拮抗细菌Bacillus subtilis A30对水稻病原菌的抑制作用

由杭州郊区水稻叶围分离得到Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ Ａ３０菌株，平板检测表明它对Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｏｒｙｚａｅ ｐｖ． ｏｒｙｚａｅ、Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎｉ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｍｏｎｉｌｉｆｏｒｍｅ和Ｍａｇｎａｐｏｒｔｈｅ ｇｒｉｓｅａ等多种水稻病原真菌、病原细菌均有很好的拮抗作用。以水稻白叶枯病、水稻纹枯病为代表进行小区试验，结果表明，Ａ３０菌株的防病效果分别为５８     

果胶酶菌株与蛋白生产菌株的摇瓶混合培养

以甜菜渣为主要原料，将曲霉菌（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｓｐ．）菌株ＸＡＰ１３１２和ＸＡＰ２３４８与蛋白生产菌产阮假丝酵母菌（Ｃａｎｄｉｄａｕｔｉｌｉｓ）菌株ＳＤ和ＳＬ混合进行摇瓶培养，结果４菌株混合培养比单菌培养或３菌混合培养效果好，培养基最佳组成成分为甜菜渣４．０％，麸粉３．０％，（ＮＨ４）２ＳＯ４１．０％，糖蜜０．２％；最佳培养条件为温度３０℃，初始ｐＨ值５．６，摇床转速２５０ｒ／ｍｉｎ，最佳产酶时间为６０ｈ。     

黄原胶高产菌株HL—9901发酵培养的优化

采用黄单胞杆菌（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ）诱变株ＨＬ－９９０１进行试验。采用正交设计与统计学分析,确定出最佳发酵培养基配方为：淀粉４％,葡萄糖２％,蛋白胨０．１％,ＮａＮＯ３１％,（ＮＨ４）２ＨＰＯ４０．３％,Ｋ２ＨＰＯ４０．３％,ＭｇＳＯ４０．１％,ＣａＣＯ３０．０９％。３０ｈ时补加１．５％的葡萄糖。最终产率可达到４．０６３ｇ／１００ｍＬ,碳源转化率为５４．１７％,发酵时间可     

黄原胶高产菌株HL—9901发酵培养的优化

采用黄单胞杆菌（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ）诱变株ＨＬ－９９０１进行试验。采用正交设计与统计学分析,确定出最佳发酵培养基配方为：淀粉４％,葡萄糖２％,蛋白胨０．１％,ＮａＮＯ３１％,（ＮＨ４）２ＨＰＯ４０．３％,Ｋ２ＨＰＯ４０．３％,ＭｇＳＯ４０．１％,ＣａＣＯ３０．０９％。３０ｈ时补加１．５％的葡萄糖。最终产率可达到４．０６３ｇ／１００ｍＬ,碳源转化率为５４．１７％,发酵时间可     

植物土传病害拮抗真菌的抗药性筛选

从土壤中分离得到的４种拮抗真菌（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｋｏｎｉｎｇｉｉ、Ｔ．ｐｓｅｕｄｏｋｏｎｉｎ－ｇｉｉ、Ｔ．ｈａｒｚｉａｎｕｍ和Ｇｌｉｏｃｌａｄｉｕｍ ｓｐｐ．）分别用紫外光诱变，得到抗氧氮化铜、扑海因和多菌灵的变异菌株，这些变异蓖株对西瓜枯萎病菌（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍｆ．ｓｐ．ｍｅｌｏｎｉｓ）和生菜菌核病菌（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ ｍｉｎｏｒ）仍有较强的拮抗性。     

防治烟草赤星病农用抗生素产生菌S—10菌株发酵条件的研究

本文对Ｓ－１０菌株的液体发酵条件进行了研究，其产抗培养基为３％葡萄糖，３％玉米面，０．４％９ＮＨ４）２ＳＯ４，３％黄 饼粉，０．０４％ＭｇＳＯ４和０．４％酵母膏，Ｓ－１０菌株在３０℃条件下采用７．５％－１０％接种量，发酵初始ｐＨ值为７．４－７．６，在一定通气量下，２００ｒｐｍ经过１２０ｈ发酵其抑菌圈半径可达１．１５ｃｍ。     

稻瘟病菌的拮抗细菌筛选

自稻叶及其它禾本科杂草叶片表面分离纯化９８５株细菌分离物,分别培养在ＮＢ液体培养基中,经８０００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ后取上清液,加入稻瘟病菌分生孢子悬液中,测定对稻瘟病菌分生孢子发芽,附着胞形成的抑制作用,从而筛选出１３株对稻瘟病菌孢子芽管生长或附着胞形成具有抑制作用的拮抗细菌．采用离体稻叶接种测定,进一步筛选得到３株拮抗细菌,初步鉴定为：Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ（Ｘｈ２１６）,Ｂａｃｉｌｕｓｓｐ．（Ｘｈ２２２）及Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｓｐ．（Ｘｈ２４０）．在离体条件下,Ｘｈ２１６,Ｘｈ２２２和Ｘｈ２４０对叶瘟的防治效果分别为７２．３％,７０．５％和６７．４％．     

