牛粪堆肥中溶解性有机物对铜绿微囊藻生理生化及产毒特性的影响

提取牛粪堆肥中的溶解性有机物(dissolved organic matter,DOM),并将DOM转移至含有铜绿微囊藻Microcystis aeruginosa FACHB905细胞的培养液中,DOM含量以溶解性有机碳(DOC)质量浓度进行衡量,分别控制培养液中DOC的终质量浓度为0、15、30、60、90、120 mg/L(分别记为CK、T1、T2、T3、T4、T5)。通过测定藻细胞密度、色素含量和藻毒素含量,研究DOM对铜绿微囊藻生理生化及产毒特性的影响。结果表明:1)M.aeruginosa FACHB905受DOM影响,在处理后第2天,各DOM处理的细胞密度与CK相比均有所增加,T4处理的细胞密度(5.97×106个/m L)最大,比CK增加了21.67%,处理后第4天,T1、T2、T3处理均能够促进细胞生长,T2处理的细胞密度(9.23×10~6个/m L)最大,比CK增加了15.27%,而T4、T5处理抑制细胞生长,处理后第6天,仅T1及T2处理能够促进细胞生长,T1处理的细胞密度(13.34×10~6个/m L)最大,比CK增加了10.35%,而T3、T4、T5处理抑制细胞生长;2)堆肥来源DOM能够抑制藻毒素的合成,单位细胞藻毒素Microcystin–LR含量在处理后第2天T5处理的最低,比CK下降了53.13%,而Dha7–Microcystin–LR含量在处理后第4天T5处理的最低,与CK比较下降了78.51%;3)各DOM处理对单位细胞内Chl–a和Carotenoid的合成没明显影响。     

抗猪FcγRⅡb多抗阻断猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体依赖增强作用研究

为验证猪FcγRⅡb在抗体依赖增强(ADE)作用中的功能,从猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)阳性血清中提取IgG并制备F(ab′)2片段,将104 TCID50的PRRSV病毒与80μg/mL的F(ab′)2片段或抗PRRSV阳性血清(中和效价1/5.9,经128倍稀释)混合,共同感染猪肺泡巨噬细胞(PAM)和Marc-145细胞,发现亚中和滴度的阳性血清能显著增强病毒对PAM的感染,但不能增强病毒对Marc-145细胞的感染;而F(ab′)2片断不能增强病毒感染;用兔抗猪FcγRⅡb多抗孵育PAM细胞,再用上述病毒与阳性血清复合物感染PAM,结果阳性血清对病毒感染的增强作用受到明显抑制。表明猪FcγRⅡb能够介导PRRSV ADE作用。     

小鼠TLR3基因双敲除打靶载体构建及巨噬细胞RAW264.7TLR3-/-细胞系的建立

[目的]建立Toll样受体3(TLR3)基因缺失的小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞系,为探索狂犬病毒感染机体过程中TLR3在固有免疫反应中的作用机制提供理论依据.[方法]采用Golden Gate Kit试剂盒组装转录激活样效应因子核酸酶(TALEN)打靶载体pTALEN-TLR3,经酶切和测序验证其连接正确后,通过脂质体瞬时转染RAW264.7细胞,转染后提取细胞DNA,用T7核酸内切酶酶切验证TALEN质粒剪切活性.[结果]TALENs左右臂分两部分连接,首先完成A、B部分的各自连接,然后分别将T1LA与T1LB、T1RA与T1RB、T2LA与T2LB、T2RA与T2RB连接,TALEN模块经过两次连接后的PCR鉴定结果显示,T1L、T1R和T2L的4个克隆均呈阳性,T2R有3个克隆呈阳性.T2L和T2R质粒共转染RAW264.7细胞后提取DNA为模板,经PCR扩增后用T7核酸内切酶进行酶切,酶切后的DNA电泳结果显示TALEN2剪切活性较强,共获得3条条带(931、555和376 bp).TALEN打靶载体pTALEN-TLR3转染RAW264.7细胞24 h后用胰酶进行消化,并加入800μg/mL G418进行筛选,7 d后获得细胞单克隆;挑选阳性细胞克隆进行T7核酸内切酶酶切鉴定及测序,结果发现4-1和4-40号细胞克隆为双敲细胞系,均缺失7 bp的核苷酸碱基,为非3整数倍碱基缺失,可造成后续基因移码突变,使细胞基因功能失活.[结论]通过TALEN技术可成功构建TLR3基因双敲除的小鼠巨噬细胞RAW264.7TLR3-/-细胞系,且可用于狂犬病毒感染细胞后细胞因子和TLR3间的关系研究.     

