISA检测TJMF92免疫阳性血清为阴性;在免疫14d和28d后,d120-ELISA检出JXA1-R临床免疫血清阳性率为0%(0/15)和86.7%(13/15),相应IDEXX检出阳性率为86.7%(13/15)和100%(15/15)。d120-ELISA和IDEXX检测免疫灭活疫苗并疑似发生PRRSV感染的猪群样品的阳性率分别为45.0%(9/20)和100%(20/20),而检测未感染猪场样品的阳性率分别为0%(0/30)和40%(12/30)。综上所述,血清动力学试验和和临床应用试验结果证明,d120-ELISA可以鉴别野毒感染与TJM-F92或灭活疫苗免疫动物,为组装ELISA试剂盒、筛选并剔除TJM-F92免疫动物中发生野毒感染的动物、净化猪群奠定了基础。     

应用聚乙二醇介导的单抗夹心ELISA监测湖南新城疫病毒强毒感染

采用新城疫病毒强毒快速检测法聚乙二醇介导的单抗夹心酶联免疫吸附测定（ELISA）对湖南省新城疫病毒（NDV）强毒感染进行了监测，共检测来自30个新城疫发病群和28个无明显新城疫病症群共58个禽群的泄殖腔棉试样品1719份，并对97份样口进行了病毒分离鉴定。结果表明，NDV强毒感染的禽种多，易与其他疫病混合感染，免疫鸡群在发生形式上呈非典型化趋势，养禽场普遍存在NDV强毒且临诊健康群有一定比例的强毒感染率，这些是目前ND难以控制和净化的主要原因。结果还表明，所采用的ELISA是监测NDV强毒感染并指导免疫的可靠的快速检测方法。     

应用新城疫诊断试剂盒快速诊断非典型鸡新城疫的研究

应用新城疫单抗酶联诊断试剂盒对３群发生疑似新城疫的鸡群进行了快速诊断。采用肛门泄殖腔棉拭取样方法取样，分别取６０、３５和３８份样品，应用双单抗夹心ＥＬＩＳＡ试验检测出新城疫强毒抗原阳性分别为５、３和２份样品，诊断该３群发生非典型鸡新城疫。用病毒分离、鉴定和毒力试验的经典诊断方法验证表明，新城疫单抗酶联试剂盒诊断非典型新城疫简便、快速、准确     

胶体金法和质谱法检测禽蛋中喹诺酮类残留的比较

分别采用多克隆抗体(多抗)和单克隆抗体(单抗)制备检测喹诺酮类药物的免疫胶体金试剂盒检测杭州地区市售禽蛋样品128份,用多抗试剂盒检出24份阳性样品(占总样品量的18.8%),其中14份为强阳性样品(占总样品量的10.9%);用单抗试剂盒检出42份阳性样品(占总样品量的32.8%),其中24份为强阳性样品(占总样品量的18.8%)。所有样品再用液相-串联质谱(LC-MS/MS)法检测氟甲喹、诺氟沙星、依诺沙星等12种喹诺酮类药物残留量,检测结果为喹诺酮类残留总量100μg·kg-1的样品14份、20~100μg·kg-1的样品10份、2.0~20μg·kg-1的样品16份、0.2~2.0μg·kg-1的样品16份,2种不同的免疫胶体金试剂盒快速检测结果与质谱法的符合率分别为100%和95%。试验表明,胶体金法和质谱法各有优势且结果符合性好。     

免疫鸡群感染新城疫强毒后群体带毒情况和对生产指标的影响

应用新城疫病毒单抗ＰＥＧ夹心ＥＬＩＳＡ试剂盒对一新城疫强毒感染群连续监测，检测泄殖腔拭子带毒情况和ＨＩ抗体效价，结果在鸡群发病后３０７ｄ仍可以测出强毒。且随着时间的推移和鸡群ＨＩ抗体水平的下降，强毒感染率呈上升趋势，表明免疫鸡群感染新城疫强毒后，强毒可在群内循环传播和长期维持。     

免疫鸡群感染新城疫强毒后群体带毒情况和对生产指标的影响

应用新城疫病毒单抗ＰＥＧ夹心ＥＬＩＳＡ试剂盒对一新城疫强毒感染鸡群连续监测,检测泄殖腔拭子带毒情况和ＨＩ抗体效价,结果在鸡群发病后３０７ｄ仍可以测出强毒。且随着时间的推移和鸡群ＨＩ抗体水平的下降,强毒感染率呈上升趋势,表明免疫鸡群感染新城疫强毒后,强毒可在群内循环传播和长期维持。采用疫苗免疫把强毒感染率控制在一定水平而不致暴发新城疫,则鸡群可以保持较好的生产性能。而当强毒感染率上升较大时,则生产性能下降明显,死淘率也上升。     