水稻纹枯病拮抗细菌的分离了筛选

从水稻叶鞘,根系,玉米叶鞘和土壤中以及稻纹枯病菌菌核上分离到３６０株细胞,经平板抑菌初测得５９株拮抗菌。其中,抑菌带宽０．５６－０．８４ｃｍ的７株中,除Ｂ１－２－１外,其它６个ＭＳＥ系列菌株均来自玉米叶鞘。分离材料不同,其拮抗细菌的分离率明显不同。即稻体最低（４．２５％）土壤纹枯病菌菌核最高（２３．８）,玉米居中（１６．３％）。在室内人工接种病菌条件下,测定其中４３个拮抗菌株对离体后稻秆纹枯病的控     

化学肥料对水稻纹枯病菌菌丝生长和菌核形成的影响

立枯丝核菌 (ＲｈｉｚｏｃｔｏｎｉａｓｏｌａｎｉＡＧ - 1ＩＡ)引起的纹枯病是水稻三大病害之一 ,关于化学肥料影响水稻纹枯病发生发展的报道很多 ,但化学肥料体外对病原菌的影响则很少报道 .本试验研究了氮、磷、钾对病菌菌丝生长和菌核形成的影响 .1　材料与方法　　水稻纹枯病菌 (ＲｈｉｚｏｃｔｏｎｉａｓｏｌａｎｉＡＧ - 1ＩＡ)保存于华南农业大学资环学院真菌研究室 .采用Ｃｚａｐｅｋ培养基及培养液 .氮肥为ＣＯ(ＮＨ2 ) 2 (北京南尚乐化工厂 )和 (ＮＨ4) 2 ＳＯ4(武汉制药厂 ) ;磷肥是ＮａＨ2 ＰＯ4·2Ｈ2 Ｏ(哈尔滨市新春化工厂 …     

木霉（TR－5）对病原真菌的拮抗机制和防病效果研究

从土壤中分离获得一株木霉（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｓｐ．）菌株（ＴＲ－５），用对峙法和系列稀释法测定其对立枯丝核菌（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａｓｏｌａｎｉ），禾谷丝核菌（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａｃｅｒｅａｌｉｓ），西瓜枯萎病菌（Ｆｕｓａｒｉｕｍｏｘｙｓｐｏｒｕｍ∫ｎｉｖｅｕｍ），油菜菌核病菌（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ），昆明腐霉（Ｐｙｈｔｉｕｍｋｕｎｍｉｎｇｅｎｓ）和寄生疫霉（ＰｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａＰａｒａｓｉｔｉｃａ）的拮抗作问。结果表明，ＴＲ－５菌株对６种病原真菌都具有极强的拮抗作用，主要表现为缠绕、附着在病原真菌菌丝上，同时产生吸器侵入病原真菌的菌丝，使菌丝断裂。还能分泌有毒或抗生物质抑制其生长，并具有很强的生长竞争能力。ＴＲ－５菌株对立枯丝核菌，禾谷丝核菌和西瓜枯萎病菌的有效抑制浓度为１０６～１０７个孢子／ｍｌ；对油菜菌核病菌和昆明腐霉菌为１０４～１０５个孢子／ｍｌ；而对寄生疫霉为１０５～１０６个孢子／ｍｌ。用ＴＲ－５木霉的分生孢子制剂在温室条件下对黄瓜猝倒病（Ｐｙｔｈｉｕｍａｐｈａｎｉｄｅｒｍａｔｕｍ）和黄瓜疫病（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａｄｒｅｃｈｓｌｅｒｉ）进行防治试验，效果分别     

枯草杆菌B826的化学诱变及筛选研究

枯草杆菌Ｂ８２６（ＢａｃｉｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓＢ８２６）是一株对水稻白叶枯病菌有强烈拮抗作用的细菌．本研究测定了枯草杆菌Ｂ８２６的对数生长曲线并利用化学诱变剂硫酸二乙酯（ＤＥＳ）处理对数生长期的细胞,获得了１６０个存活的菌株,其中６个菌仍保留拮抗活性或拮抗活性有所提高,其余的均丧失拮抗活性．突变菌Ｎｏ．３５能稳定地保持高效的拮抗活性和遗传．     