激素组合与水解蛋白对番茄花药愈伤增殖的影响

以4个番茄F1杂交种(C1、C2、C8、C10)和1个番茄纯系(2052)花药培养的愈伤组织为材料,研究了不同激素组合对愈伤组织增殖的影响,以及不同浓度水解酪蛋白(CH)和水解乳蛋白(LH)对愈伤组织增殖的影响。结果表明:MS(NLN)+1.00mg/L IAA+1.00mg/L 6-BA+30g/L蔗糖和MS(NLN)+0.50mg/L NAA+0.50mg/L KT+30g/L蔗糖这2种激素组合的培养基中愈伤组织生长最快,其中材料C8的增殖系数最高达0.61;愈伤组织增殖最适浓度为5.00g/L CH和0.50g/L LH,且在5个材料中C8愈伤增殖系数最大,分别为1.00和0.91。     

畜禽干扰素-γ研究进展

干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)是一种具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调节功能的细胞因子,主要由活化的T细胞和自然杀伤(Natural killer)细胞产生。干扰素因其重要的免疫调节功能而被广泛地应用于疾病的诊断及治疗过程。本研究主要对干扰素-γ诱生、作用机制、生物学活性、畜禽IFN-γ基因多态性与疾病的关系以及畜禽干扰素开发等的研究现状进行综述,以期为畜禽干扰素-γ的深入研究及其在畜禽生产中的应用奠定一定的理论基础。     

番木瓜炭疽病生防木霉菌株的初步筛选

为利用生物防治的方法抑制番木瓜炭疽病,通过测定并综合分析比较各木霉菌株的抗生作用、产孢量、不同培养基下的抑菌率、生长速度以及耐药性,从90株木霉菌株中初步筛选出拮抗番木瓜炭疽菌的优良木霉菌(Trichodermaspp.)T05-049、T8-R、T05-035和T05-044等4株菌株,其产孢量分别为1.42×109、5.45×108、4.16×108、1.38×109;在1.01 mg/L特可多的条件下,均生长良好;该4个菌株在25、20、15和10℃下生长正常,耐温性较好,对炭疽菌(Colletotrichumspp.)的抗生作用分别为3、1、1、5;分别在PDA和番木瓜培养基上于25、20和15℃下培养,木霉对胶孢炭疽菌(C.gleosporioides)的抑制率在57.05%以上,对辣椒炭疽菌(C.capcisi)的抵制率在47.87%以上.     

梅花鹿Thymosin beta 10基因RNAi慢病毒载体的构建及其对鹿茸干细胞增殖的影响

利用慢病毒干扰系统,对梅花鹿生茸区骨膜干细胞(Antlerogenic periosteum cells,AP细胞)Thymosin beta 10(Tβ10)基因进行RNA干扰(RNA Interference,RNAi),并初步研究该基因对细胞增殖的影响。结果表明:试验设计的3条针对梅花鹿Tβ10基因的shRNA序列与载体质粒p LVTHM连接成功,与p SPAX2、p MD2.G质粒共转染HEK 293T细胞,获得的重组慢病毒成功感染了AP细胞;荧光定量PCR检测结果表明,RNA干扰后Tβ10基因的mRNA水平下调,MTT试验结果显示Tβ10基因的下调可以抑制AP细胞增殖。试验成功构建了针对梅花鹿Tβ10基因RNAi载体,并成功干扰了Tβ10基因在AP细胞中的表达,基因下调最高可达35.6%,并初步确定Tβ10基因下调可抑制AP细胞的增殖。     

