小鼠TLR3基因双敲除打靶载体构建及巨噬细胞RAW264.7TLR3-/-细胞系的建立

[目的]建立Toll样受体3(TLR3)基因缺失的小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞系,为探索狂犬病毒感染机体过程中TLR3在固有免疫反应中的作用机制提供理论依据.[方法]采用Golden Gate Kit试剂盒组装转录激活样效应因子核酸酶(TALEN)打靶载体pTALEN-TLR3,经酶切和测序验证其连接正确后,通过脂质体瞬时转染RAW264.7细胞,转染后提取细胞DNA,用T7核酸内切酶酶切验证TALEN质粒剪切活性.[结果]TALENs左右臂分两部分连接,首先完成A、B部分的各自连接,然后分别将T1LA与T1LB、T1RA与T1RB、T2LA与T2LB、T2RA与T2RB连接,TALEN模块经过两次连接后的PCR鉴定结果显示,T1L、T1R和T2L的4个克隆均呈阳性,T2R有3个克隆呈阳性.T2L和T2R质粒共转染RAW264.7细胞后提取DNA为模板,经PCR扩增后用T7核酸内切酶进行酶切,酶切后的DNA电泳结果显示TALEN2剪切活性较强,共获得3条条带(931、555和376 bp).TALEN打靶载体pTALEN-TLR3转染RAW264.7细胞24 h后用胰酶进行消化,并加入800μg/mL G418进行筛选,7 d后获得细胞单克隆;挑选阳性细胞克隆进行T7核酸内切酶酶切鉴定及测序,结果发现4-1和4-40号细胞克隆为双敲细胞系,均缺失7 bp的核苷酸碱基,为非3整数倍碱基缺失,可造成后续基因移码突变,使细胞基因功能失活.[结论]通过TALEN技术可成功构建TLR3基因双敲除的小鼠巨噬细胞RAW264.7TLR3-/-细胞系,且可用于狂犬病毒感染细胞后细胞因子和TLR3间的关系研究.     

山环乡是怎样抓好养牛生产的

盘安县山环乡是一个群山怀抱、山多地少的深山区。1983年底全乡养牛675头,比1977年的410头,增加了265头,增长64.6％,自1979年以来,连续5年上升。他们的经验是:     

圆头蚊母树扦插繁殖试验

将ABT2号生根粉浓度、扦插基质、插床覆盖处理3个因素分别设置3个水平,采用正交试验设汁L_9(3~4)对圆头蚊母树(Distylium buxifolim var.rotundum)进行扦插繁殖试验;并采用正交试验最优组合,进行了不同年龄母树插穗与扦插时间的单因素扦插对比试验.结果表明,生根率、根长度、生根数在生根粉浓度、扦插基质、扦插时间之间的差异极显著;不同插床覆盖与不同年龄母树插穗处理的生根率、生根数差异极显著,根长度则无显著差异.以圆头蚊母树1年生母树插穗,用ABT2号生根粉200 mg/kg浓度浸泡2 h,黄心土基质,黑色农膜覆盖,在秋季进行扦插,扦插繁殖效果较好.     

一例猪瘟病毒、蓝耳病毒和圆环病毒混合感染的病例调查

正1基本情况以培育中猪为主要业务的某养猪场,分别于2016年4月1日(130头)和4月20日(80头)从不同猪场购进仔猪210头进行饲养,在购进后委托村兽医对仔猪进行免疫接种,免疫程序如表1。2临床症状2016年6月6日猪群开始发病,仔猪陆续出现腹部和臀部皮肤发红症状,体温升高达41℃以上,食欲下降或废绝,发病后期病猪皮肤、耳朵颜色逐渐发紫,病猪怕冷,喜欢扎推,拉水样绿色粪便,病程一般3~5天。6月22日进行采样送检。截     

提高仔猪成活率的技术措施

在养猪生产中，仔猪死亡一直是制约整个行业发展的重要因素．本文结合仔猪的生理特点．从生产实际出发，提出一些提高仔猪成活率的综合技术措施。     

两株H1N1亚型重组流感病毒的猪致病性研究

选取2种不同宿主来源的新型甲型重组H1N1亚型流感病毒(犬流感病毒(A/canine/Guangxi/QZ5/2013)(简称CIV-QZ5)和猪流感病毒(A/swine/Guangxi/QZ5/2014)(简称SIV-QZ5),以猪为动物模型,分别以106 PFU/mL病毒剂量和气管攻毒的方式感染3周龄仔猪,从而探究新型甲型重组犬流感病毒对猪的致病性。试验发现CIV-QZ5及SIV-QZ5均能有效感染仔猪,攻毒仔猪均出现发热(≥39.5℃)、流鼻涕、食欲减退、活动减少等流感症状,其中CIV组出现1头仔猪(A3)死亡。通过对肺脏灌洗液进行病毒滴定,发现CIV组在攻毒后3d和5d在肺脏的复制能力较SIV组强,最高达到3.12log10PFU/mL。病理剖检发现,肺脏出现不同程度的实变。肺脏病理切片发现两组均出现不同病变,其中以死亡仔猪(A3)最为明显,主要以支气管上皮细胞坏死脱落,肺泡壁增厚,肺泡腔以及支气管内有大量的弥漫性浸润的单核细胞为主要特征。结果表明,猪源甲型重组CIV不仅能引发猪出现明显流感症状,而且能有效地在肺脏复制,为了解潜在的猪-犬跨宿主传播机制奠定了基础。     

一例猪急性传染性胸膜肺炎和圆环病毒混合感染病例的诊治

正2016年5月份,广西玉林市福绵某自繁自养的6 000头规模猪场中部分100~130日龄中大猪陆续出现高热、咳嗽症状,随即出现呼吸困难,迅速死亡的现象,最初使用青霉素、庆大霉素、鱼腥草等药物治疗,并在饲料中添加了一些柴胡、穿心莲之类的中成药,效果不明显。1临床症状患畜突然发病,病猪体温升高至41℃~42℃,精神沉郁,废食,喘气,心率增加,出现短暂的腹泻。后期心力衰竭,呼吸困难,鼻、耳、眼及后躯皮肤发