水稻主要病害拮抗细菌的筛选与鉴定

从稻种、稻叶、稻田土壤、稻田菌核和菜地土壤共 1 0 5份样品中共分离细菌菌株 2 6 72株 ,经拮抗性能测定 ,对水稻纹枯病菌 (Rhizoctoniasolani)、水稻恶苗病菌 (Fusari ummoniliforme)、水稻稻瘟病菌 (Maganporthegrisea)、水稻白叶枯病菌 (Xanthomonasoryzaepv .oryzae)和水稻细菌性条斑病菌 (Xanthomonasoryzaepv .oryzicola)有拮抗作用的菌株分别有 5 0 0、6 7、45、1 1和 9个。根据NA平板上菌落的形态特征 ,将 6 7株稻恶苗病拮抗细菌初步分为 7个类群 ,每一类群中选拮抗性能最强的一个菌株进行鉴定 ,结果有 4支菌株为Bacillussubtilis,另 3支菌株分别为B .pumillus、B .polymyxa和Pseudomonassp     

稻瘟菌拮抗细菌的筛选与鉴定

从不同水稻根际土壤样品中分离纯化了486株细菌。采用平板测定法和微培养离体测定试验获得12株对稻瘟菌有不同程度抑制作用的拮抗细菌。结果表明:B4,B8,B18,B31,B34,B73和B74等菌株对稻瘟菌菌丝生长抑制率均在80%以上,其培养液100%抑制稻瘟菌孢子萌发;同时对水稻纹枯病菌、油菜菌核病菌、小麦赤霉病菌、草莓炭疽病菌和黄瓜枯萎病菌等多种病原真菌有较好抑制作用,经鉴定该组拮抗细菌为枯草芽孢杆菌。B1,B43和B44菌株对稻瘟菌菌丝生长和孢子萌发有较好抑制作用,对水稻纹枯病菌具有一定的抑制作用,经鉴定为短小芽孢杆菌。B48和B59为链霉菌,对稻瘟菌的抑菌带明显,但对稻瘟菌孢子萌发和附着胞的形成抑制作用不明显。     

蔬菜根际细菌R2–2的鉴定及其抑菌活性

从云南昆明市郊蔬菜根际分离细菌,经平板对峙培养筛选出1株抑菌能力较强的菌株R2-2,通过对其进行形态观察、Biolog微生物自动鉴定系鉴定和16S rDNA序列测定及其系统发育学分析,鉴定为甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus)。对R2-2与植物病原细菌(甘蓝黑腐病菌、魔芋细菌性软腐病菌、海棠斑点病菌、水稻白叶枯病菌、水稻细菌性条斑病菌)和病原真菌(疫霉菌、尖镰孢菌、茄镰孢菌、立枯丝核菌)进行对峙试验,结果显示,R2-2对水稻白叶枯病菌和水稻条斑病菌有较强的抑菌效果,抑菌圈直径分别达6.83 cm和7.03 cm。该菌株的16S rDNA序列已在GenBank中注册,登录号为JN648098。     

拮抗细菌菌株B5423和Pf7-14对稻瘟病的防效及其在稻株上的种群动态

首先测定了离体条件下6个拮抗细菌菌株对水稻稻瘟病菌、纹枯病菌、恶苗病菌和白叶枯病菌的抑制作用。然后,在温室条件下测定了上述6个菌株对水稻稻瘟病的防治效果,并以菌株B5423和Pf7-14为代表,测定了这两个菌株在稻株上的种群动态。结果表明,上述6个菌株对水稻主要病原菌有着不同程度的抑制作用;菌株B5423对水稻稻瘟病的防效最好,施用后7d、14d的防效分别为56.23%和49.25%,显著地高于其他5个菌株;在相同的浓度下,Pf7-14(对抗生素萘啶酮酸具有天然的抗性)在稻株上的定殖能力比B5423-R(B5423的利福平抗性的突变体)强。     

植物防御素基因alfAFP(M. sativa)在毕赤酵母中的分泌表达及对水稻病原菌的抑制

 【目的】大多数的植物防御素对不同的病原菌具有抗菌活性,其中来自苜蓿种子的防御素alfAFP的转基因土豆和番茄已经被证明对病原菌具有强抗病性。进一步研究该基因对稻瘟病、纹枯病、白叶枯病三大重要病害的抑制作用,对水稻抗病基因工程研究具有重要的意义。【方法】本试验将alfAFP构建到表达载体pPIC9K上,电转化毕赤酵母（GS115）,再进行蛋白质的分泌性诱导表达,最后进行体外重组蛋白对水稻病菌的抑菌活性检测。【结果】通过15%的SDS-PAGE检测,得到大约6.5 kD的重组蛋白。alfAFP融合蛋白对水稻纹枯病、稻瘟病和白叶枯病均具有一定的抑制活性,其中对纹枯病的作用最为明显。【结论】alfAFP在酵母中成功诱导表达,并对水稻测试病菌具有一定的抑制活性,预示着alfAFP防御素基因在水稻抗病基因工程中具有潜在的应用价值。     