V_E,IGF-I和hCG对体外培养小鼠睾丸间质细胞增殖的影响

为了探究不同浓度维生素E(V_E)、胰岛素样生长因子(IGF-I)、人绒毛膜促性腺激素(hCG)对睾丸间质细胞(LCs)增殖的作用,试验通过添加不同浓度V_E,IGF-I,h CG分别处理小鼠睾丸间质细胞24,48 h,采用四唑盐比色法(MTT法)检测细胞活力。结果表明,与对照组相比,24 h时V_E组细胞活力显著增加(P0.05),IGF-I,h CG组差异不显著(P0.05);48 h时,V_E,h CG组细胞活力差异显著(P0.05),IGF-I组差异不显著(P0.05)。说明在24,48 h的IGF-I对细胞的增殖变化没有明显促进作用,V_E和h CG对细胞增殖有一定的促进作用。     

硒对白耳公鸡生精功能以及外周血浆LH和睾酮水平的影响

63日龄白耳公鸡70只随机分成三组,分别饲喂含硒0.095、0.345和0.793ppn 的日粮。检测体重、睾丸重、睾丸重/体重、精子密度;应用放射免疫测定法测定外周血浆 LH 和睾酮水平,并体外培养睾丸细胞和腺垂体细胞研究硒对睾酮和 LH 分泌的影响。结果表明,三种日粮硒水平不影响公鸡体增重;0.095ppm 硒不能满足公鸡睾丸组织生长发育和精子生成的需要,0.795ppm 硒抑制63—153日龄公鸡睾丸组织生长发育,而0.345ppm 硒可使生精功能得到较隹发挥。183日龄时,外周血浆睾酮水平和精子密度均出现组间差异,而外周血浆 LH 水平不受日粮硒水平影响;离体实验证实,硒对睾丸细胞分泌睾酮的促进作用没有直接影响,但可以促进睾丸细胞对 HCG(或 LH)的反应性,结果提示,硒可以促进睾丸细胞对 LH 的敏感性,使睾酮水平升高,从而促进生精功能。硒还能促进腺垂体细胞对 GnRH 的敏感性而间接促进释放 LH。硒还可能通过影响 FSH 水平而影响生精功能。     

粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子与生长抑素融合表达质粒对断奶仔猪生长及相关激素的影响

选择40头断奶的长大二元杂交仔猪,随机分为4组,每组10头,公母各半,其中Ⅰ组为对照组,Ⅱ～Ⅳ组分别口服以减毒沙门氏菌为载体的DNA疫苗pcS/2SS、pGM-CSF/SS和pGM-CSF+pcS/2SS,分析这些DNA疫苗对断奶仔猪的生产性能和相关激素分泌的影响.结果显示,与Ⅱ组和Ⅳ组相比,Ⅲ组平均日增重分别提高了8.37%(P＞0.05)和17.2%(P＜0.05),饲料利用率分别提高了14.8%和6.7%.Ⅱ组、Ⅲ组和Ⅳ组血浆中GH的含量有升高的趋势.Ⅱ组IGF-Ⅰ的含量一直处于较高的水平,Ⅲ和Ⅳ组在第2周后处于较低的分泌水平,Ⅲ组IGF-Ⅰ的峰值高于其他组.Ⅰ、Ⅱ和Ⅳ组T3的含量呈下降的趋势,而Ⅲ组呈上升趋势,免疫后第8周,Ⅲ组的T3分泌水平显著高于Ⅱ和Ⅳ组(P＜0.05),而与对照组差异不显著.Ⅰ组T4的含量不断降低,而Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组有不断升高的趋势,Ⅱ组和Ⅲ组T4的分泌一直保持在较高的水平.上述结果表明,粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)对SS DNA疫苗有一定的免疫增强作用,pGM-CSF/SS的免疫效果要优于pGM-CSF+pcS/2SS共免疫.     

