小鼠TLR3基因双敲除打靶载体构建及巨噬细胞RAW264.7~(TLR3-/-)细胞系的建立

【目的】建立Toll样受体3(TLR3)基因缺失的小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞系,为探索狂犬病毒感染机体过程中TLR3在固有免疫反应中的作用机制提供理论依据。【方法】采用Golden Gate Kit试剂盒组装转录激活样效应因子核酸酶(TALEN)打靶载体p TALEN-TLR3,经酶切和测序验证其连接正确后,通过脂质体瞬时转染RAW264.7细胞,转染后提取细胞DNA,用T7核酸内切酶酶切验证TALEN质粒剪切活性。【结果】TALENs左右臂分两部分连接,首先完成A、B部分的各自连接,然后分别将T1LA与T1LB、T1RA与T1RB、T2LA与T2LB、T2RA与T2RB连接,TALEN模块经过两次连接后的PCR鉴定结果显示,T1L、T1R和T2L的4个克隆均呈阳性,T2R有3个克隆呈阳性。T2L和T2R质粒共转染RAW264.7细胞后提取DNA为模板,经PCR扩增后用T7核酸内切酶进行酶切,酶切后的DNA电泳结果显示TALEN2剪切活性较强,共获得3条条带(931、555和376 bp)。TALEN打靶载体p TALEN-TLR3转染RAW264.7细胞24 h后用胰酶进行消化,并加入800μg/m L G418进行筛选,7 d后获得细胞单克隆;挑选阳性细胞克隆进行T7核酸内切酶酶切鉴定及测序,结果发现4-1和4-40号细胞克隆为双敲细胞系,均缺失7 bp的核苷酸碱基,为非3整数倍碱基缺失,可造成后续基因移码突变,使细胞基因功能失活。【结论】通过TALEN技术可成功构建TLR3基因双敲除的小鼠巨噬细胞RAW264.7TLR3-/-细胞系,且可用于狂犬病毒感染细胞后细胞因子和TLR3间的关系研究。     

丹麦沙门氏菌控制计划简介

文章介绍了丹麦肉用仔鸡、蛋鸡和猪的沙门氏菌控制计划。通过综合控制养殖场、屠宰场和食品加工厂 ,实施畜禽监控、清除感染动物和根据已知风险将动物和动物产品进行分类管理等方法 ,丹麦人的食源性沙门氏菌病已经显著下降。 2 0 0 1年 ,丹麦因实施沙门氏菌控制计划而节省了 2 550万美元。该年度沙门氏菌控制花费金额为 1 4 1 0万美元 (猪肉每千克花费 0 0 75美元 ,肉用仔鸡和蛋每千克为 0 0 2美元 ) ,这些费用几乎都由企业负担。     

野生鸟类高致病性禽流感抗体水平检测

高致病性禽流感对禽类及人类危害十分严重.高致病性禽流感流行病学特点之一是随野生鸟类的迁徙,该病在全球广泛扩散和蔓延.野生鸟类在紧急免疫后的血清抗体水平直接关系到疫情的控制、养禽业的发展以及人类的健康.我国GB/T 18936高致病性禽流感诊断技术对火鸡、鸭、鹅(包括野生鸟类)等禽类接种禽流感疫苗免疫效力评价缺乏足够的血清学依据,国际国内对野生鸟类血清抗体水平检测资料比较欠缺.因此对野生鸟类高致病性禽流感血清抗体水平进行检测,就显得十分重要和必要.     

加强中德财政合作慈利造林项目后期管理的思考

慈利县中德财政合作造林项目经过近十年的建设,取得可喜的成就,而在项目实施过程中因技术、资金、经营机制等原因制约项目的发展.提出了加强后期管理技术,实现可持续经营,完善经营机制,强化技术培训,旨在提高造林成效,规范管理,进一步指导森林经营者从事项目后期经营管理有着十分现实和长远意义.     

狂犬病病毒SYBR-GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立

狂犬病病毒为不分节段单链负股的RNA病毒,属弹状病毒科狂犬病病毒属。世界上几乎所有国家都有狂犬病发生,狂犬病病毒能够使所有温血动物发病致死,死亡率高达100%。本研究根据GenBank中的狂犬病病毒M基因序列,选择保守区域设计引物,通过对SYBR-GreenⅠ实时荧光PCR反应条件进行优化,建立了用于检测狂犬病病毒的SYBR-GreenⅠ实时荧光PCR方法。结果显示,建立的狂犬病病毒实时荧光定量PCR方法,具有特异性强、灵敏度高、重复性好的优点,是开展狂犬病的临床检测的有力工具。     

农林高校专业思想教育探析

正党的十九大报告从满足人民美好生活需要的角度提出了乡村振兴和健康中国战略,战略实施最关键的要素就是人才,这直接关系到战略的实施成效。无论在任何时期,人才培养始终是高校最首要的责任,培养高水平高素质的人才是高校的立身之本。实现乡村振兴,建设健康中国,更     

猪9型链球菌的分离鉴定及其生物学特性研究

为确诊某猪场猪发病死亡原因并调查分离菌株的致病性与耐药情况,用常规方法分离细菌,并对分离菌进行培养特性、16 S rDNA测定及致病性、毒力基因和耐药性检测。结果显示,从病死猪分离到1株9型猪链球菌,与GenBank收录的9型猪链球菌GZ0565同源性高达99.9%。毒力因子检测为cps9H~+ orf2~+ gdh~+ fdps~+毒力型,小鼠致病性试验鉴定为强毒株。药敏试验和耐药基因检测结果显示,该菌株对呋喃妥因、环丙沙星、头孢哌丁等药物高敏,对苯唑西林、氨曲南、卡那霉素、复方新诺明、多黏菌素B、林可霉素等药物完全耐药,存在四环素类、氨基糖苷类、磺胺类、喹诺酮类耐药基因。研究表明,此次疫情由9型致病性猪链球菌引起。     

加强金融职业道德教育促进社会主义金融事业健康发展

金融事业是现代经济的核心,担负着稳定货币、发展经济的重任。金融工作做得好坏,与社会的稳定、国家的繁荣发展息息相关。历史和现实的经验证明,做好金融工作,关键是要有一支政治可靠、道德高尚、精通业务的干部职工队伍,万事以人为本,思想与道德是人的行动指南。因此,提高认识,加强领导,持之以恒地开展职业道德教育工作是摆在我们所有金融工作者面前的首要工作。一、关于金融职业道德的理解金融职业道德是指金融从业人员在经营活动中的行为规范的总和以及与此相关的职业行为,用以调整金融行业内部与其他行业之间,与社会之间的利益关系。我…     

丹麦沙门氏菌病的控制计划及其效果

在20世纪80年代中期，由于食用动物（肉用仔鸡、猪肉）引发的人沙门氏菌病迅速增加，引起了丹麦政府的高度重视，同时也为了保证丹麦出口动物产品的质量，丹麦政府于20世纪80年代后期在养殖业中制定实施了丹麦国家沙门氏菌控制计划。对肉用仔鸡、蛋鸡、蛋品和猪沙门氏菌进行控制。通过综合控制养殖场、屠宰场和食品加工厂，实施畜禽监控、清除感染动物和根据风险将动物和动物产品进行分类管理等具体措施，养殖业中沙门氏菌感染明显减少，人的动物源性沙门氏菌病也显著下降，控制措施达到了预期的效果。成为世界上为数不多的成功控制沙门氏菌的国家之一。