应用新城疫单抗酶联试剂盒快速诊断绿孔雀新城疫

应用新城疫单抗酶联试剂对一群发生疑似新城疫的绿孔雀群进行快速诊断,采用肛门泄殖腔棉拭取样方法对病孔雀取样,应用双单抗夹心ＥＬＩＳＡ试验检出多数病死孔雀新城疫强毒抗原阳性,诊断该群绿孔雀发生了新城疫。用流行病学调查、临床症状观察、病理剖检、病毒分离、鉴定和毒力试验的经典诊断方法及新城疫疫苗紧急防疫效果观察验证表明,新城疫单抗酶联试剂盒诊断孔雀新城疫简便、快速、准确。     

ELISA方法检测动物源性食品中卡那霉素研究

为评价卡那霉素检测试剂盒的现场应用效果,结合仪器检测方法,对现场采集的样品同时进行HPLC-MS检测和ELISA检测,然后进行统计分析。结果表明,卡那霉素HPLC-MS检测和ELISA检测动物组织和肝脏样品816份,ELISA检测试剂盒检出率较高,与仪器的符合率达98.99%,卡那霉素ELISA检测试剂盒敏感性好、时间短,不存在假阴性。卡那霉素ELISA检测试剂盒可以用于动物源性食品的检测工作,适用于现场、大范围的快速筛选。     

单克隆抗体夹心ELISA试验检测鸡新城疫病毒抗原的研究

从10株抗鸡新城疫病毒(NDV)特异性单克隆抗体(MAbs) 中筛选出2株MAbs—M22和F23,分别用作包被抗体和酶标抗体而建立的MAbs—夹心ELISA试验,对提纯NDV的最小检出量为25ng/ml病毒蛋白.NDV鸡阳性血清对本试验的特异性阻断作用和与其他禽类病毒交叉反应的阴性结果,证明本试验对NDV的特异性。从临床疑为鸡新城疫的724只病鸡的口腔棉试样品中共检出阳性502只,其中200个样品与病毒分离试验结果完全一致,两者均查出阳性鸡176只。     

雏鸵鸟新城疫的快速诊治报告

根据临床症状、病理变化,采用新城疫单抗酶联免疫试剂盒对病死鸵鸟的泄殖腔及喉气管黏膜刮取样品进行快速检验,初步确诊为新城疫（ND）病毒感染。因此,对患病鸵鸟及未发病的鸵鸟分别按治疗量和预防量注射提纯的山羊抗鸡新城疫血清,配合抗生素治疗,使病鸵鸟康复,控制了疫情。通过进一步的病毒分离培养,新城疫标准阳性血清、鸡法氏袭及禽流感标准阳性血清的中和试验确诊为鸵鸟新城疫。     

应用鸡新城疫卵黄荧光抗体对非典型病例的诊断

本试验在用自制的新城疫卵黄荧光抗体对人工感染病例检查获得满意的基础上,对新城疫自然病例,特别是非典型病例以及对接种疫苗鸡的含毒期,应用新城疫卵黄荧光抗体进行了诊断和研究。结果表明,卵黄荧光抗体诊断法可100％检出新城疫病鸡;鸡只接种Ⅳ系疫苗后8天内,接种Ⅰ系疫苗后15天内体组织中含毒。应用卵黄荧光抗体诊断比其它新城疫诊断法快速、准确、简便易行,因而具有广泛的应用和推广价值。     

奶牛孕酮酶联免疫检测试剂盒的研制

为了掌握母牛孕酮水平变化信息,为发情鉴定、妊娠鉴别和卵巢疾病诊断提供参考依据,根据EHSA基本原理,研制了奶牛孕酮ELISA检测试剂盒。结果表明,采用孕酮-牛血清白蛋白（P4-BSA）交联物解决了在酶标板上包被抗原的问题,且抗原容易保存;而利用孕酮-卵清白蛋白（P4-OVA）交联物免疫兔子获得高效价抗体,能阻断1ng/mL孕酮水平;并以ELISA棋盘测定法确定P4-BSA 2000倍、血清500倍稀释为该试剂盒最佳工作浓度。该试剂盒以牛粪作为检测样品,即通过粪便中的孕酮水平变化可为奶牛发情鉴定、妊娠鉴别、繁殖障碍性疾病诊断提供可靠的技术支撑。