牛磺酸对体外培养大鼠睾丸间质细胞睾酮分泌的影响

通过在基础培养液(DMEM)中添加不同水平的牛磺酸和人绒毛膜促性腺激素(HCG),研究了牛磺酸(1～100 mg/L)对体外培养大鼠睾丸间质细胞睾酮分泌性能的影响。结果表明,牛磺酸(1～100 mg/L)对体外培养大鼠睾丸间质细胞睾酮的分泌有显著的促进作用(P<0.01);而对HCG刺激的睾丸间质细胞睾酮的分泌表现出双相作用,低剂量牛磺酸对其有明显的促进作用(P<0.05),高剂量则有显著的抑制作用(P<0.05)。     

铬对产蛋鸡生殖激素分泌的影响

为探讨铬元素对产蛋鸡生殖激素分泌的影响及其机制，在基础日粮（含Cr5.09mg/kg)中分别添加铬0，5和50mg/kg饲养4个月，观察其产蛋性能，检测血浆雌二醇（F2），孕酮（P），促黄体生成素（LH）水平，并于试验结束时进行卵泡细胞的离体培养，结果表明，添加5mg/kg铬有利于产蛋率的提高及产蛋高峰期（＞90％）的持久，不同铬日粮对血浆中上述激素水平无显著影响，但在组间产蛋率出现显著差异时，试验P，LH水平也相应地比对照组高，离体试验表明，铬可以通过直接对卵泡发生作用促进E2的合成与分泌（P＜0．01），对P分泌也有促进趋势。     

牛磺酸对雄性大鼠生殖激素分泌水平的影响

通过给Wistar雄性大鼠饮用添加不同水平牛磺酸和B-丙氨酸(牛磺酸转运抑制荆)的自来水,研究了牛磺酸时雄性大鼠促卵泡生成素、促黄体生成素、雌二醇和睾酮4种生殖激素分泌水平的影响.结果表明:牛磺酸可明显促进雄性大鼠促卵泡生成素、促黄体生成素和睾酮的分泌(P＜0.05).而对雌二醇的分泌则没有明显影响(P＞0.05).     

Nesfatin-1对初情期雌性大鼠促性腺激素及其mRNA表达的影响

为探究侧脑室注射Nesfatin-1对雌性大鼠促性腺激素水平及其mRNA表达的影响,对初情期前雌性大鼠的侧脑室注射Nesfatin-1,采用实时荧光定量PCR法检测促黄体素(Luteinizing hormone,LH)和促卵泡素(Folliclestimulating hormone,FSH)mRNA在垂体中的变化,采用酶联免疫分析法检测血清LH和FSH的浓度。结果表明:在初情期前的雌性大鼠中,Nesfatin-1可促进初情期启动、增加卵巢重量、血清LH水平、垂体LH mRNA和FSH mRNA的表达增加(P0.05);但Nesfatin-1对FSH水平的影响不突出,注射后15min时增加(P0.05),60min不产生影响(P0.05)。侧脑室注射Nesfatin-1后15和60min均能提高血清LH水平,15min时提高更明显(P0.05),但对FSH水平的影响不尽相同。在成年的雌性大鼠中,Nesfatin-1对LH和FSH的分泌不产生影响(P0.05)。Nesfatin-1可通过下丘脑诱导和增强初情期过渡阶段雌性大鼠LH和FSH的释放及LH、FSH mRNA的表达。     

Human chorionic gonadotropin (hCG) regulates the expression of Steroidogenic acute regulatory protein (StAR) via the ERK1/2 pathway

It has previously been shown that Human Chorionic Gonadotropin (hCG) can stimulate steroidogenesis in Leydig cells. In the present study, the mechanisms of hCG-stimulated steroidogenesis in Leydig cells of immaturated pigs were investigated. It was found that both hCG and 8-Br-cAMP could enhance the expression level of both the Steroidogenic acute regulatory protein (StAR) and mRNA, and increase the activity of extracellular signal-regulated kinase1/2 (ERK1/2) significantly depending on stimulating time. However, the effect of 8-Br-cAMP was more significant than that of hCG. While appending the inhibitor of Protein Kinase A (PKA) to Leydig cells in culture, the expression level of StAR protein, mRNA and the activity of ERK1/2 began to drop significantly, but the level of StAR mRNA could still be detectable. While appending the inhibitor of MAPK (PD98059), the expression level of StAR protein and mRNA declined significantly. These results infer that at the beginning of hCG stimulation, hCG increases the level of StAR protein by cAMP-PKA. With prolonged stimulating time, hCG increases the level of StAR protein through cAMP-PKA-ERK1/2. Translated from Acta Veterinaria et Zootechnica Sinica, 2006, 37(11): 1154–1159 [译自: 畜牧兽医学报]     