海洋源拮抗细菌对水稻纹枯病的防治

从连云港海域的海水和海泥中分离海洋细菌,以水稻纹枯病菌为指示菌对分离到的海洋细菌的抑菌活性进行检测,经过初筛、纯化、定量复筛,获得11株抑菌效果较好的海洋细菌.采用室内抑菌法测定了这11个活性菌株对8种植物病原真菌的抑制效果,结果表明,菌株MG-sm-3、PY-sw-1、PY-sw-9和Ns-sw-6的抑菌谱广且抑菌活性强.用硫酸铵沉淀法提取了这11个活性菌株的胞外粗蛋白,平板抑菌试验结果表明,菌株PY-sw-1的胞外粗蛋白对7种病原真菌的菌丝生长均有抑制效果,尤其对云薹链格孢(Alternaria brassicae)、灰梨孢(Pyricularia grisea)、灰葡萄孢(Botrytis cinerea)和立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)有显著抑制作用.田间试验结果表明,菌株PY-sw-1及其胞外物质对水稻纹枯病的防治效果最好,喷施后7 d的防效分别为63.2%和53.9%.以上试验结果说明一些海洋源微生物对植物病害的防治具有一定的功效.     

黄瓜疫病菌拮抗细菌的分离及鉴定

[目的]筛选对黄瓜疫病有较好稳定防治能力的生防菌。[方法]采用系列稀释法和平板涂布法对黄瓜疫病菌拮抗细菌进行初步分离,进一步通过平板对峙法对其进行筛选,并通过形态学、生理生化特征、16S rDNA序列分析方法对拮抗效果较好的细菌进行了鉴定。[结果]共分离到黄瓜疫病病原菌的拮抗细菌56株,有4株细菌对黄瓜疫病病原菌显示出较强的拮抗效果,其中LY-38菌株对黄瓜疫病病原菌拮抗带宽为6.5 mm,抑菌率高达81.2%,通过鉴定可以确定该菌株为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。[结论]为黄瓜疫病的田间生物防治提供了参考。     

杨树溃疡病菌拮抗菌发酵液抗菌谱及稳定性研究

对杨树溃疡病菌拮抗菌ZJNU8990发酵液抗菌谱和稳定性进行研究,为发酵液中抑菌活性物质分离纯化提供一定理论依据。采用平板对峙法或杯碟法测定拮抗菌株ZJNU8990发酵液对7种植物病原菌的抑菌效果,表明该拮抗菌发酵液对番茄早疫病菌和小麦赤霉病菌具有较好抑制作用,对苹果腐烂病菌、水稻纹枯病菌和烟草赤星病菌具有一定抑制作用,但对白叶枯病菌和黄瓜枯萎病菌无任何抑制作用。以杨树溃疡病菌为指示菌,采用杯碟法测定发酵液的热稳定性、酸碱稳定性及光稳定性。结果表明: 拮抗菌发酵液在温度低于90℃时,抑菌效果稳定,121℃下则抑菌活性完全丧失;在酸性条件下,随pH值降低而小幅下降,而在碱性环境中,随着pH值增加而明显降低;经紫外光或自然光照射后抑菌活性略有降低。因此认为,杨树溃疡病菌拮抗菌ZJNU8990发酵液具有一定开发价值和应用前景。     

Secondary metabolites of rice sheath blight pathogen Rhizoctonia solani Kühn and their biological activities

Eight compounds were isolated from the fermentation cultures of r ice sheath blight pathogen Rhizoctonia solani Kühn. They were identified as er gosterol(1), 6β-hydroxysitostenone(2), sitostenone(3), m-h ydroxyphenylacetic acid(4), methyl m-h ydroxyphenylacetate(5), m-hydroxymethylphenyl pentanoate(6),(Z)-3-methylpent-2-en-1,5-dioic acid(7) and 3-methoxyfuran-2-carboxylic acid(8) by means of physicochemical and spectroscopic analysis. A mong them, 2, 3, 5–8 were isolated from R. solani for the first time. All the compounds were evaluated for their biological activities. 4–6 and 8 showed their inhibitory activities on the radical and germ elongation of rice seeds. 1, 4 and 7 showed moderate antibacterial activity to some bacteria. 4, 7 and 8 exhibited weak inhibitory activities on spore germination of Magnaporthe oryzae. 8 showed moderate antioxidant activity with the 1,1-diphenyl-2-picryhydrazyl(DPPH) and β-carotene-linoleic acid assays. This is the first time to reveal compounds 5, 6 and 8 from rice sheath blight pathogen R. solani to have in vitro phytotoxic activity.