钴对泰和母鸡生殖内分泌活动的影响

将８０只泰和母鸡随机分成４组，每组２０只，分别喂给含钴０．２６ｍｇ／ｋｇ，５．２６ｍｇ／ｋｇ，５０．２６ｍｇ／ｋｇ，１００．２６ｍｇ／ｋｇ的日粮４个月。试验期间用放射免疫法监测鸡血浆中促黄体生成素（ＬＨ）、雌二醇（Ｅ２）和孕酮（Ｐ）含量的变化情况。观察钴对Ｅ２，Ｐ分泌的直接影响。结果表明：日粮钴能引起血浆ＬＨ和Ｐ值升高，但随着钴在机体内的蓄积，高钴组Ｐ值显下降；日粮然对Ｅ２的影响较小。     

山羊胚胎体外培养和移植的研究

用FSH、LH、PMSG、HCG对40只山羊进行超数排卵处理，平均每只排卵21．5枚，回收11．5枚胚胎。超数排卵和卵子回收数，FSH分别为24和14枚，PMSG为19和9枚。将正常的30枚1细胞，12枚2细胞和45枚4细胞胚胎在TCM──199培养液，5％CO2和38．5℃环境中培养60－78小时，65．23％的胚胎可发育至囊胚，移植6只受体羊。妊娠检查已孕3只。     

胰岛素对初情期前母猪垂体细胞促性腺激素释放及生长激素分泌的影响

[目的]探讨胰岛素对猪垂体前叶细胞无血清单层培养细胞分泌促卵泡素(FSH)、促黄体素(LH)、生长激素(CH)的影响。[方法]24头140日龄、体重17 kg的母猪被分成高、中、低3个能量组,利用无血清单层培养垂体模型,并用放射免疫法测定细胞液促卵泡素、促黄体素和生长激素浓度。[结果]在不同能量水平上,胰岛素对单层无血清培养垂体细胞FSH、LH及GH释放能力的影响有显著差异(P<0.05),高能组较高,低能组较低。[结论]首次研究了在初情期前母猪体外培养垂体细胞中添加胰岛素对垂体细胞分泌激素的影响,证实代谢激素在初情期前母猪下丘脑-垂体-卵巢水平上调节生殖机能。     

壮阳促孕散对肾阳虚大鼠垂体-性腺轴分泌激素的影响

[目的]研究中药壮阳促孕散对肾阳虚大鼠垂体-性腺轴分泌激素的影响。[方法]用氢化可的松造大鼠肾阳虚模型,造模7 d,造模同时中药治疗组和阳性对照组灌胃给药13 d,放射免疫法测定血清睾酮(T)、促黄体生成激素(LH)和促卵泡生成激素(FSH)。[结果]模型对照组造模后出现明显的阳虚证表现,血清中T下降,LH、FSH升高,给药后阳性对照组、中药治疗组血清中T升高,LH、FSH下降。[结论]中药壮阳促孕散可调节肾阳虚大鼠血清中LHF、SH和T的分泌。     

天津白公猪性发育过程中促黄体素和睾酮变化规律

用放免法测定了6头天津白公猪从出生到7月龄之间外周血清中促黄体素(LH)和睾酮(T)浓度的变化规律。结果显示,LH和T浓度变化规律基本一致。LH和T均从出生后便开始快速上升(P<0.05),并均在0.5月龄达到首次高峰后便下降。LH浓度在3~4.5月龄之间相对较高(P<0.05),并于4月龄时达到峰值,之后出现一定程度下降并保持相对稳定。T浓度在1.5~3月龄之间维持在极低水平,3.5~4月龄之间有一定程度的上升但不显著;随后急剧上升,4.5月龄时T浓度极显著升高(P<0.01);之后呈现逐渐的、不显著的上升,但7月龄时T浓度显著高于4.5月龄值。结果表明,天津白公猪的LH和T两激素的分泌范型在5~7月龄之间逐渐成熟。